1、基金项目 : 中央高校基本科研业务费专项资金项目 ( DL09BA23)作者简介 : 李楠 ( 1986 ) ， 男 ， 硕士研究生 ， 生物药效体内体外研究 。通讯作者 : 祖元刚 ( 1954 ) ， 男 ， 教授 ， 博士 ， 主要从事药用植物的研究与开发 。E mail: zygorl vip. hl. cn山梨酸与山梨酸钾抑菌 、抗炎效果比较李 楠1， 王 松2， 祖元刚2*， 王 微2东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室 ( 哈尔滨 150040)摘 要 目的 : 测定和比较了山梨酸与山梨酸钾对几种常见食品污染微生物的抑菌活性以及抗炎性能 。方法 :采用微量肉汤稀释法 、Gr
2、iess 试剂法 。结果 : 山梨酸对表皮葡萄球菌 、金黄色葡萄球菌 、枯草芽孢杆菌 、大肠杆菌 、绿脓杆菌和变形杆菌等受试细菌具有良好的抑制作用 ， 效果强于山梨酸钾 ; 而在抗炎方面 ， 则效果弱于山梨酸钾 。关键词 : 山梨酸 ; 山梨酸钾 ; 抑菌作用 ; 抗炎作用中图分类号 : TS202. 3 文献标识码 : A 文章编号 : 1006 2882( 2012) 01 025 03Comparing Antimicrobial and Anti inflammatory Effect of SorbicAcid and Potassium SorbateLi Nan1， et alK
3、ey Laboratory of Forest Plant Ecology of Ministry of Education， Northeast Forestry University( Harbin 150040)Abstract: Objective: To determine and compare the sorbic acid and potassium sorbate on microbial contamination of sev-eral common food antibacterial activity， and anti inflammatory properties
4、. Methods: The broth dilution method， Griessreagent. Results: sorbic acid on Staphylococcus epidermidis， Staphylococcus aureus， Bacillus subtilis， Escherichia coli， Pseudo-monas aeruginosa and Proteus bacteria and other subjects with good inhibitory effect， the effect is stronger than potassium sor-
5、bate; in the anti inflammatory， the weaker than the effect of potassium sorbate.Key words: Sorbic acid; potassium sorbate; inhibition; anti inflammatory effects山梨酸 ( Sorbic acid) 是一种不饱和脂肪酸 ， 化学名为2， 4 己二烯酸 ， 又名为 2 丙烯基丙烯酸 ， 其结构式为 CH3 CH = CH CH = CH COOH， 由于分子结构中羧基的 、位和 、位有两个双键 ， 这两个双键产生共轭作用 ， 使远离羧基的双
6、键易发生氧化作用 ， 且分子中的两个双键易与其它游离基结合 ， 它与食品中的微生物酶系统中的巯基结合 ，可破坏酶系 ， 达到抑制微生物繁殖及防腐的目的 。山梨酸钾 ( Potassium Sorbate) 的结构式为 CH3 CH = CH CH = CH COOK， 分子式为 C6H7KO2， 分子量为 150. 22， 由山梨酸和碳酸钾中和反应而成 ， 除溶解度外 ， 具备山梨酸的基本性能 。山梨酸钾是白色或类白色颗粒或粉末 ， 无臭味 、或微有臭味 ， 易吸潮 、在空气中不稳定 ， 易氧化而变褐色 ， 对光 、热稳定 ， 约 270时溶化分解 。易溶于水 。山梨酸钾能有效地抑制霉菌 、酵
7、母菌和好氧性细菌的活性 ， 还能防止肉毒杆菌 、葡萄球菌 、沙门氏菌等有害微生物的生长和繁殖 ， 但对厌氧性芽孢菌与嗜酸乳杆菌等有益微生物几乎无效 ， 其抑止发育的作用比杀菌作用更强 ， 从而达到有效地延长食品的保存时间 ， 并保持原有食品的风味 。山梨酸在水中难溶 ， 使用极不方便 ， 一般是将其制成能易溶于水的钾盐 ， 即山梨酸钾 ， 而山梨酸和山梨酸钾的防腐原理和防腐效果是一样的 ，以扩大山梨酸类产品的应用范围 。 1 41 材料与方法1. 1 材料与试剂表皮葡萄球菌 ( Staphylococcus epidermidis) 、金黄色葡萄球菌 ( Staphylococcus aure
8、us) 和枯草芽孢杆菌 ( Bacillus subti-lis) ， 大肠杆菌 ( Escherichia coli) 和绿脓杆菌 ( Pseudomonasaeruginosa) 和变形杆菌 ( Proteusbacillus vulgaris) 均购自于黑龙江省微生物研究所和武汉保藏中心 。前三种为革兰氏阳性菌 ， 大肠杆菌和绿脓杆菌为革兰氏阴性菌 ， 后两种为真菌 。以上菌种均于营养琼脂培养基 37培养 24 h 5。RAW264. 7 细胞系购自武汉大学典型培养物保藏中心 。52黑龙江医药 Heilongjiang Medicine Journal Vol. 25 No. 1 201
9、2营养肉汤 ， 营养琼脂等皆为生化试剂 。DMEM 培养基高糖和胎牛血清均由美国 Gibco BRL 公司提供 ; Griess 检测试剂盒 ( 美国 Promega 公司 ) ; 凯基 SuperECL 检测液 ( 南京凯基生物科技发展有限公司 ) ; 其它试剂均为国产分析纯 。1. 2 仪器与设备DL CJ 2N 超净工作台 ， DK 98 1 电子恒温水浴锅 ， SHB III 循环水式多用真空泵 ， RE 52AA 旋转蒸发仪水浴槽 ， LDZX 40BI 立式自动电热压力蒸汽灭菌器 ， HZQ F 全温振荡培养箱 。1. 3 方法1. 3. 1 MIC 及 MBC 的测定MIC( M
10、inimal Inhibitory Concentration) 为最小抑菌浓度 ，即指在体外培养细菌 18 24 小时后能抑制培养基内可见菌生长的最低药物浓度 ; MBC( Minimal Bactericidal Concentra-tion) 为最小杀菌浓度 ， 即杀死 99. 9% ( 降低 3 个数量级 ) 的供试微生物所需的最低药物浓度 6， 7。山梨酸和山梨酸钾 MIC 和 MBC 的测定采用微量肉汤稀释法 。采用二倍稀释法将药液用无菌生理盐水稀释系列浓度 ( 0. 15625 5mgmL1) ， 在 96 孔板上每孔加 100L不同浓度的药液和 100L 菌液 ， 使最终菌液浓
11、度为 1 5 105cfumL1， 以无菌生理盐水加菌液做为阳性对照 ， 每个实验重复 3 次 。然后在 MIC 的基础上 ， 从每孔吸取 10L 溶液 ， 点于固体培养基上 ， 继续按 MIC 培养条件下培养 ， 以杀灭 99. 9%细菌数量的最低浓度为 MBC 8。1. 3. 2 NO 测定RAW 264. 7 细胞点 96 孔板 ( 4 105个细胞 /ml) ， 培养过夜 ， 分别加入 50、150 和 300g/ml 药物和 1g/ml LPS 的混合 DMEM 培养液 ， 同时设空白组 ( 不加药物和 LPS) 和LPS 组 ( 只加 1g/ml LPS) 。24 h 后取细胞上清
12、液 ， 通过Griess 试剂法测定 NO 的含量 9， 10。按照 N O 检测试剂盒说明 : 细胞上清液与等量的 Griess 试剂混合 ， 在 540 nm 波长处测定吸光度 ( OD 值 ) ， 制作标准曲线 ， 根据样品 OD 值在该曲线图上查出相应的 NO 含量 11。2 结果与分析表 1 山梨酸和山梨酸钾的 MIC、MBC 值比较 ( mg/mL)菌种 山梨酸钾 山梨酸MIC MBC MIC MBC表皮葡萄球菌 2. 5 2. 5 1. 25 1. 25金黄色葡萄球菌 2. 5 2. 5 2. 5 2. 5枯草芽孢杆菌 2. 5 2. 5 2. 5 2. 5大肠杆菌 2. 5 2
13、. 5 1. 25 2. 5绿脓杆菌 2. 5 2. 5 1. 25 2. 5变形杆菌 2. 5 2. 5 2. 5 2. 5表 2 Griess 法测柠檬酸等药物对 LPS 刺激的RAW 264. 7 细胞 NO 产生的影响药物浓度 ( g/mL) 山梨酸 山梨酸钾 对照组空白 0. 569767LPS 24. 43189LPS +50 23. 76744 19. 5LPS +150 20. 62791 16LPS +300 19. 11628 15图 1 Griess 法测柠檬酸等药物对 LPS 刺激的RAW 264. 7 细胞 NO 产生的影响表 3 MTT 法测柠檬酸等药物对 LPS
14、刺激的RAW 264. 7 细胞活力影响药物浓度 ( g/ml) 山梨酸 山梨酸钾 对照组空白 2. 032143LPS 1. 9532LPS +50 2. 014 2. 07LPS +150 1. 9625 2. 01LPS +300 1. 942 2. 021图 2 MTT 法测柠檬酸等药物对 LPS 刺激的RAW 264. 7 细胞活力影响3 结论3. 1 抑菌方面由表 1 可以看出 ， 山梨酸钾对于表皮葡萄球菌 、金黄色葡萄球菌 、枯草芽孢杆菌 、大肠杆菌 、绿脓杆菌和变形杆菌的 MIC 与 MBC 值均在 2. 5mg/mL 以上 ， 而山梨酸对于上述六种细胞的 MIC 与 MBC
15、值均在 2. 5mg/mL 以下 。由此可见在抑菌效果方面 : 山梨酸强于山梨酸钾 。3. 2 抗炎方面由表 2、图 1、表 3 和图 2 可以看出 ， 山梨酸在 50、150、300g/mL 浓度时 ， 抑制率分别为 2. 8%、15. 9%、22. 8%。山梨 酸 钾 在 50、150、300g/ml 浓 度 时 ， 抑 制 率 分 别 为19. 5%、36. 7%、39. 1%。NO 抗炎效果由好到次排列为 : 山梨酸钾 山梨酸 。细胞毒性实验结果 : 0 300g/mL 浓度的各种药物处理 RAW 264. 7 细胞 24 h 后 ， 与空白对照组和LPS 模型组相比 ， 细胞存活率没
16、有显著差异 ( P 0. 05) ， 说明各种药物在 0 300 molL1浓度范围内物对62 黑龙江医药 Heilongjiang Medicine Journal Vol. 25 No. 1 2012相思子毒素 P2 的体内外抗肿瘤作用研究赵秀云1， 2， 季宇彬1*， 高南南21. 哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心 ( 哈尔滨 150076) ; 2. 中国医学科学院药用植物研究所 ( 北京 100193)摘 要 目的 : 研究相思子毒素 P2( abrin P2) 在小鼠体外和体内的抗肿瘤活性 。方法 : MTT 体外试验法检测abrin P2 对体外多种人肿瘤细胞的生长抑制作
17、用 ; 体内抗肿瘤试验观察 abrin P2 对小鼠肿瘤的抑制作用及对体重 ， 胸腺 、脾脏指数的影响 。结果 : MTT 结果显示 abrin P2 对人鼻咽癌细胞 CNE 2Z、人肺癌细胞 A 549、人口腔上皮细胞KB、人胃癌细胞 BGC 均有较强的抑制作用 。体内灌胃给予不同剂量的 abrin P2( 0. 05mg/kg、0. 075mg/kg 和 0. 1mg/kg) ， 共 10 天 ， 对小鼠肿瘤 Lewis、EMT6 均有较强的抑制作用 ， 抑制率达 61. 69%、49. 6%， 各给药组与空白对照组比较差异均具有统计学意义 ( P 0. 01) ， 给药后小鼠体重及脏器指
18、数与空白对照组比较稍低 ， 但与阳性给药组比较对小鼠机体及免疫系统的损害小 。结论 : abrin P2 在体内体外均有较强的抗肿瘤作用 。关键词 : 相思子毒素 P2; MTT; 抗肿瘤中图分类号 : R73 文献标识码 : A 文章编号 : 1006 2882( 2012) 01 027 03Effect of Abrin P2 on Anti tumor in Vitro and in VivoZhao Xiuyun1， 2， et al1. Institute of Life and Environmental Sciences， Harbin University of Commer
19、ce( Harbin， 150076) ;*季宇彬为本文通讯作者RAW264. 7 细胞不具有细胞毒性作用 。山梨酸及其钾盐均有良好的抗菌消炎的作用 ， 而且毒性较小 ， 是较为安全的食品防腐保鲜剂 。但是根据上述结果表明 ， 山梨酸的抑菌性能要强于山梨酸钾 ， 而抗炎性能不如山梨酸钾 ， 所以在实际应用的过程中要有所选择 ， 并且要考虑其其他的理化特性的优缺点 ， 选择出最佳方案 。我国是拥有 13 亿的人口大国 ， 拥有广阔的市场空间 ，山梨酸及其钾盐作为新型食品防腐剂 ， 将取代苯甲酸及其盐 ， 普遍应用于食品加工工业 ， 也是我国重点发展的食品添加剂之一 。随着我国人民生活水平提高 ，
20、 对安全性要求将逐渐提高 ， 因此采用山梨酸替代苯甲酸成为发展的必然趋势 。山梨酸应用正在拓展之中 ， 其用途涉及国民经济的众多领域 ， 人们对其关注程度亦在迅速提高 。参考文献 1 王国军 . 山梨酸 ( 钾 ) 的性能及其应用 J . 食品科技 ， 2011，11: 56 58. 2 裴堃 . 山梨酸及其盐的防腐作用 J . 企业标准化 ， 2008， Z4:37 38. 3 汪多仁 . 山梨酸的开发与应用 J . 饮料工业 ， 2007， 10( 10) :05 07. 4 熊楚明 ， 高作宁 ， 李学强 . 山梨酸生产 、应用及开发前景的展望 J . 宁夏工学院学报 ， 1995 6
21、07( 1、2) . 5 周正任 . 医学微生物学 M，( 6 版 ) . 北京 : 人民卫生出版社 ，2003: 135 137. 6 Hernndez T， Canales M. Composition and antibacterial activity ofessential oil of Lantana achyranthifolia Desf( Verbenaceae) J. Journal of Ethno pharmacology， 2005， 96: 551 554. 7 ChandrasekaranM， VenkatesaluV. Antibacterial and ant
22、ifungal ac-tivity of Syzygium jambolanum seeds J . Journal of Ethno phar-macology， 2004， 91: 105 108. 8 陈丽艳 ， 施晓光 ， 付玉杰 ， 候春莲 ， 王微 ， 刘君星 . 甘草根茎乙醇提取物抗菌活性研究 J . 植物研究 ， 2006， 26( 2) : 229 232. 9 陈一晴 ， 聂少平 ， 黄丹菲 ， 等 . 大粒车前子多糖对 RAW2647细胞一氧化氮生成的影响 J . 中国药理学通报 ， 2009， 25( 8) : 1119 20. 10 李晓红 ， 齐云 ， 蔡润兰 ，
23、李蒙 ， 王翔岩 ， 彭成 . 芦荟大黄素对LPS 诱导的 RAW2647 细胞 NO 生成及 iNOS 表达的影响 J . 中国药理学通报 ， 2010， 26( 4: ) : 488 92. 11 Chen C C， TsaiP C， WeiB L， et al. 8 Prenylkaempferol sup-pressesinducible nitric oxide synthase expression through inter-fering with JNK mediated AP 1 pathway in murine macropha-ges J . Eur J Pharmacol， 2008， 590( 1 3) : 430 6.收稿日期 : 2011 09 1572黑龙江医药 Heilongjiang Medicine Journal Vol. 25 No. 1 2012
