1、,黄艳,甲型肝炎病毒IgM抗体的测定 (捕获法),酶联免疫吸附试验（ELISA法）,将抗体(抗原)包被在固相表面后，按不同的步骤加入待测抗原(抗体)和酶标抗体(抗原)，充分反应后用洗涤的方法，使固相上形成的抗原抗体复合物与其他物质分离，洗去游离的酶标抗体(抗原)，最后加入底物，根据酶对底物催化的显色反应程度，而对标本中的抗原(抗体)进行定性或定量。,ELISA类型,夹心法间接法测抗体竞争法捕获法,捕获法测IgM抗体,血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗体多用捕获法,包被抗体：用抗人链抗体包被固相载体上,形成固相抗人链; 加入病人
2、的血清标本; 加入特异性抗原试剂;， 加入针对特异性抗原的酶标抗体， 加底物显色,免疫球蛋白的结构,基本结构：四肽链结构,由两条相同的轻链（Light Chain）和两条相同的重链（Heavy chain）通过链间二硫键连结形成。分子式为：H2L2,四条肽链两端游离的NH2和COOH方向一致分别命名为N端和C端,（一）轻链和重链,轻链（L链） 链 链 轻链决定型别 型 型 正常人：2 ：1 重链（H链）:根据其抗原性的差异，人类Ig的H链分为链 链 链 链 链 重链决定Ig类别IgG IgA IgM IgD IgE,捕获法,主要用于 血清中某种抗体亚型成分（如IgM）的测定。,实验原理,用抗人
3、链抗体包被酶标板，用以捕获血清中IgM类抗体，然后用特异性HAVAg与IgM抗体结合，再加酶标抗HAV抗体，最后加底物显色，显色深浅与HAVIgM的含量成正相关。,操作步骤,1将微孔条固定在支架上，按顺序编号。 2分别将待测标本，阴、阳性对照100l（2滴）加入相应的孔中，设空白对照孔。置3720分钟。 3洗涤：甩去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置5秒，共三次，每次洗后均需扣干。 4每孔加HAAg50l，酶结合物50l（空白对照除外），振荡混匀，置3720分钟。 5洗涤：重复上述3 6显色：每孔加显色剂A液50l，再加显色剂B液50l，振荡混匀，置3715分钟。 7.每孔加终止液50l,Cut
4、 off value(临界值),Cut off value(临界值)：阴阳性判断值，简称CO值。夹心法：若S/CO值1，为阳性；S/CO值1，为阴性。,要点： 1. HAV的传播途径(粪口) 2. HAV的潜伏期(30天2周) 3. 血清标志物出现的规律 4. 免疫学检测指标HAV Ag抗HAV总抗体抗HAV-IgM,临床意义,血清中抗HAVIgM出现于感染的早期(发病后数日)抗体的效价很快升到峰值并持续较长时间(2-4周),经1-2个月后抗体的效价和阳性率明显不降,于3个月后消失.因此抗HAVIgM阳性,尤其是效价较高时,表明处于感染的早期,被公认为早期诊断甲肝的依据,是区别是急性感染还是慢性感染的有力佐证。,
