1、第十五章 革兰阳性需氧杆菌 第一节 炭疽芽胞杆菌 第二节 蜡样芽胞杆菌 第三节 产单核细胞李斯特菌和红斑丹毒丝菌 第四节 阴道加特纳菌 第五节 棒状杆菌属 第六节 诺卡菌属和放线菌属,The end Thank you,第一节 炭疽芽胞杆菌,炭疽芽胞杆菌是需氧芽胞杆菌中致病力最强的一种，引起人和动物炭疽病；可多途径传染，自然感染以皮肤炭疽为主，生物武器感染以吸入性感染为主；临床类型可分为皮肤炭疽、肺炭疽、肠炭疽、脑膜炎型炭疽；病人最后死于败血症。炭疽病愈后可获持久免疫力。,一、分类 二、细菌特性 三、临床意义 四、微生物学检验 五、耐药性检测 六、其他 七、结果分析及报告,返回,炭疽芽胞杆菌,
2、第二节 蜡样芽胞杆菌,一、分类 二、细菌特性 三、临床意义 四、微生物学检验 五、耐药性检测 六、结果分析及报告,返回,第三节 产单核细胞李斯特菌和红斑丹毒丝菌,一、产单核细胞李斯特菌 二、红斑丹毒丝菌,返回,第四节 阴道加特纳菌,一、分类 二、细菌特性 三、临床意义 四、微生物学检验 五、耐药性检测 六、结果分析及报告,返回,第五节 棒状杆菌属,一、分类 二、白喉棒状杆菌 三、其他棒状杆菌,返回,第六节 诺卡菌属和放线菌属,一、诺卡菌属 二、放线菌属,返回,需氧芽胞杆菌属主要种类 炭疽芽胞杆菌（B.anthracis） 蜡样芽胞杆菌（B.cereus） 蕈状芽胞杆菌（B.mycoides）
3、巨大芽胞杆菌（B.mebateryum） 苏云金芽胞杆菌（B.thuringiensis） 嗜热脂肪芽胞杆菌,返回,传播途径：多途径 临床类型：皮肤炭疽 肺炭疽 肠炭疽等,返回,细菌特性,返回,形态特征 培养特性 生化反应 抗原性 抵抗力,抗原构造,细菌性抗原（1）菌体多糖抗原（2）荚膜多肽抗原由质粒pOX2编码（3）芽胞抗原炭疽毒素由质粒pOX1编码（1）保护性抗原（PA） 具有外毒素B片段功能能与靶组织结合（2） 致死因子（LF）具有A片段功能（3） 水肿因子（EF） 发挥毒素效应,返回,（一）标本的采集与处理 （二）检验程序 （三）检验方法 （四）鉴定试验 （五）鉴别炭疽芽胞杆菌与其他需
4、氧芽胞杆菌的鉴别要点,返回,标本采集,炭疽患者炭疽动物疑似污染物标本处理,返回,标本痰、呕吐物、脑脊液 血液 皮毛、腐败脏器等标本 及炎症分泌物 直接涂片 荚膜肿胀试验 2%家兔血清肉汤 肉汤增菌培养 以生理盐水 制成悬液经快速增菌（374h） 加温或饱和尿素处理革兰染色 荚膜染色 血琼脂平板或戍烷 Ascvoil试验脒琼脂平板0.2ml注射于小白鼠 菌落观察涂片 革兰染色镜检 2%兔血清肉汤增菌（48h）腹腔8h后解剖动力观察 生化反应 串珠试验 噬菌体 青霉素 毒力试验裂解试验 抑制试验初步报告确定报告炭疽芽胞杆菌的检验程序,返回,检验方法,显微镜检查 分离培养接种BAP卷发状菌落接种于戊
5、烷脒多粘菌素B观察菌落特征接种于肉汤絮状沉淀生长 免疫学检测 核酸检测,返回,免疫学检测 Ascolis试验,病畜腐败脏器、毛皮、大批肉食及其制品不能分离培养时使用。炭疽杆菌菌体抗原具有耐高热特性，在尸体组织和皮毛中数年仍能检测相出，故可作追溯性诊断。,返回,核酸诊断,从质粒中提取编码PA的pOX11.96kbDNA片段,经PCR扩增,制备32P标记的核甘酸探针,用原位杂交检测标本中相应基因片段。该探针特异性强，重复性好。,返回,1. 标本直接检查 2. 重要鉴定试验 （1）串珠试验 （2）青霉素抑制试验 （3）青霉素串珠和抑制联合试验 （4）重碳酸盐毒力试验 （5）动物试验 （6）植物凝集素
6、试验 （7）噬菌体裂解试验,返回,炭疽芽胞杆菌与其他需氧芽胞杆菌的鉴别鉴别项目 炭疽芽胞杆菌 枯草芽胞杆菌 蜡样芽胞杆菌及其他需氧芽胞杆菌形态 菌体两端平截、长链 两端钝园、短链 两端钝园、短链 荚膜 多肽荚膜 - - 动力 - + + 菌落 卷发状，有毒株为M型 锯齿状、R型 蜡样或R型 肉汤生长 絮状沉淀、上层清 形成菌膜 均匀混浊有菌膜 卵磷脂酶 + - + 溶血反应 不溶或微溶血 溶血 溶血 Ascolis试验 + - - 串珠试验 + - - 青霉素抑制试验 + - - 植物凝集素试验 + - - 荚膜肿胀试验 + - - （和荧光抗体染色） 动物毒力试验 + - 蜡样芽胞杆菌的肠毒
7、素可致小鼠等 动物发病致死，但不产生荚膜，其 他需氧芽胞杆菌（-） 噬菌体裂解试验 + - -,返回,细菌特性,形态特征 培养特性 生化反应 抵抗力,返回,致病物质（1） 耐热性的呕吐型毒素（2） 不耐热腹泻型肠毒素 所致疾病（3） 食物中毒（4） 免疫功能低下或应用免疫抑制剂的患者，引起心内膜炎、败血症和脑膜炎，眼外伤后感染可引起全眼炎等,返回,微生物学检验,（一）标本的采集与处理 （二）检验程序 （三）检验方法 （四）鉴定试验,返回,检验方法,1. 直接镜检 2. 活菌计数 3. 分离培养 4. 鉴别试验,返回,报告结果,样品,活菌计数 直接接种 直接涂片染色镜检,普通琼脂平板 卵黄琼脂平
8、板 血琼脂平板,生化反应,返回,(一) 分类 (二) 细菌特性 (三) 临床意义 (四) 微生物学检验 (五) 耐药性检测 (六) 结果分析及报告,返回,临床意义,传染途径 致病物质 所致疾病,返回,传染途径,（1）以粪口途径为主（2）经胎盘、产道可感染胎儿和新生儿（3）与病畜接触可致眼、皮肤局部感染（4）若污染奶及其制品可引起食物中毒,返回,致病物质,（1）李斯特溶素（2）菌体表面成分,返回,易感者：免疫缺陷和各种原因所致免疫力 低下者所致疾病：（1）伴EB病毒感染可引起传染性单核 细胞增多症（2）对成人易引起脑膜炎、菌血症,返回,(一) 分类 (二) 临床意义 (三) 细菌特性 (四) 微
9、生物学检验 (五) 耐药性检测 (六) 结果分析及报告,返回,产单核细胞李斯特菌,形态特征 培养特性 生化反应 抗原性 抵抗力,返回,1.标本的采集 2.检验程序 3.鉴定试验,返回,标本10%CO237菌（2支） 4冷增菌每24h一次，共4次，以后每周一次，至少4周萘啶酸血平板 选择性平板挑取可疑菌落涂 半 普 普 动片镜 固 通 通 物染检 体 肉 斜 试色 汤 面 验触酶 其它试验 生化,直接涂片 200g/L NaCL 2448h 分离,染色镜检 心脑浸汤增 培养,返回,1.标本的采集 2.检验程序 3.鉴定试验,返回,细菌特性,形态特征 培养特性 生化反应,返回,红斑丹毒丝菌的检验程
10、序,标本直接涂片 接种小白鼠 心备分离培养 37 24h肉汤增菌培养革兰染色 血琼指平板37 24-48h镜硷 观察菌落涂片染色镜检 纯培养生化反应 动物试验,返回,与产单核细胞李斯特菌的鉴别,产单核细胞李斯特菌 红斑丹毒丝菌触酶试验 + -动力试验 + -MR试验 + -V-P试验 + - 溶血试验 + - 七叶苷水解试验 + - 分解阿拉伯糖 - +TSI中产硫化氢 - +,返回,细菌特性,形态染色 培养特性 生化反应,返回,临床意义,所致疾病（1） 造成阴道微生态平衡失调和阴道分泌 物性质改变的一组综合征细菌性阴 道病（BV）（2） BV可导致妇产科多种严重并发症，（3） 引起新生儿败血
11、症,返回,微生物学检验,（一）检验程序（二）标本的采集线索细胞（Clue cell）检查 （三）检验方法 （四）耐药性 （五）结果分析和报告,返回,检验程序,分泌物（阴道、宫颈）涂片 分离培养 新鲜湿片染色 （5%人血平板） （找clue cell）镜检溶血小菌落纯培养（5%人血平板）触酶、氧化酶试验（一）推定报告 GV的主要鉴定试验 判定报告：GV,返回,检验方法,1显微镜检查 2分离培养 3鉴定依据： （1）线索细胞（2）pH测定 （3）胺试验,返回,1.标本直接镜检 2.分离培养 3.生化反应 4.与其他细菌的鉴别,返回,分离培养,在 BAP形成狭窄溶血，在半固体培养基中生长成扩散呈倒松
12、树状，4冷增菌可提高分离阳性率。,返回,与其他细菌的鉴别,1.与类白喉杆菌幼龄为革兰阳性，陈旧为革兰阴性 25动力阳性而不符合革兰阴性杆菌本菌 2.与B群链球菌相同：呈短链状排列，37无动力，CAMP试验阳性鉴别：触酶试验 3.与粪肠球菌相同：耐盐、耐碱、耐胆汁鉴别：触酶试验。,返回,分类,白喉棒状杆菌（C.diphtheriae） 假白喉棒状杆（C.Pseudodiphtheriticum） 干燥棒状杆菌（C.xerosis） 假结核棒状杆菌（C.pseuotuberculosis） 溶血棒状杆菌（C.haemolyticum） J-K群棒状杆菌（C.Jekeium-CDC groupJK）
13、,返回,(一) 细菌特性 (二) 临床意义 (三) 微生物学检验 (四) 耐药性检测 (五) 结果分析及报告,返回,白喉棒状杆菌为急性呼吸道传染病白喉的病原菌，白喉毒素为其致病物质，所形成的假膜可致患者窒息。,返回,传播途径 致病物质 致病作用 所致疾病白喉,传播途径 以飞沫和玩具等为媒介经呼吸道传染,返回,致病物质,白喉毒素 索状因子,返回,致病作用,白喉毒素具有强烈细胞毒作用，可使局部粘膜上皮细胞产生炎症、渗出和坏死反应，渗出的纤维素和局部细菌、炎症细胞、坏死粘膜紧密结合在一起形成假膜，不易拭去。若假膜延伸并脱落于气管，可致患者于疾病早期窒息死亡。,返回,白喉,返回,1.标本的采集 2.检
14、验程序 3.标本直接镜检 4.分离培养 5.鉴定试验,返回,1.形态特征：异染颗粒 2.培养特性 3.生化反应 4.抗原性 5.抵抗力,返回,标本的采集检验程序 检验方法,返回,微生物学检验,白喉棒状杆菌检验程序,咽拭子直接涂片镜检 吕氏血清斜面 亚碲酸盐血琼脂平板 血琼脂平板 （革兰氏染色及 371224h 372448h 371618h 异染颗粒染色）涂片染色镜检（革兰氏染色和异染颗粒染色 观察菌落特点涂片染色镜检 生化反应 毒力试验,返回,白喉棒状杆菌检验方法,显微镜检查分离培养鉴定（1）亚碲酸钾血平板形成黑色菌落（2）毒力实验（3）人群机体免疫力检测,返回,放线菌属,分类 细菌特性 （
15、1）形态染色（2）培养特性（3）生化反应 临床意义 微生物学检验 耐药性 结果分析和报告,返回,微生物学检验,检验程序 标本采集 检验方法（1）显微镜检查（2）分离培养,返回,检验程序,脓汁、痰液、组织中硫磺颗粒涂片染色镜检 分离培养 （革兰染色、HE染色）接种液体培养基（葡萄糖 接种BAP或牛心脑浸液肉汤或硫乙醇酸钠肉汤） 琼脂培养基培养物涂片染色镜检 生化反应鉴定（革兰染色、HE染色）,返回,诺卡菌属,分类 细菌特性 （1）形态染色（2）培养特性临床意义 微生物学检验 耐药性 结果分析和报告,返回,实验诊断,检验程序 标本采集 检验方法（1）显微镜检查（2）分离培养（3）免疫学检测（4）动
16、物接种,返回,检验程序,脓汁、痰液、组织中硫磺颗粒涂片染色镜检 分离培养 （革兰染色、HE染色）接种液体培养基（葡萄糖 接种BAP或牛心脑浸液肉汤或硫乙醇酸钠肉汤） 琼脂培养基培养物涂片染色镜检 生化反应鉴定（革兰染色、HE染色）,返回,炭疽杆菌革兰染色,返回,炭疽杆菌荚膜,炭疽杆菌传染途径和所致疾病,返回,返回,返回,Elik平板毒力试验,炭疽杆菌卷发状菌落,返回,炭疽杆菌在血平板上的菌落,返回,蜡样芽胞杆菌革兰染色,返回,蜡样杆菌在血平板溶血,返回,产单核细胞李斯特菌,返回,红斑丹毒丝菌,白喉杆菌Albert染色,白喉杆菌Neisser染色,返回,返回,白喉杆菌亚碲酸钾血平板菌落,返回,白喉杆菌亚碲酸钾血平板菌落,返回,红斑丹毒丝菌产H2S,返回,衣氏放线菌革兰染色,衣氏放线菌硫磺颗粒压片,衣氏放线菌硫磺颗粒,返回,衣氏放线菌在厌氧平板上粗糙型菌落,星型奴卡菌革兰染色,返回,星型奴卡菌纯培养的镜下形态 革兰染色,返回,返回,星型奴卡菌在SDA上的菌落特征,炭疽杆菌串珠实验,返回,产单核细胞李斯特杆菌在半固体培养基中的生长情况,返回,红斑丹毒丝菌在亚碲酸钾血琼脂平板上的菌落特征,返回,细菌性阴道病阴道分泌物涂片 （深圳南山医院 曾忠铭博士提供）,返回,
