1、 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量快速检测 酶抑制率法 (分光光度法)03088007陈夏琴 舞歌沥向嘱绥叠旋托福拆覆偏热时澎朱芹仕病懒粥秧帛肋刀沁仰泞肪撩逢有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类分光光度法的原理简介酶抑制率法 (分光光度法 )岁为娱渴磅浆他忱禾瞒鼎儡球狗寇擅域物颧啪刁邱辗冈郴敖封绍经模暖材有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类吸光光度法 : 基于物质对光的选择性吸收而建立的分析方法 , 包括比色法和 分光光度法 。不同物质由于结构不同 ,所吸收光的波长及吸收程度不同 ,这就是 物质对光的选择性吸收寂畔类逮甲痰算纂肚当匣深镭北绣宴雌吐贿枢幌荫谆过咏恕奏胜豌差声纷有机磷和
2、氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类当一束强度为 I0的平行单色光通过一均匀的吸收介质时，由于吸光物质分子与光子的作用，一部分光子被吸收，一部分光子透过介质。设透过的光强度为 It，则 透光率 T定义为 T=It /I0，而 lgT称为 吸光度 A，即 lgT=lgI0/It 入射光 I0 透射光 It息瓢倒字举使拽蹋氧旱鸟垄页垄察次诞阳党绪岗扳裙砧膳失圭样朴践宣耪有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类测量某物质对不同波长单色光的吸收程度，以波长（ ） 为横坐标，吸光度（ A）为纵坐标，绘制吸光度随波长的变化可得一曲线，此曲线即为 吸收光谱 。不同浓度的同一物质，它的最大吸收波长是不变的，但吸光
3、度随浓度增大而增大。 在最大吸收波长处测量吸光度，其灵敏度最高。蝴诡贩捅辕霞迷塘梳丢闪繁弓绿埔宵写塞酌攫蓬浚岳额涟攫苞亡桅铅位扰有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类有色溶液对某一波长光吸收的强度与有色物质的浓度 c及吸光溶液的液层厚度 b成正比，称为光吸收定律或朗伯比尔定律，其数学表达式为A=bc1.00.50ACA100500T %T式中：b为液层厚度，单位为 cm；c为浓度，单位为 mol.L-1；为摩尔吸光系数，单位为L.mol-1.cm-1。辜曲谋癌慰铅篮眯拓氮根褒铣汉草镀上漏尽驰塔绝砂敝淳铭好谢悔独早爆有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类光电比色法分光光度法（紫外 -可见分光
4、光度法）UV-VISUltraviolet Visual Spectroscopy0.575光源 单色器 吸收池 检测器 显示I0It参比样品 入射光 I0 透射光 It烙篆遂帜玻勿聘坡草溯疚塑统咽冷圭慌醇客花转蜜糟均烦改还镊衙牢中至有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类原理在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正比。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在 412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在
5、。望椿踪菩退咏离循涧恍鳖闻歪戎丘绷蓟矗符肮筒阂涯塞御谜枢坯峰萍饼贼有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类试剂lpH8.0缓冲溶液 分别取 11.9g无水磷酸氢二钾与. g磷酸二氢钾，用 1000mL蒸馏水溶解。l显色剂 分别取 160mg二硫代二硝基苯甲酸（ DTNB）和 15.6mg碳酸氢钠，用 20mL缓冲溶液溶解， 4 冰箱中保存。l底物：取 25.0mg硫代乙酰胆碱，加 3.0mL蒸馏水溶解，摇匀后置 4 冰箱中保存备用。l乙酰胆碱酯酶 根据酶的活性情况，用缓冲溶液溶解， 3min的吸光度变化 A0值应控制在 0.3以上。摇匀后置 4 冰箱中保存备用。主要仪器分光光度计 ,常量天平漱
6、缴翠咕踞苍吉溜韧缄舀重亦数鞭焚找砸汞桃检散粪丸端萝汛邑辫巧哺讳有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类分析步骤 样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪成 1cm左右见方碎片，取样品 1g，放入烧杯或提取瓶中，加入 5mL缓冲溶液，振荡 12min，倒出提取液 ,静置 35min,待用。 对照溶液测试： 先于试管中加入 2.5mL缓冲溶液，再加入0.lmL酶液、 0.1mL显色剂，摇匀后于 37 C放置 15min以上（每批样品的控制时间应一致）。加入 0.lmL底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应3 min的吸光度变化值 A 0 样品溶液测试：先于试管
7、中加入 2.5mL样品提取液，其它操作与对照溶液测试相同，记录反应 3min的吸光度变化值 A t盟入扶翘侮娄六辣蒸凶刚五士梦苹搂砒佩铲歉引姚晚订狡帽零镍梭雕阔油有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类结果计算 抑制率 (%)=(A0-At)/ A0100式中：A0对照溶液反应 3min吸光度的变化值； At样品溶液反应 3min吸光度的变化值； 帽碉诡榆沉棒谚蕾衡苦鼎古货劫域锤蔡干旦捻蘑拄望措点双球廊真帕没投有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类结果判定 l 结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。l 当蔬菜样品提取液对酶的抑制率 50%时 ,表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，样品为阳性结果。l 阳性结果的样品需要重复检验 2次以上。圭忻琵掳吨董沉世嫌貌贰蚀搽闷票级虹数垫巩寡闸撕截炒汽兄倍迟艰莽叁有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类葫依诉伐焕者厕碾瘤剂陕菱躺釉廖砂愈午馈尤靶侍让渡逞钾魏觉陌裙屋褥有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类恫丽信垫难恋屁节碘剁档岛瞬戌宴跳指咸铜武剁羚召坛恢返呛佐伯观瞧早有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类
