1、 1 说明书 Pierce BCA Protein Assay Kit （ Pierce BCA 蛋白定量分析试剂盒） NCI3225CH NCI3227CH 2436.0 目录号 描述 NCI3225CH Pierce BCA Protein Assay Kit（ Pierce BCA 蛋白定 量 分析试剂 盒） ，试剂 可用 于 500 次试 管 或 5000 次微 孔 板分析 NCI3227CH Pierce BCA Protein Assay Kit（ Pierce BCA 蛋白定 量 分析试剂 盒） ，试剂 可用 于 250 次试 管 或 2500 次微 孔 板分析 试剂盒组 分 ：
2、 BCA 试剂 A， 1000mL（产品目 录 号 NCI3225CH） 或 500mL（产品目 录 号 NCI3225CH)。 含 有 溶解于 0.1M 氢氧化 钠 中 的 碳酸钠 、 碳 酸 氢钠、 二 喹 啉 甲酸（ BCA） 以及酒 石 酸 钠 。 BCA 试剂 B， 25mL，含有 4%的 硫酸铜 白蛋白标 准品 ， 2mg/mL， 10 1mL 安瓿，包含 浓度 为 2mg/mL 的 牛血清 白 蛋 白 （ BSA）和 0.05%的 叠氮 化钠， 溶解 于 0.9%生 理 盐水中。 储存 ：在 收到 试剂盒 后 将 其 储存于 室 温 。 常温运 输 。 注：如 果 在 寒 冷天气
3、 进 行 运 输，或 在 保 存 期间， 试 剂 A 或 试 剂 B 发生沉淀 ， 可 通 过对溶 液 进行 温和加 热 和 搅 拌，将 沉 淀 溶 解。当 试 剂 盒 发生变 色 ， 或 证明有 微 生 物 污染时 ， 请 将 试剂丢 弃 。 目录 产品简介 . 2 标准品 和 工 作 液的制 备 （ 两 种检测 方 案 均 适用 ） 3 试管检 测 方 案 （样品 与 工 作 液的比例 =1:20） 4 微孔板 检 测 方 案（样 品 与 工 作液的 比 例 =1:8） 6 常见问 题 及 解 决方案 . 7 Thermo Scientific 相关产 品 8 附加信息 .9 参考文献 .
4、 11 2 产品简介 Thermo Scientific Pierce BCA 蛋白定量分析试剂盒是一种基于 二喹 啉 甲酸（ BCA） ，利用 比 色 法 测定总 蛋 白 浓度的蛋 白定量 试 剂 盒 ，可与 去 污 剂 兼容。 本 方 法 将双缩 脲 反 应 和显色 反 应 结 合在一 起 ： 前 者为在 碱 性 介 质中， 蛋 白质 可将 Cu2+还原 成 Cu1+ 的反应 ，后者为 使 用 含 有二喹 啉 甲 酸 （ BCA） 1 的 独特试 剂 ， 利 用比色 法检 测 Cu1+， 具有高灵敏度 和高选 择 性 的 特点。 此 检 测 方法中 产 生 的 紫色显色物质是由两分子 的
5、 BCA 和 一 分子的亚铜离子螯合而形成的。该水 溶性复合物 在 562nm 处 具有很强的吸光值，在很宽的蛋白质浓度范围（ 20-2000g/mL） 内 ，吸光值和蛋白质浓度具 有良好的线性关系。 BCA 法并不是真正的终点检测，实验中颜色将会持续变化。但是，在孵育结束后，颜色继续变 化的速率非常慢，足以同时检测大量的样品。 据报道 ， 蛋 白 质的大 分 子 结 构、肽 键 的 数 量以及 四 种 特 定氨基 酸 （ 半 胱氨酸 、 胱 氨 酸、色 氨 酸 和 酪氨酸 ） 的存 在与 BCA 产生 颜 色反应 相 关 2。对二 肽 、 三 肽和四 肽 的 研 究表明 ， 整 体 蛋白产
6、生 颜 色 的强度 要 高 于 单个显 色 基 团所产生 的颜色 的 简 单 加和 2。 因 此 ，一般 采 用 常 见蛋白 质 诸 如 牛血清 白 蛋 白 （ BSA）作 为 参照标 准 品 ， 来确定 目 标蛋 白质 的浓度 。 首 先 ，需要 制 备 经 过梯度 稀 释 的 、浓度 已 知 的 一组蛋 白 质 标 准品， 然 后 将 其与未 知 浓 度 的待测 蛋 白质 一起 检测， 根 据 绘 制出的 标 准 曲 线对每 个 未 知 浓度的 样 品 进 行蛋白 浓 度 的 计算。 如 果 要 求对未 知 蛋 白 浓度进 行 精确 的定 量分析 ， 则 建 议选择 一 个 与 未知蛋 白
7、 质 的 特性相 类 似 的 蛋白质 标 准 品 ；例如 ， 在 分 析免疫 球 蛋 白 样品时 ， 可以 使用 牛 球 蛋白 （ BGG）作 为标 准品（ 参 见 “Thermo Scientific 相关产品 ”章节）。 本手册 介 绍 了 两种检 测 方 案 。在这 两 种 方 案中， 试 管 检 测方案 要 求 蛋 白质样 品 的 体 积较大 （ 0.1mL）； 但 是 ，由于 该方案 中 使 用 的样品 与 工 作 液之间 的 比 例 为 1:20（ v/v），因 此 最 大 程度地 降 低 了 干扰物 质 的 影 响。微 孔 板 方 案操作 样品更 加 方 便 ，且需 要 的 蛋
8、白样品 的 体 积 较小 （ 10-25L）， 但 是 ， 由于所 使 用 的 样品与 工 作 液 之间的 比例 为 1:8（ v/v）， 因 此该方 法 与 试 管法相 比 ， 在 克服干 扰 物 质 对测定 结 果 的 影响方 面 灵 活 度低、 且 检 测 浓度较 低 的 蛋 白样 品不如 试 管 法 灵敏。 3 瓶号 A 稀释液的 体 积 (L) 0 B 125 C 325 D 175 E 325 F 325 G 325 H 400 I 400 瓶号 A 稀释液的 体 积 (L) 700 B 400 C 450 D 400 E 400 F 400 标准品和工作液的制备（两种检测方案均
9、适用） A. 梯度稀释 牛血 清白蛋白（ BSA）标准品 按照表 1 制 备 一组蛋 白 质 标 准品。 将 一 安 瓿的牛 血 清 白 蛋白标 准 品 （ BSA） 稀释 到 几个干 净 的 小 瓶中， 最 好使 用与 待测样 品 相 同 的稀释 液 。 每 一个 1mL 安 瓿的 2mg/mL 牛血清 白 蛋 白 标准品 足 够 用 于制 备 表 1 中 所列出 的 任 意一组稀 释范围 的 标 准 品；每 个 稀 释 浓度的 标 准 品 的体积 足 够 用 于 3 次 重复 检 测。 表 1. 系 列 稀 释牛血 清 白 蛋 白（ BSA） 标 准品 用于标 准 方 案 的稀释 方 法
10、（ 检测范围 = 20-2,000g/mL） BSA 的体 积 和来源 (L) BSA 终浓度 (g/mL) 300L 原液 2000 375L 原液 1500 325L 原液 1000 175L B 瓶 稀 释液 750 325L C 瓶 稀 释液 500 325L E 瓶 稀 释液 250 325L F 瓶 稀 释液 125 100L G 瓶 稀 释液 25 0 0 =空白 用于试 管 增 强 方案的 稀 释 方 法（检 测 范 围 = 5250g/mL） BSA 的体 积 和来源 (L) BSA 终浓度 (g/mL) 100L 原液 250 400L 瓶 A 稀 释液 125 300L
11、瓶 B 稀释液 50 400L 瓶 C 稀释液 25 100L 瓶 D 稀 释液 5 0 0 = 空白 B. 制备 BCA 工 作液（ WR） 1. 使用下 述 公 式 来确定 所 需 的 工作液 的 总 体 积： 4 (标 准 品的 个 数 + 待 测蛋 白质样 品 的 个 数 ) ( 实 验 重 复次 数 ) (用 于每个 样 品 的 工作液 的 体 积 ) =所 需的 工 作 液总体积 举例： 在 标 准 试管检 测 方 案 下，检 测 三 个 待测蛋 白 质 样 品，且 每 个 样 品进行 两 次 重 复实验： (9 个 标 准品 + 3 个待 测 蛋 白 质样 品 ) (2 次重复
12、 实 验 ) (2mL) = 48mL 工 作 液 注：在 试 管 方 案中， 每 个样 品需要 2.0mL 的工作 液 ， 而 在微孔 板 方 案 中，每 个 样 品 仅需要 200l 工作液。 2. 将 50 份 BCA 试剂 A 与 1 份 BCA 试 剂 B 混合（试剂 A 与 试 剂 B 的比率 =50:1） ，制备 工 作 液 。上述 示 例 中 ，将 50mL 试剂 A 和 1mL 试剂 B 混合即可。 注：当 试 剂 B 加入到 试 剂 A 中时 ， 开 始 可观察 到 有 浑 浊产生 ， 经 搅 拌后浑 浊 会 迅 速消失 ， 得 到 绿色澄 清 工作 液。根 据 所 要 分
13、析的 样 品 数 量，配 制 足 够 体积的 工 作 液 。工作 液 储 存 于密闭 容 器 中 ，在室 温 下 可 稳定保 存 数 天。 实验方案小结（标准试管方案） 试管方案（样品与工作液的比 例 =1:20） 1. 取各个 稀 释 浓 度的蛋 白 质 标 准品和 待 测 蛋 白质样 品 各 0.1mL，加入 到 做好标 记 的 试 管中。 2. 在每个 试 管 中 加入 2.0mL 工 作液， 充 分 混 合。 5 3. 将试管 密 封 ， 根据不 同 实 验 方案， 选 择 相 应温度 和 时 间 进行孵 育 ： 标准方 案 ： 37C， 30 分 钟（检 测 范 围 = 20-20
14、00g/mL） 室温方 案 ： 室温， 2 小 时 （检测 范 围 = 20-2000g/mL） 增强方 案 ： 60C， 30 分 钟（检 测 范 围 = 5-250g/mL） 注： 延长孵 育 时 间 或升高 温 度 将 会增加 单 次 检 测在 562nm 处的绝 对 吸 光 值，也 会 降 低 试剂的 最 低 检 测下限 以 及 该 方 案的检 测 范 围 。 标准方 案 （ 37C 下孵育 ） 或者增 强 方 案 （ 60C 下 孵 育）， 建 议 使 用水浴 来 加 热 试管。 细 菌 培 养箱传 热 不均 匀，可 能 会 导 致显色 上 的 明 显误差。 4. 将所有 试 管 冷
15、 却至室 温 。 5. 将分光 光 度 计 设定在 562nm，使用 一 只 仅 装有水 的 比 色 皿将仪 器 调 零 。然后 ， 在 10 分钟 内 依 次 检测所 有 样 品 的 吸光值。 注： 由 于 BCA 分析 方 法 并 没有达 到 真 正 的终点 ， 因 此 ，在冷 却 至 室 温以后 仍 然 会 继续显 色 。 但 是，在 室 温 时 的 显色速 率 比 较 慢，如 果 在 10 分钟 内 完 成 所有样 品 的 检 测，则 不 会 产 生明显 的 误 差 。 6. 将各个 标 准 品 和待测 蛋 白 质 样品在 562nm 处的吸光 值 减去空 白 标 准 品在 562nm
16、 处的平 均 吸 光 值。 7. 将 BSA 标准 品在 562nm 处经过 空 白 校 正的吸 光 值 对 其浓度（ g/mL）作 图 ， 绘 制标准 曲 线 。 使用该 标 准 曲 线来 确定每 个 待 测 蛋白质 样 品 的 蛋白质 浓 度。 6 微孔板方案（样品与工作液的比例 =1:8） 1. 取各个 稀 释 浓 度的蛋 白 质 标 准品和 待 测 蛋 白质样 品 各 25L ，加 入到 微孔板 中 （ 检 测范围 = 20- 2000g/mL）。 注：如 果 样 品 有限， 则 可 取 标准品 和 待 测 未知 样 品 10L（样 品 与 工 作液的 比例 为 1:20）。 然 而
17、，在 这 种 情 况 下，定 量 分 析 的检测 范 围 将 被限 制 在 125-2000g/mL。 2. 在每一 个 孔 中 加入 200L 工作液 ， 并 在 震荡器 上震 荡 30 秒 ，使 其充分 混 合。 3. 将微孔 板 密 封 ，在 37C 孵 育 30 分 钟 。 4. 将微孔 板 冷 却 到室温 。 使 用 微孔板 读 数 仪 ，测量 样品 在 562nm 或该波长 附 近 的 吸光值。 注： 该方法 在波 长 540-590nm 范围内 均 可 成 功得到 结 果。 由于微 孔 板 酶 标仪的 光 路 长 度比使 用 比 色 皿的分 光 光 度 计短， 因 此 微 孔板方
18、 案 要 求 样品与 工 作 液 的比例 更高， 才 能 获 得与试 管 标 准 方案相 同 的 灵 敏度。 如 果 想 要得到 较高 的 562nm 处的吸光 值 ， 则 需将孵育 时间增 加 到 2 小时。 延长孵 育 时 间 或升高 温 度 将 会增加 样品 在 562nm 处的吸光 值 ， 也 会降低 试 剂 的 最低检 测 下 限 和该方案 的检测 范 围 。 如果对 标 准 品 和待测 样 品 均 用相同 方 式 处 理，上 述 这 些 调整可 能 会 改 进实验 结 果。 5. 将各个 标 准 品 和待测 蛋 白 质 样品在 562nm 处的吸光 值 减去空 白 标 准 品在 5
19、62nm 处的平 均 吸 光 值。 6. 将 BSA 标准 品在 562nm 处经过 空 白 校 正的平 均 吸 光 值对其 浓 度 （ g/mL）作图，绘制 标 准 曲 线 。 注：如果 使用与 微 孔 板 读数仪 相 关 联 的曲线 拟 合 算 法，四 参 数 （ 二次方 程 ） 或 最佳曲 线 拟 合 将会比 简 单 的 线性拟合 提供更 加 准 确 的结果 。 如 果 手工对 这 些 结 果作图 ， 对 于 标准曲 线 上 的 各个点 ， 采 取 点对点 描 画 曲 线的方 法，比 直 接 进 行线性 拟 合 的 结果更 好 。 7 常见问题及解决方案 问题 可能的原因 解决方案 试
20、管未 显 色 样品中 含 有 铜 离子螯 合 试剂 对样品 进 行 透 析、脱 盐 或 稀 释处理； 增加工 作 液 中 铜离子 的 浓 度 （例如 ： 试 剂 A 与 试剂 B 的比例调 整 至 50:2）； 使用目 录号 为 23215 的 产 品来除 去 样品 中的干 扰 物质 空白试 管 吸 光 值正常 ， 但 是 标准 品和待 测 样 品 所显示 的 颜 色 比预 计值低 缓冲液 溶 剂 为 强酸或 强 碱 ， 改变 了工作 液 的 pH 值。 对样品 进 行 透 析、脱 盐 或 稀 释 检测吸 光 度 时 使用的 波 长 不 对 在 562nm 处检测吸 光 值 样品显 色 比 预
21、 计的颜 色 深 蛋白质 浓 度 太 高 稀释样品 样品含 有 脂 质 或脂蛋白 在样品 中添 加 2%的 SDS 以消除 来 自 脂 质 的干扰 3 使用目 录号 为 23215 的 产 品来除 去 样品 中的干 扰 物质 所有试 管 （ 包 括空白 试 管 ） 都呈 现暗紫色 缓冲液 中 含 有 还原剂 对样品 进 行 透 析或稀 释 ； 使用目 录号 为 23215 的 产 品来除 去 样品 中的干 扰 物质 缓冲液 中 含 有 巯基 缓冲液 中 含有 生物 胺 （ 儿 茶酚 胺） 需要在 另 一 波 长处检 测 吸 光 值 分光光 度 计 或 微孔板 读 数 仪 不具 备 562nm
22、滤光片 尽管标 准 曲 线 的斜率 以 及 定 量分析 的 总 体灵敏 度 会 降 低， 但 在 540nm 至 590nm 之间的 任 意 波 长都可 能 检 测 到颜色变 化。 A. 干扰物质 已知有 些 物 质 会干扰 BCA 定量分 析 ， 包 括还原 性 物 质 、螯合 剂 以 及 强酸或 强 碱 。 因为即 使 浓 度 很低， 这 些 物 质也 会干扰 蛋 白 质 的定量 ， 所 以 要避免 缓 冲 液 中含有 下 述 物 质： 维生素 C EGTA 铁离子 低纯度 蔗 糖 儿茶酚胺 低纯度 甘 油 脂类 色氨酸 肌酐 过氧化 氢 蜜二糖 酪氨酸 半胱氨酸 酰肼 酚红 尿酸 8
23、另外一 些 物 质 对 BCA 定 量 分析方 法 的 干 扰程度 较 低 ， 当其在 原 始 样 品中含 量 低 于 某特定 浓 度 时 ，仅对 结 果 造 成微 小影响 （ 可 耐 受） 。 表 2 列 出了在 试 管 标 准方案 中 ， 一 些物质 的 最 大 可兼容 浓 度 （ 参见本 说 明 书 最后一 页 ） 。 在试 管标准 方 案 中 ，如果 由 于 一 定浓度 的 某 物 质的存 在 ， 而 引入的 蛋 白 质 浓度估 算 误 差 10%，则 认 为当该 物 质 低 于此 浓度时 ， 该 物 质与 BCA 定 量分析 方 法 兼 容。检 测 这 些 物质所 使 用 的 工作液
24、 都 是 新 鲜配制 的 ， 即 配制完 工 作 液 后立 即进行 测 试 。 我们将 经 过 空 白校 正 的 562nm 处的吸光值（ 使 用 1000g/mL BSA 标准品 +干扰 物质） 与 在 0.9%生理 盐水中 制 备 的 相同标 准品 在 562nm 处的吸光 值 进 行 比较。 在 样 品 与工作 液 的 比 例为 1:8（ v/v）的微 孔 板 方 案中，对 这些物 质 的 最 大可兼 容 浓 度 将会变 低 。 此外， 多 种 干 扰物质 可 能 产 生加和 作 用 ， 例如当 样 品 缓 冲液中 含 有 多 种干扰 物 质 时 ，即使 其 中 单 一干扰 物 质 的
25、浓度 低于以 下 列 表 中的可 兼 容 浓 度，总 体 仍 有 可能对 蛋 白 质 的定量 分 析 产 生干扰。 B. 消除或最 小化 干扰物质 影响 的策略 在 Pierce BCA 蛋白定量分 析 中，可以通 过 下述几种方 法 中的一种来 消 除或克服干 扰 物质的影响： 通过透 析 或 凝 胶过滤 来 除 去 干扰物 质 。 对样品 进 行 稀 释，直 到 该 物 质不再 产 生 干 扰为止 。 只 有 当起始 蛋 白 质 浓度足 够 高 ， 在稀释 以 后 ， 其浓度 仍 能保 持在定 量 分 析 的范围 内 时 ， 这种方 法 才 有 效。 用丙酮 或 三 氯 乙酸（ TCA）
26、沉淀样 品 中 的 蛋白质 。 将 含 有干扰 物 质 的 液体成 分 丢 弃 ，蛋白 质 沉 淀 可被轻 松 地溶 解在超 纯 水 中 ，或直 接 溶 解 在碱性 BCA 工作 液 中 4。 请访问 ，查看 该 方 案 的详细 步 骤 。 或 者，也 可 以 使 用目录 号 为 23215 的产 品 去除干 扰 物 质 （参见 相关 的 Pierce 产 品 ）。 增加工 作 液 中 铜离子 的 含 量 （试剂 A 与 试剂 B 的以 50:2 或 50:3 的 比例混 合 制 备 工作液 ） ， 这 种方法 可 以 消 除 铜螯合 剂 导 致 的干扰。 注：为 了 获 得 最高的 准 确
27、 度 ，必须 对 蛋 白 质标准 物 质 和 待测样 品 进 行 相同的 处 理。 9 相关的 Thermo Scientific 产品 15041 Pierce 96-Well Plates （ Pierce 96 孔微 孔 板）， 100 个 /包。 15075 Reagent Reservoirs（加 样 槽）， 200 个 /包。 15036 Sealing Tape for 96-Well Plates（ 96 孔 板 密封条）， 100 个 /包。 23209 Albumin Standard Ampules（白蛋白 标准 品安瓿）， 2mg/mL, 10 1mL 安瓿，含有牛血
28、 清 白 蛋白（ BSA） 23208 Pre-Diluted Protein Assay Standards: Bovine Serum Albumin (BSA) Set（预稀 释 的蛋白定 量 分 析标准品 ：牛 血清白蛋 白（ BSA）套装 ） ， 7 3.5mL 23212 Bovine Gamma Globulin Standard（牛 球蛋白（ BGG）标准品 ） ， 2mg/mL, 10 1mL 安瓿 23213 Pre-Diluted Protein Assay Standards（ 预 稀释的蛋 白定 量分析标 准品 ），（ BGG） 套装， Set, 7 3.5mL 安瓿
29、 23235 Pierce Micro BCA Protein Assay Kit （ Pierce Micro BCA 蛋白定 量 分析试剂 盒） ， 检 测 范围 0.5-20g/mL 23236 Coomassie Plus (Bradford) Assay Kit（ Coomassie Plus (Bradford) 定量分析 试剂 盒），检 测 范 围 1-1500g/mL 23215 Compat-Able Protein Assay Preparation Reagent Set （ Compat-Able 蛋白定量分析制 备 试 剂套装） 23250 Pierce BCA Pr
30、otein Assay KitReducing Agent Compatible（ Pierce BCA 蛋白 定 量分析试 剂盒 - 还原剂兼 容型 ） 附加信息 A. 关于下述 事项 的更多信 息， 请访问我 们的 网站： 常见问 题 解答 操作技 巧 ： 如 何从 BCA 蛋 白定量 待 测 样 品中去 除 干 扰 物质 B. 总蛋白定 量分 析试剂的 其它 产品 如果样 品 中 包 含的还 原 物 质 或金属 离 子 螯 合剂所 引 起 的 干扰无 法 克 服 ，请尝 试使 用 Thermo Scientific Coomassie Plus (Bradford) 定 量分析 试 剂
31、盒 （产品 目录 号 23236）， 该产品 对 这 些 物质的 敏 感度 较低。 10 C, horse heart C. 清洗和重 复使 用玻璃器皿 重复使 用 玻 璃 器皿时 需 要 特 别注意 。 必 须 将所有 玻 璃 器 具进行 清 洗 ， 并用超 纯 水 进 行彻底 的 最 后 冲洗。 D. 对不同蛋 白质 的反应特性 每一种 常 见 的 总蛋白 定 量 分 析方法 在 检 测 不同的 蛋 白 质 时，其 反 应 特 性是不 同 的 。 这些差 异 可 能 与蛋白 质 的 氨 基酸 序列 、 pI、 蛋 白质结 构 ， 以 及能够 引 起 蛋 白颜色 反 应 产 生显著 变 化
32、 的 侧链或 辅 基 等 有关。 大 多 数 蛋白定 量 分 析 方法 使用 BSA 或 免疫球 蛋 白 （ IgG） 作为 标 准品， 来 确 定 待测样 品 中 蛋 白质的 浓 度 （ 参见图 1）。 然而， 如 果 对蛋白定 量的准 确 度 要 求非常 高 ， 请 使用纯 化 的 目 标蛋白 绘 制 标 准曲线。 表 3.不同蛋 白 质之间的 差异 性。使 用 标 准 试管 方案得 到 的 待 测蛋白 质 相 对 于 BSA 的吸 光值的 比例 （ 562nm） 比例 = (蛋 白质 样 品的平 均 吸光 度 ) / (BSA 的 平 均 吸 光值 ) 被 检 测 的蛋 白 质 样 品
33、比例 Albumin, bovine serum（牛 血清 白蛋白） 1.00 Aldolase, rabbit muscle（兔肌 肉 醛缩酶） 0.85 -Chymotrypsinogen, bovine（ 牛 -胰凝 Cytochrome 乳蛋白 酶 原 ） （马 心 肌细胞 C Gamma globulin, bovine（牛丙 种 球蛋 白） 1.14 0.83 1.11 图 1：使 用试 管标准 方 案 （ 37C/30 分钟 孵育 ） 时 BSA 和 IgG, bovine（牛 免疫球 蛋 白） 1.21 IgG, human（ 人 免疫球 蛋 白） 1.09 IgG, mous
34、e（小 鼠免疫 球 蛋白） 1.18 IgG, rabbit（兔 免 疫球蛋 白 ） 1.12 IgG, sheep（ 绵 羊免疫 球 蛋白） 1.17 Insulin, bovine pancreas（牛 胰腺 胰岛 1.08 BGG 的 颜色 反应曲线 Myoglobin, horse heart（ 马心 肌肌 红蛋 白） 0.74 Ovalbumin（ 卵 白蛋白） 0.93 Transferrin, human（人 转 铁蛋 白 ） 0.89 1.02 标 准差 0.15 变 异 系 数 14.7% 11 表 3 列 出了 不 同蛋白 质 之 间 显色反 应 的 差 异性。 所 有
35、的 蛋白质 浓 度 均 为 1000g/ml，使用 30 分 钟 /37C 试管 方案进 行定量 。 将 BSA 的 平 均 吸 光值归 一 化 设 为 1.00， 其 它 待测蛋 白 的 数 据则用 其 平 均 吸光 值 与 BSA 平均 吸 光 值 的比例 表示。 引用参考文献 1. Smith, P.K., et al. (1985). Measurement of protein using bicinchoninic acid. Anal. Biochem. 150:76-85. 2. Wiechelman, K., et al. (1988). Investigation of t
36、he bicinchoninic acid protein assay: Identification of the groups responsible for color formation. Anal Biochem. 175:231-7. 3. Kessler, R. and Fanestil, D. (1986). Interference by lipids in the determination of protein using bicinchoninic acid. Anal. Biochem. 159:138-42. 4. Brown, R., et al. (1989).
37、 Protein measurement using bicinchoninic acid: elimination of interfering substances. Anal. Biochem. 180:136-9. 产品参考文献 Adilakshami, T. and Laine, R.O. (2002). Ribosomal protein S25 mRNA partners with MTF-1 and La to provide a p53-mediated mechanism for survival or death. J. Biol. Chem. 277:4147-51.
38、Fischer, T., et al. (1999). Clathrin-coated vesicles bearing GAIP possess GTPase-activating protein activity in vitro. Proc. Nat. Acad. Sci. 96:6722-7. Prozialeck, W.C., et al. (2002). Chlamydia trachomatis disrupts N-cadherin-dependent cell-cell junctions and sequester -catenin in human cervical ep
39、ithelial cells. Infection and Immunity 70:2605-13. Roberts, K.P., et al. (2002). A comparative analysis of expression and processing of the rat epididymal fluid and sperm-bound forms of proteins D and E. Biology of Reproduction 67:525-33. Triton 是 Rohm Phosphate (0.1 M), NaCl (0.15 M), pH 7.2 (# 283
40、72) 未稀释 PIPES, pH 6.8 100mM RIPA lysis buffer; 50mM Tris, 150mM NaCl, 0.5% DOC, 1% NP-40, 0.1% SDS, pH 8.0 未稀释 Sodium acetate, pH 4.8 200mM Sodium azide 0.2% Sodium bicarbonate 100mM Sodium chloride 1M Sodium citrate, pH 4.8 or pH 6.4 200mM Sodium phosphate 100mM Tricine, pH 8.0 25mM Triethanolamine, pH 7.8 25mM Tris 250mM TBS; Tris (25mM), NaCl (0.15 M), pH 7.6 (# 28376) 未稀释 Tris (25mM), Glycine (192mM), pH 8.0 (# 28380) 1:3 稀释液 * * 用超纯 水 稀 释 。 * 测试去 污 剂 时 ，使用 了 高纯 度 的 Thremo Scientific Surface-Amps 产品， 该 产品 的 过氧化 物 含量 较 低。 vwtW 13
