1、,维生素类药物的分析,基本要求,一、掌握维生素类药物的结构特点与分析方法的关系。 二、掌握维生素类药物的鉴别原理与方法。 三、掌握维生素D的HPLC含量测定法和维生素E的GC含量测定法。 四、掌握维生素B1非水溶液滴定法与维生素C碘量法的测定原理、方法与注意事项。 五、熟悉本类药物其他的含量测定方法。 六、熟悉本类药物杂质检查方法。,返 回,概述,维生素：是维持人体正常代谢机能所必需的 微量营养物资。人体不能合成维生素。,VitA、D2、D3、 E、K1 等,脂溶性,水溶性,VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。,分类,按溶解度分,-H VitA醇 -COCH3
2、VitA醋酸酯 -COC15H31 VitA棕榈酸酯,R :,第一节 维生素A,结构：,性质：,溶解性：脂溶性 不稳定性：氧化成醛酸、脱水成脱水维生素、 紫外吸收：325-328 nm，可用于鉴别与含量测定 与三氯化锑显色：产生不稳定的蓝色,去水VitA（VitA3）,VitA,立体异构体 氧化降解产物 合成中间体,UV法,（一）,维生素A2 维生素A3 环氧化物 维生素A醛 维生素A酸,三氯化锑比色法,（二）,优点 简便快速,max 618nm620nm,标准曲线法,（二）,返 回,氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱),第二节 维生素B1,HCl,Cl-,（一）,溶解性,1、易溶于水,2、水溶液
3、呈酸性,（二）,UV,共轭双键,max = 246nm,与生物碱,（三）,硫色素反应,（四）,（五）盐酸根呈氯化物的反应，用于鉴别。,ChP,硫色素,2H,VitB1,H+,H+,H+,H+,Cl-反应,喹那啶红亚甲蓝（紫红天蓝）,反应摩尔比为1：2,（二）紫外分光光度法 原理维生素B1片的测定讨论,（1）灵敏度高，线性范围宽 （2）代谢产物不干扰，适用于体液分析,第三节 维生素C,L抗坏血酸,水溶性： 酸性： 旋光性： 还原性： 糖的性质：呋喃环 紫外吸收： 稀盐酸中max为243，中性或碱性中红移至265,二烯醇结构,二酮基结构,二烯醇结构,糖类的显色反应,50,结构与糖类相似,C3OH的
4、 pKa = 4.17,C2OH的 pKa = 11.57,一元酸,L(+)抗坏血酸 活性最强,手性C（C4、C5）,*,*,与碱反应,1、与AgNO3反应,2、与2，6 - 二氯靛酚反应,(ChP2005),氧化型,玫瑰红色,(ChP2005),（玫瑰色）,（无色）,BP,0.01mol/L HCl,三、杂质检查,1.溶液的澄清度与颜色：有色杂质 分光光度法 2.铁、铜离子：原子吸收分光光度法,指示剂 淀粉指示液,H+,取本品约0.2g，精密称定，加新 沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶 解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴 定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝 色，在30秒内不褪。
5、每1ml碘滴定液 (0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6,（1）酸性环境 HAC,（2）新沸冷H2O,减慢VitC被O2氧化速度,（3）立即滴定,赶走水中O2,减少O2的干扰,（4）附加剂干扰的排除,片剂 滑石粉 过滤,USP,JP,第四节 维生素D,维生素D2,一、结构与性质,维生素D3,开环的甾体：具有甾类化合物的显色反应，可用于鉴别。,手性碳原子：具有旋光性，可用于鉴别。,多烯：可进行紫外检测。,二、鉴别试验,1. 显色反应,三氯化锑反应 橙红色渐变粉红,三氯化铁反应 橙黄色,二氯丙醇和乙酰氯反应 绿色,2. 比旋度鉴别,维生素D2,维生素D3,溶 剂,浓 度,比旋度值,
6、无水乙醇,无水乙醇,40mg/ml,5mg/ml,+102.5+107.5,+105+112,注意事项：应于容器开启30分钟内取样，在溶液配制后30分钟内测定。,3.区别反应：以96%乙醇为溶剂，加乙醇和85%硫酸，D2 显红色，在570nm处有最大吸收，D3显黄色， 在495nm处有最大吸收。,4.其他方法：TLC、HPLC、制备衍生物测熔点,三、杂质检查,维生素D2中麦角甾醇的检查：加洋地黄皂苷溶液，混合，放置18h不得发生浑浊或沉淀。,前维生素D的光照产物,四、含量测定方法,中国药典（2005年版）采用正相高效液相色谱法测定维生素D的含量，定量方法为内标法，内标物为邻苯二甲酸二甲酯，该法
7、分为三个方法。 固定相：硅胶 流动相：正己烷-正戊醇（997：3）,第二法：用于有杂质的干扰的情况，步骤如下： 1皂化处理：皂化、乙醚提取、洗涤提取液、蒸除乙醚、制备供试液A。 2净化：供试液A经液相色谱分离，准确收集含有维生素D及前维生素D混合物的全部流出液，制 备成供试液B。 固定相：ODS 流动相：甲醇-乙腈-水（50：50：2） 3含量测定：取供试液B按第一法测定。,第一法：用于无维生素A醇及其它杂质的干扰的情况,第三法：用于经第二法处理后仍有杂质的干扰的情况。步骤如下： 1制备供试液：取供试液A，净化，水浴加热，得供 试液C。 制备对照液：对照品储备液：稀释、加热。 2含量测定：在第
8、一法的色谱条件下，交替精密进样对照液和供试液，按外标法定量。,返 回,苯并二氢吡喃醇,第五节 维生素E,*,*,*,dl生育酚醋酸酯,苯环 + 二氢吡喃环 + 饱和烃链,1、UV,2、乙酰化的酚羟基 易水解,緘,緘,醌型化合物,杂质，需检查,生育红,（一）,硝酸反应,橙红色,（橙红色）,生育红,生育酚,HNO3,强氧化剂,生育酚,对-生育醌,弱氧化剂,血红色,= 41.045.5,max = 284nm,min = 254nm,0.01%无水乙醇中,UV法,（三）,薄层板 硅胶G,展开剂 环己烷 -乙醚（4 ：1）,显色剂 硫酸（105 5）,VitE Rf = 0.7 -生育酚 Rf = 0
9、.5 -生育醌 Rf = 0.9,TLC法,（四）,2. 游离生育酚,杂质检查,三、,原理,酸度 以NaOH滴定液（0.1mol/L）体积控制。,GC法（法定方法）,（一）,GC特点,1、,选择性好 灵敏度高 速度快 分离效能好,挥发性低、不稳定、极性强衍生化易受样品蒸气压限制,载气N2 固定液硅酮（OV-17） 担体硅藻土或高分子多孔小球 柱温265 检测器氢火焰离子化检测器(FID) 内标正三十二烷n 500R2,内标法加校正因子,内标法,供试液（样品+内标）,内标物,对照液（对照+内标）,是样品中不存在的物质 与被测组分峰靠近 能与各组分完全分离 与被测组分的量接近,（二）HPLC法外标法此外，还有铈量法、比色法和荧光法,返 回,练习与思考,A型题,1. 维生素B1的鉴别方法是 A.三氯化铁反应 B. 硫色素反应 C. 柯柏反应 D.与碱性酒石酸铜试液反应 E. 双缩脲反应,2. 维生素E中国药典规定的含量 测定方法为 A.非水溶液滴定法 B.旋光法 C.HPLC法 D.紫外分光法 E.GC法,B型题,A。亚消基铁氰化钠反应 B. 硫色素反应 C.硝酸反应 D. 三氯化锑反应 E. 硝酸银试液的反应1. 维生素C 2. 维生素E3. 维生素B14. 维生素A,E,C,B,D,
