目前国内市场丙肝课件.ppt

1、目前国内市场丙肝 试剂质量分析,中国药品生物制品检定所 祁自柏,第5套丙型肝炎病毒抗体诊断试剂国家参考品的研制,一. 样品来源及初筛,1.从有关血站及血液制品厂收集 2.从多个单位逐步收集2000多份小样在 我们实验室检测筛选这些样品分别来自全国各地，约从几十万个供血员中进行筛选而得。根据我们初筛的结果及样品体积，确定对317份大样进行集中研究。,二、复核,对所选出的317份大样，用在国内注册的国外3家抗HCV EIA试剂及占国内抗HCV试剂市场50%以上的4家抗HCV EIA试剂进行检测，并对部分样品用抗HCV分段试剂进行检测，以了解其抗HCV抗体谱。并对部分样品进行HBsAg，抗HIV，抗

2、HAV，特异性梅毒抗体，乙脑抗体等检测。,复核结果分析,1. 目前的国产抗HCV EIA试剂灵敏度不逊于国外试剂,在第3套和第4套抗HCV参考品研制中所发现的国产试剂对抗HCV NS3抗体检出力弱的问题,在这次考核中似乎不太明显,说明国产试剂质量有所提高。对某些稀释血浆所检出灵敏度还高于某些国外试剂。但对于个别弱阳性样品，国产试剂仍有漏检,其原因比较复杂，有待进一步研究分析。 2. 国产抗HCV EIA试剂特异性较差，存在较多的假阳性现象。检测时，灰区范围大，边缘样品重复性差。,三、确证,根据317份样品复检结果，对于可能被挑选入参考品的样品进行了确证。 1. RIBA 检测 2. HCV R

3、NA检测 3. HCV基因型别测定，对部分分型结果用核苷酸序列测定的方法进行了确证 4. CHIRON HCV TMA试剂检测,确证结果分析,1.国产抗HCV EIA试剂对所有RIBA 确定为阳性的样品均可检出。对于RIBA 单片段阳性的不确定样品，国内外试剂均有漏检。 2.国内外抗HCV EIA试剂对HCV不同基因型别的检出率似乎没有看出区别。,四、会同标定,根据样品复检及确证结果，考虑到样品的抗体谱，基因型别，地域代表性，尤其是国内试剂存在的问题，从317份样品中选出100份样品进行进一步研究和盲样会同标定。第一次标定要求各单位用目前批批检合格的试剂对该样品检测，并将结果反馈给我所。综合上

4、述结果，我们拟定了65份样品进行了第二次标定，要求各单位对我们的检测结果进行复核，或对本单位的试剂进行改进。并将复核结果或改进后试剂的检测结果再次告知我所。,20家会同标定第一次反馈符合率,拟参考品 （-） （+）样品数(份) 55 45符合率(%) 65-100 71-98,8家会同标定第二次反馈符合率,会同标定结果分析,1.国内抗HCV试剂生产单位科研能力较弱，缺乏确证手段。除个别单位对个别数据进行了复核外，基本依赖于我所数据。 2.国内外试剂均存在漏检和假阳性现象，说明对丙肝病毒及丙肝试剂的研究有待进一步深入。 3.国产试剂存在较多的假阳性现象，在保证灵敏度的前提下，特异性问题也应当适当

5、重视。 4. 国产抗HCV试剂经改进后,精密性,灵敏度,阳性样品符合率基本可达到要求,阴性样品符合率经进一步努力也有望达到参考品要求 。,五、参考品的组成及拟定标准,项 目 合 格 标 准 阴性参考品 30份 阴性符合率29/30 阳性参考品 30份 阳性符合率29/30 灵敏度参考品 4份 L1 阳性L2 阳性L3 阳性或阴性L4 阴性 精密度参考品 1份 cv 15% (n=10),特点1：,样品来源力求具有地域代表性及基因型代表性。,特点2：,阳性样品包括我国流行的主要的HCV基因型1b，2a。还包括1a，1a/1b，6a，1b/2a，3b。,特点3：,阳性样品力求涵盖各种抗-HCV抗体

6、及各种抗-HCV抗体谱组合，含有抗-HCV强阳性样品，中等强度样品和弱阳性样品。如有的样品同时含有抗HCV核心，NS3, NS4和NS5抗体，有的样品含有其中两种或三种抗体组合，也有的样品只含有某一种抗体。包括抗HCV核心24份，抗HCV NS3 26份，抗HCV NS4 11 份，抗HCV NS5 5 份。并含有单独抗HCV核心抗体样品为6份，单独抗HCV NS3抗体样品为7份，用于控制对抗-HCV NS3和核心抗体的检出力度（该两种抗体为HCV感染人群中占绝对优势的抗体),并控制对该两种抗体检出力度的平衡。,特点4：,阴性参考品均为市售抗-HCV EIA试剂检测时，OD值略低于试剂临界值的

7、高值阴性样品，以控制试剂的非特异性反应。同时在阴性参考品中，考虑到丙型肝炎病毒与乙型脑炎病毒同属与黄病毒科，为防止交叉感染，我们挑选了6 份乙脑抗体阳性样品。,发光试剂与酶联试剂检测丙型肝炎抗体的临床评价和丙型肝炎病毒抗体试剂检测结果的可信度分析,前 言,自1995年至今，国内外丙型肝炎病毒抗体酶联免疫试剂已被普遍应用，但该试剂仍存在一定数量的假阳性和假阴性。最近，一种新的进口抗HCV化学发光试剂进入我国市场,这种检测方法能否用于血源筛查。美国疾病控制中心(CDC)对在美国生产的两种抗HCV试剂进行了可信度评价后，做出了一个规定，这种规定是否适用于国产抗HCV EIA试剂。带着这两个问题，利用

8、在研制第5套抗HCV国家参考品过程中所搜集到的特殊样品，用国内外6种抗HCV 试剂进行检测，并对其结果进行可信度分析。,材料与方法,样品来源： 1. 抗-HCV试剂第4套国家参考品,包括 :阳性40份, 阴性 40份283份特殊样品，从全国几十万份供血员样品中筛出，包括： 初筛发现为可疑抗-HCV阳性 样品OD值在临界值周围 单独ALT异常,试剂：,1. 进口抗HCV化学发光试剂：发光试剂2. 进口抗HCV EIA试剂：进口1，进口2，进口33. 国产抗HCV EIA试剂：国产1，国产24. 抗HCV确证试剂：CHIRON 公司RIBA HCV 3.0 SIA5. HCV RNA PCR试剂：

9、深圳匹基公司HCV RNA PCR试剂,试验方法：,用国内外6种抗HCV试剂分别检测，双份重 试复检。6种试剂复检结果不一致的样品，用确证试 剂确证。,样品抗HCV阴阳性判定标准：,6种抗HCV试剂检测结果均为阳性的样品，定 为阳性。6种抗HCV试剂检测结果均为阴性的样品，定 为阴性。6种抗HCV试剂检测不一致的样品，用RIBA HCV3.0、和HCV RNA PCR试剂作进一步确证。,结果与结论,一、酶联试剂与发光试剂比较对HCV第4套国家参考品的检测 对283份特殊血样的检测,1.对抗HCV第4套国家参考品的检测：,样 品 酶联试剂 发光试剂 + - 符合率 + - 符合率阴性参考品 0

10、40 40/40 1 39 39/40 （40份） 阳性参考品 39 1 39/40 39 1 39/40 （40份）,两种试剂均可达到国家标准,2. 对283份特殊样品检测：,酶联试剂特异性较好，化学发光试剂应注意其假阳性问题。,二、抗HCV试剂可信度分析,6种抗HCV试剂对283份样品检测结果 假阳性和假阴性样品吸光度值/临界值(S/Co)分布假阴性样品抗体谱分析及HCV RNA结果,6种抗HCV试剂对283份样品检测结果：,6种试剂灵敏度，特异性无显著差别。,假阳性样品吸光度值/临界值(S/Co)分布：,CDC所规定“凡S/CO值大于3.8的阳性样品不需再作确证检测的可信度分析”，适用于

11、国内市场上进口的抗HCV试剂。国产抗HCV EIA试剂假阳性样品S/CO值范围分布较广，对于国产抗HCV 试剂可信度的S/CO值界限不应机械的套用美国CDC规定。,假阳性样品S/CO值分布表明：,提示对于S/CO值大于0.5，小于1.0的高值阴性样品应注意是否为假阴性。,假阴性样品S/CO值及分布：,假阴性样品抗体谱分析及HCV RNA 结果：,抗HCV 试剂对HCV NS3抗体的检出力度似乎还应加强。,总 结,1.国外进口的抗HCV化学发光试剂能达到中国国 家标准。2.化学发光试剂专用仪器自动化操作，劳动强 度小,灵敏度高，但应注意其假阳性问题。3.CDC所规定“凡S/CO值大于3.8的阳性

12、样品不需再作确证检测的可信度分析”，适用于国内市 场上进口的抗HCV试剂。,4. 国产抗HCV EIA试剂假阳性样品S/CO值范围分布较广，对于国产抗HCV 试剂可信度的S/CO值界限不应机械的套用美国CDC规定。5对于S/CO值大于0.5，小于1.0的高值阴性样品应注意是否为假阴性。6抗HCV 试剂对HCV NS3抗体的检出力度似乎还应加强。,HCVcAg(Free)检测结果,What Made Researchers Start To Notice HBsAg Mutants?,Vaccine failure: Individuals who already had successful

13、HBV vaccinations (anti-HBsAg +) are infected with HBV again with HBsAg and anti-HBsAg coexistence Vaccine failure in neonates born to HBsAg positive mothers Antivirus treatment failures: HBIG failure in orthotopic liver transplant (OLT) recipients or lamivudine resistant Conflict results from different HBsAg assays: Negative result from one assay but positive result from another assay with confirmation of HBV infection by NAT.,谢 谢！,