1、ICS 67.050B 20备 案 号 ： DB12天 津 市 地 方 标 准DB12/T 6502016转 基 因 植 物 及 其 产 品 成 分 筛 查 Cry1Ab/Cry1Ac 试 纸 条 法Screening method for genetically modified plant Cry1Ab/Cry1Ac test strip2016-09-27 发布 2016-11-01 实施天 津 市 市 场 和 质 量 监 督 管 理 委 员 会 发 布DB12/T 65020162前 言本 标 准 按 照 GB/T 1.12009 给 出 的 规 则 起 草 。 本 标 准 由 天 津
2、 市 农 村 工 作 委 员 会 提 出 。本 标 准 起 草 单 位 ： 天 津 市 农 业 质 量 标 准 与 检 测 技 术 研 究 所 、 中 国 农 业 科 学 院 生 物 技 术 研 究 所 、 天 津 市 东 丽 区 产 品 质 量 监 督 检 验 所 。本 标 准 主 要 起 草 人 ： 兰 青 阔 、 李 亮 、 黄 凤 军 、 刘 雪 岩 、 赵 新 、 宛 煜 嵩 、 易 萌 、 陈 锐 、 徐 石 勇 。 本 标 准 2016 年 9 月 首 次 发 布 。DB12/T 65020163转基因植物及其产品成分筛查 Cry1Ab/Cry1Ac 试纸条法1 范围本 标 准
3、规 定 了 转 基 因 植 物 及 其 产 品 成 分 Cry1Ab/Cry1Ac试 纸 条 法 的 术 语 和 定 义 、 检 测 方 法 、 结 果 判 断。本 标 准 适 用 于 表 达 Cry1Ab/Cry1Ac蛋 白 的 转 基 因 大 豆 MON87701， 转 基 因 玉 米 MON810、 Bt11、 Bt176，转基因水稻TT51-1 、克螟稻、科丰六号，转基因棉花MON531、MON15985 等主要植物及其初 级 加 工 产 品 中 Cry1Ab/Cry1Ac蛋 白 的 试 纸 条 筛 查 。2 规 范 性 引 用 文 件下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的
4、 。 凡 是注 日期的 引用 文件 ， 仅 所注 日期的 版本 适用 于 本 文 件 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 文 件 。GB/T 6682 分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法3 原理转基因 快速 检测 试纸 应用 双抗体 夹心 免疫 层析 的原 理， 样 本中 的抗 原在 侧向 移 动的过 程中 与标 记 的 特 异 性 单 克 隆 抗 体 1结 合 ， 形 成 抗 原 -抗 体 复 合 物 ， 继 续 向 前 方 流 动 和 NC膜 检 测 线 上 特 异 性 单 克
5、隆 抗 体 2 结 合 形 成 双 抗 体 夹 心 复 合 物 ， 并 显 色 。 如 果 样 本 中 转 基 因 作 物 含 量 大 于 5%， 控 制 线 （ Control Line， 简 称 C） 和 检 测 线 （ Test Line， 简 称 T） 显 色 ， 结 果 为 阳 性 ； 反 之 ， 控 制 线 （ C） 显 色 ， 检 测 线 （ T） 不 显 色 ， 结 果 为 阴 性 。4 仪 器 设 备 及 试 剂4.1 仪 器 设 备匀 浆 器 ； 天 平 ； 移 液 枪 ； 振 荡 器 ； 离 心 管 等 。4.2 试剂提 取 缓 冲 液 ； 实 验 用 水 为 重 蒸 馏
6、 水 或 符 合 GB/T 6682规 定 的 一 级 水 等 。5 方 法 步 骤5.1 样 品 的 采 集 和 预 处 理使用离 心管 盖夹 取或 者打 孔的方 式 ， 采 集 植 物新 鲜 组织样 品生 长点 附近 约3 cm幼嫩组织10 0 mg-200 mg， 置 于 2 mL离 心 管 中 。 作 物 籽 粒 可 使 用 铁 钳 夹 碎 ， 取 较 碎 部 分 置 于 2 mL离 心 管 中 。5.2 样 品 研 磨加 1 mL纯 水 或 提 取 缓 冲 液 于 离 心 管 中 ， 使 用 一 次 性 研 磨 杵 手 工 研 磨 或 电 钻 研 磨 ， 确 保 上 层 液 体 体
7、积 应 至 少 占 总 体 积 三 分 之 一 。DB12/T 65020164对 于 混 合 样 品 ， 应 称 重 后 使 用 大 容 量 研 磨 仪 器 研 磨 至 100目 大 小 粉 末 ， 然 后 加 入 水 或 提 取 缓 冲 液 。5.3 涡 旋 震 荡在 振 荡 器 上 用 力 震 荡 30 s-1 min， 确 保 样 品 充 分 混 匀 。5.4 试 纸 条 检 测震 荡 后 ， 静 置 1 min待 固 体 物 质 沉 淀 分 层 ， 尽 快 从 包 装 中 取 出 试 纸 条 ， 按 照 箭 头 方 向 插 入 离 心 管 ， 开 始 计 时 。5.5 读 取 结 果5-10 min底 色 褪 去 后 ， 将 试 纸 条 水 平 放 置 于 观 察 者 正 面 读 取 结 果 。5.6 结 果 判 断测 试 结 果 分 为 阴 性 、 阳 性 和 无 效 三 种 。 阴 性 （ ） ： 控 制 线 C 显 色 ， 检 测 线 不 显 色 ； 阳 性 （ ） ： 控 制 线 C 显 色 ， 检 测 线 显 色 肉 眼 可 见 ；无效：C 线未出现，可能操作不当或试纸失效。表明操作过程不正确或试纸条已变质损坏。在此 情 况 下 ， 应 重 新 测 试 。
