基因工程专题.ppt
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1、基因工程专题,基因工程中涉及的现代生物学技术介绍 基因工程的操作过程 1)工具酶的介绍 2)载体的选择 3)重组DNA的筛选,识别双链DNA分子上特定的核苷酸序列, (4-6个碱基对,且具有回文结构)并有相应的酶切位点,3)结果:,形成黏性末端或平末端,1、限制性核酸内切酶,1)来源及作用:,主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶, 旨在将DNA片段化。,2)特点:,酶切产物片段数量计算:,1、线性DNA分子:,n+1,n,2、环状DNA分子:,如含n个酶切位点,则完全酶切后得 个 DNA片段;,如含n个酶切位点,则完全酶切后得 个DNA片段;,5,3,5,3,Bam H,+,Hind,+,平
2、末端,黏性末端,2、 DNA连接酶,1)作用部位:磷酸二酯键,2)结果:DNA重组,3)连接类型:具平末端的片段的连接具黏性末端的片段连接,具平末端片段间的连接:,限制酶A,限制酶A,限制酶B,思考: 1、用限制酶A和限制酶B酶切重组体,可得几个DNA片段?,思考: 2、用DNA连接酶可得几种重组体?,DNA连接酶,Hind:,Sma,具平末端的片段的连接,特点: 1、特异性不强:无论限制酶是否相同,只要产生的都是平末 端,则可进行连接; 2、如用相同的限制酶酶切后,重组DNA分子上仍保留有原有限制酶的识别序列;如用不同的限制酶酶切后,重组DNA分子上原有限制酶的识别序列丢失,但可能产生新的限