1、感染马立克氏病病毒鸡胸腺蛋白质组学研究,胡序明，范忠军，郁川，钱琨，金文杰，秦爱建*,省部共建教育部禽类预防医学重点实验室，江苏省动物预防医学重点实验室，江苏 扬州 2250092011年10月 中国 成都,MD,Normal,马立克氏病病毒（Mareks disease virus ，MDV）是一种高度细胞结合性、 致肿瘤性疱疹病毒，给养鸡业造成了巨 大经济损失。,马立克氏病（Mareks disease ,MD）是一种淋巴 细胞增生性疾病，以免疫抑 制、神经性障碍、致瘤性T细 胞淋巴瘤等为特征。,一 研究背景、目的及意义,MDV体内感染主要分为四个阶段：MDV最初感染的靶细胞为B细胞，然后
2、感染T细胞，最终形成T细胞淋巴瘤。,近年来人们通过新出现的蛋白质组学技术研究MDV感染后不同阶段鸡免疫器官（如脾脏和法氏囊）的蛋白表达的动态变化。 胸腺是禽类T细胞分化、发育和成熟的场所。MDV感染后引起T细胞免疫抑制并最终发展为T细胞淋巴瘤，其潜伏感染主要与活化的CD4+ T淋巴细胞有关。 MDV感染后胸腺内哪些蛋白发生了改变？这些蛋白的变化能为我们理解MDV致病机制和致瘤机理提供什么线索？,二 材料与方法1 材料（1）1日龄SPF鸡（由北京梅里亚公司提供），并在扬州大学兽医学院的SPF隔离器中进行饲养。（2）感染鸡用的RB1B强毒株（MDV）由本实验室保存 。,RB1B感染SPF鸡，实验组
3、和对照组,胸腺2-DE样品制备,胸腺组织病变检测,蛋白样品的IEF和PAGE电泳分离,图像扫描和初步分析,胰酶对脱色后蛋白质的消化,质谱的多肽指纹图、微测序分析,质谱结果的生物信息学分析和比对,Real-time PCR和western blot实验的进一步验证,数据统计,蛋白信 息的初 步获得,有意义蛋白 质的发现,功能研究,分析 讨论,感兴趣 蛋白点 的切取,2 方法,图1.1 不同阶段攻毒组和对照组胸腺比较,图 1.2 两组间不同阶段 胸腺/体重 差异统计柱形图,1 MDV感染后不同阶段的病变情况,三 结果与讨论,图2.1 MDV感染后不同时间点差异蛋白点数比较,图2.2 胸腺2-DE图
4、谱差异点（ 4 dpi对照组）,2 MDV感染后胸腺蛋白差异表达情况,在MDV感染后的七个阶段累计检测到250个差异蛋白点，这些差异蛋白点集中在21、28和35天。其中，上调蛋白（包括新增35个）143个，下调蛋 白（包括消失20个）107个。,3 GO注释（根据差异蛋白点的生物学过程）,This classication was produced based on the analysis using GOSlimViewer tool at Agbase database (http:/www.agbase.msstate.edu/).,This classication was prod
5、uced based on the analysis using GOSlimViewer tool at Agbase database (http:/www.agbase.msstate.edu/).,3 GO注释（根据差异蛋白点的分子功能）,图4.1. 差异蛋白点相互作用网络（ STRING database）,4 蛋白功能相互作用网络分析与讨论,图4.2. 蛋白功能讨论（MDV感染后T细胞瘤形成与发展的可能途径）,MDV感染后T细胞瘤形成 与发展的可能途径,5 Real-time PCR 验证MIF表达下调,图5.1 MDV感染后不同阶段MIF mRNA水平的变化,图5.2 MDV感染后不同阶段MIF蛋白水平的变化,图2.3 MDV感染后不同阶段不同组织MIF mRNA水平的变化,6 MIF mRNA在不同组织的表达情况,总 结,1、通过蛋白组学方法从MDV感染的鸡胸腺中共鉴定出119个差异蛋白点；其中部分差异蛋白点与病毒感染复制、免疫、凋亡和肿瘤相关。2、一些重要蛋白如MIF、Hsp90alpha和Annexin-A1等的变化可能与机体免疫抑制（特别是先天性免疫）和T细胞瘤的形成与发展有关。3、对MDV感染后不同组织中MIF在基因水平上的表达情况做了进一步分析。,Thank you！,
