1、实验一：坐骨神经腓肠肌标本制备,【目的要求】 1、学习蛙类动物单毁髓与双毁髓的实验方法。 2、学习并掌握蛙类坐骨神经腓肠肌标本的制备方法。 【实验原理】 蛙类一些基本生命活动和生理功能与恒温动物相似，而其离体组织器官所需的生活条件比较简单，并且易于控制和掌握，因此在生理实验中常用蛙类离体组织器官作为试验标本。 蛙类坐骨神经腓肠肌标本是研究神经冲动和肌肉收缩机能等生理实验最常用的实验材料，制备此标本是生理实验的一项基本但又非常重要的操作技术。,【动物、器材与试剂】（以下是每组所需的种类和数量） 蛙或蟾蜍1只、纱布1块、毁髓针1支、眼科镊（或尖头无齿镊）1把、手术剪1把、普通剪刀1把、手术刀1把、
2、玻璃板1块、蛙板1块、培养皿1套、蛙钉2只、玻璃分针2支、锌铜弓1支、滴管1支、细棉线30cm、酒精灯1只、玻棒1支、解剖盘1只、任氏液至少100mL、食盐1g。,【方法与步骤】,1、蛙或蟾蜍的单毁髓与双毁髓 一手握住蛙或蟾蜍(可用纱布包裹蟾蜍躯干部)，背部向上，用拇指压住蛙或蟾蜍的背部，食指按压其头部前端，使头端向前俯（向下低垂）；另一手持毁髓针，由两眼之间沿中线向后触划，当触及到两耳中间的凹陷处(此处与两眼的连线成等边三角形)时，持针手即感觉针尖下陷，此处即是枕骨大孔的位置，将毁髓针由凹陷处垂直刺入，即可进入枕骨大孔（图1）。然后将针尖向前刺入颅腔，在颅腔内搅动，以捣毁脑组织。如毁髓针确在
3、颅腔内，实验者可感到针尖触及颅骨，此时的动物为单毁髓动物。再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后方，与脊柱平行刺入椎管，以捣毁脊髓，此时的动物为双毁髓动物。 彻底捣毁脊髓时，可看到动物的后肢突然蹬直，而后瘫软如棉，此时的动物为双毁髓动物。如动物仍表现四肢肌肉紧张或活动自如，必须重新毁髓。操作过程中应注意使蟾蜍头部向外侧(不要挤压耳后腺)，防止耳后腺分泌物射入实验者眼内（如被射入，则需立即用生理盐水冲洗眼睛）。,2、剥制后肢标本 如果动物个体较大，可将双毁髓的动物腹面向上放入蜡盘中，一手持手术镊轻轻提起耻骨联合上方的皮肤，另一手用手术剪横向剪开皮肤，再剪开体壁肌肉(开口要大)。然后用手术镊轻轻提起内
4、脏，自基部剪断（勿损伤脊神经）。一手轻轻托起蟾蜍后肢，使头部及内脏向下，看清支配后肢的脊神经发出部位，在其前方用金冠剪横向剪断脊柱。然后再沿脊柱两侧到横向切口剪断体壁，一手用蘸有任氏液的拇指和食指捏住断开的脊柱后端，另一手向后撕剥皮肤并除去断开脊柱以上部位肢体及内脏（图2）。如果下肢撕皮困难，可在撕皮至股部时，用手勾住双股中间后再行撕剥。将剥干净的后肢放入任氏液中备用。清洗手及用过的手术器械。 如果动物个体较小，可将其背面向上放人蜡盘中。用手术镊轻轻提起两前肢之间的背部皮肤，并用手术剪横向剪开皮肤，用金冠剪剪断脊柱。然后再用手术镊提起断开的脊柱后端，用金冠剪沿脊柱两侧剪开体壁并剥皮(方法同上)
5、。 注意：操作过程中不可将剥皮后的标木同皮肤、内脏等弃物放在一起。将手及使用过的探针、剪刀全部冲洗干净，再进行后续实验。,3、分离两后肢 将去皮的后肢腹面向上置于玻璃板上，脊柱端在左侧，用左手拇指和食指固定标木的股部两侧肌肉，右手持一手术刀，于耻骨联合处向下按压刀刃，切开耻骨联合；然后用手托起标木，用金冠剪剪开两后肢相连的肌肉组织，并纵向剪开脊柱（尾杆骨留在一侧），使两后肢完全分离。将分开的后肢，一只继续剥制标本，另一只放入任氏液中备用。注意：操作要十分小心，切勿剪断坐骨神经。,4、辩认蛙后肢的主要肌肉，蛙类的坐骨神经是由第7、8、9对脊神经从相对应的椎间孔穿出汇合而成，行走于脊柱的两侧，到尾
6、端（肛门处）绕过坐骨联合，到达后肢背侧，行走于梨状肌下的股二头肌和半膜肌之间的坐骨神经沟内，到达膝关节腘窝处有分支进入腓肠肌（图3）。,5、分离坐骨神经 将一侧后肢的脊柱端腹面向上，趾端向外侧翻转，使其足底向上，用蛙钉将标本固定在玻璃板下方的蛙板(木板或硬泡沫塑料板)上。用玻璃分针沿脊神经向后分离坐骨神经。股部沿腓肠肌正前方的股二头肌和半膜肌之间的肌缝，找出坐骨神经。坐骨神经基部(即与脊神经相接的部位)，背部有一梨状肌盖住神经，用玻璃分针轻轻挑起肌肉，便可看清下面穿行的坐骨神经。剪断(或用玻璃分针扯断)梨状肌，完全暴露坐骨神经与其相连的脊神经再用玻璃分针轻轻挑起神经，自前向后剪去支配腓肠肌之外
7、的神经分支，将坐骨神经分离至腘窝处（图4）。取一下脊柱端的蛙钉，保留伸经发出部位的一小块脊柱骨，用金冠剪剪去其余部分脊柱骨及肌肉，再用手术镊轻轻提起连有神经的脊柱骨片，将神经移开股骨。,6、游离腓肠肌 一手捏住趾端，另一手用手术镊(尖头镊)在腓肠肌跟腱下面穿线，并用结线扎紧。提起结线，游离腓肠肌。 7、分离股骨头或胫腓骨头 如果所用动物个体小，可分离股骨头。方法是一手捏住股骨，沿膝关节剪去股骨周围的肌肉，再用金冠剪自膝关节向前刮于净股骨上的肌肉，保留1cm股骨头并剪断股骨。提起腓肠肌上的扎线，剪去膝关节下部的后肢，仅保留腓肠肌与股骨的联系。 如果所用动物个体大，可分离胫腓骨头，此方法简便而易于
8、操作。即在分离出腓肠肌的基础上，移开腓肠肌，用金冠剪剪去胫腓骨上的肌肉，自膝关节以下保留1cm长的胫腓骨并剪断后肢，然后自膝关节剪断股骨。 制备完整的坐骨神经腓肠肌标本应包括：连有坐骨神经的脊柱骨、坐骨神经、腓肠肌、股骨头或胫腓骨头四部分（图5）。,8、检验标本 用手术镊轻轻提起标本的脊柱骨片，使神经离开玻璃板，再用经任氏液蘸湿的锌铜弓，将其两极接触神经，如腓肠肌发生迅速收缩，则表示标本机能正常。提起腓肠肌上的结扎线，不使神经受到牵拉，轻轻将标本放入任氏液中保存。稳定15-20min后即可进行后续实验，如可用于神经干兴奋的传导、神经肌肉接点的传递以及骨骼肌的收缩等实验。 然后再依次用热玻棒（热
9、玻棒的温度防止过高,以免烫伤标本）、食盐刺激坐骨神经中枢端（或肌肉），观察肌肉收缩有何变化？如果放上食盐肌肉无动静，用任氏液将盐冲洗掉，再观察冲洗过程中肌肉收缩有何变化? 注意：制备标本过程中需经常用任氏液湿润标本。避免蟾蜍体表毒液和血液污染标本，压挤、损伤和用力牵拉标本，不可用金属器械触碰神经干。,【思考题】 1、剥去皮肤的后肢能用自来水冲洗吗?为什么? 2、金属器械碰压或损伤神经与腓肠肌，可能引起哪些不良后果? 3、如何保持标本的机能正常? 4、用锌铜弓检验标本兴奋性时，在神经和肌肉内部发生了哪些事件？ 5、刺激有几种形式?如何解释对食盐的不同处理对肌肉收缩的影响?,Thank you！,
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