1、第四节 动物细胞的培养 条件和培养基,细胞体外培养基本条件: 无菌 营养充足,防止有害物质 氧气,随时清除代谢有害物质 良好的生存外环境 及时分种,一、动物细胞的培养条件 器材的清洗和消毒器材的清洗浸泡、刷洗、泡酸、冲洗器材的消毒灭菌物理消毒 化学消毒, 水质 :电阻值大于18M,去热原。 pH:7.27.4 渗透压:290300mOsm/kg 温度:370.5 C 空气:氧的饱和质60%,氧分压40.7kPa,二、动物细胞的培养 基的种类和组成,分3类: 天然培养基 合成培养基 无血清培养基,天然培养基血清、羊水、腹水等,成分复杂、成分不稳定 合成培养基DME、 MEM、 DMEM、 HAM
2、 F12、 RPMI1640,氨基酸 维生素 糖类 无机盐 其它成分 添加小牛血清：,添加小牛血清的作用 提供生长因子和激素 提供贴附因子和伸展因子 提供结合蛋白 提供必需脂肪酸和微量元素,无血清培养基 提高重复性 减少微生物污染 供应充足稳定 产品易纯化 避免血清因素对细胞的毒性 减少血清中蛋白对生物测定 的干扰,无血清培养基加入添加剂 生长因子和激素 结合蛋白 贴附因子和伸展因子 有利细胞生长的因子和元素,第五节 动物细胞培养方 法和操作方式,一、动物细胞大规模培养的方法 依细胞种类:原代培养、传代培养 依培养基:液体培养、固体培养,依培养器和方式:静止培养、旋转培养、搅拌培养、微载体培养
3、、中空纤维培养、固定床或流化床培养,从生产实际分为:悬浮培养贴壁培养贴壁-悬浮培养,悬浮培养让细胞自由的悬浮于培养基内生长繁殖。贴壁培养让细胞贴附在某种基质上生长繁殖的培养方法。贴壁-悬浮培养,贴壁-悬浮培养微载体培养包埋和微囊培养结团培养,二、动物细胞培养的操作 方式,分批式操作 半连续式操作 灌流式操作,第六节 动物细胞生物反应 器及其检测控制系统,一、动物细胞生物反应器的类型及其基本结构 搅拌式生物反应器 气升式生物反应器 中空纤维式生物反应器 透析袋或膜式生物反应器 固定床或流化床式生物反应器,搅拌式生物反应器,气升式生物反应器,中空纤维式生物反应器,平床式中空纤维式生物反应器,透析袋
4、或膜式生物反应器,固定床或流化床式生物反应器,CellGen plus生物反应器,二、动物细胞生物反应器的 检测控制系统, 培养过程需检测的物化参数直接在线检出 取样离线检测 检测后计算 主要参数的检测和控制方法,主要参数的检测和控制方法, 温度 pH 在培养初期，控制进氧量 当细胞密度提高后控制NaHCO3的量,溶氧 搅拌 进出液流量 其它,第七节 动物细胞制药的前 景与展望,一、提高产量降低成本和改进质量方面的研究 二、转基因动物的研究 三、组织工程的研究,一、提高产量、降低成本和改 进质量方面的研究,为了提高产量,要提高细胞表达水平。 为降低成本，须改进培养基配方。 为改进产品质量，关键是糖基化质量。 改进工艺，生产设备等,二、转基因动物的研究,自1982年Palimiter提出用转基因动物来生产药用蛋白以来，发展迅 速。优点：产量高成本低质量与天然一 样。现还有不成熟之处。对动物和人的健康的影响。,三、组织工程的研究,组织工程：通过对大量细胞的培养，并用细胞直接作为一种治疗手段用于临床，或用培养的细胞进一步加工构成一种组织，如人造皮肤、人造肝脏、人造胰腺、人造血管、人造骨等并用于临床治疗。,
