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类型基因工程专题.ppt

  • 上传人:微传9988
  • 文档编号:3348858
  • 上传时间:2018-10-16
  • 格式:PPT
  • 页数:27
  • 大小:1.67MB
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    关 键  词:
    基因工程专题.ppt
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    1、基因工程专题,基因工程中涉及的现代生物学技术介绍 基因工程的操作过程 1)工具酶的介绍 2)载体的选择 3)重组DNA的筛选,识别双链DNA分子上特定的核苷酸序列, (4-6个碱基对,且具有回文结构)并有相应的酶切位点,3)结果:,形成黏性末端或平末端,1、限制性核酸内切酶,1)来源及作用:,主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶, 旨在将DNA片段化。,2)特点:,酶切产物片段数量计算:,1、线性DNA分子:,n+1,n,2、环状DNA分子:,如含n个酶切位点,则完全酶切后得 个 DNA片段;,如含n个酶切位点,则完全酶切后得 个DNA片段;,5,3,5,3,Bam H,+,Hind,+,平

    2、末端,黏性末端,2、 DNA连接酶,1)作用部位:磷酸二酯键,2)结果:DNA重组,3)连接类型:具平末端的片段的连接具黏性末端的片段连接,具平末端片段间的连接:,限制酶A,限制酶A,限制酶B,思考: 1、用限制酶A和限制酶B酶切重组体,可得几个DNA片段?,思考: 2、用DNA连接酶可得几种重组体?,DNA连接酶,Hind:,Sma,具平末端的片段的连接,特点: 1、特异性不强:无论限制酶是否相同,只要产生的都是平末 端,则可进行连接; 2、如用相同的限制酶酶切后,重组DNA分子上仍保留有原有限制酶的识别序列;如用不同的限制酶酶切后,重组DNA分子上原有限制酶的识别序列丢失,但可能产生新的限

    3、制酶的识别序列。,具黏性末端片段的连接:,特点:特异性强用相同的限制性内切酶,可产生相同的黏性末端,方能进行DNA的连接。,、不同的限制酶如产生相同的黏性末端, 则可进行DNA连接。 、重组DNA上的酶切位点可能改变。,Bam H,Bg l,AGATCTTCTAGA,+,+,A TCTAG,GATCTA,2,1,1、08江苏生物32题:(5) 采用EcoR和Pst酶切,得到_种DNA片断。 采用EcoR和Sma酶切,得到_种DNA片断。,单酶切:,具黏性末端的片段间的连接,双酶切:,具黏性末端的片段间的连接,单酶切:用同种限制酶酶切DNA,可产生 相同的黏性末端。,目的基因,目的基因自身环化,

    4、具黏性末端的片段间的连接,双酶切法:用两种不同的限制酶酶切DNA,由于两端的黏性末端不一样,避免了DNA片段的自身环化。,优势: 形成的重组质粒只有一种,避免了筛选。,5、(普陀)在构建含目的基因的重组质粒A时,如果使用EcoR进行酶切,则含目的基因的外源DNA 片段和质粒在DNA连接酶的作用下,至少可形成 种环状产物。,3,为防止含目的基因的外源DNA片段自身环化,应选用_ (限制)酶进行切割。,BamH 和Hind,载体必须具备的条件,能够在宿主细胞中自我复制并稳定地保存。 具有一个或多个限制酶切点,以便与外源基因连接。 具有某些标记基因,便于进行筛选。 必需是安全的,不会对受体细胞有害。

    5、 大小应适合,便于提取和操作。,质粒的选择:,含一个抗性基因的质粒:,1、目的基因的插入位点:,3、重组DNA的筛选:,2、导入的受体细胞是否应含抗性基因: (如大肠杆菌)不含,抗性基因之外,导入大肠杆菌并接种,培养基含抗生素,出现菌落,出现菌落,无菌落 (质粒未导入),含目的基因产物的检测,第一次筛选:,第二次筛选:,含两个抗性基因的质粒:,1、目的基因的插入位点:,3、重组DNA的筛选:,2、导入的受体细胞是否应含抗性基因 (如大肠杆菌) :,插入一个抗性基因内,保留一个抗性基因,培养基应怎样加入抗生素?,不含,质粒导入大肠杆菌,无菌落,有菌落,无菌落,有菌落,有菌落,有菌落,导入大肠杆菌并接种,培养基含 抗生素2,出现菌落,两种培养基均无菌落 (质粒未导入),培养基含 抗生素1,不出现菌落,大肠杆菌中含质粒,出现菌落,出现菌落,大肠杆菌中含重组质粒,大肠杆菌中含质粒,总结:,DNA连接平末端、黏性末端连接 单酶切和双酶切:重组DNA(单酶切有三种,要筛选) 根据质粒含有的抗性基因筛选重组DNA是否成功导入,

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