1、,阴道微生态评价 及其适宜技术,个旧市人民医院检验科 王锐,护理生殖道 关注微生态最重要！,阴道 粘膜,阴道 正常 菌群,阴道 免疫 系统,阴道微生态概念,阴道防御系统,阴道微生态是阴道最重要的防御系统,阴道原籍菌(乳酸杆菌) 数量:8x107 cfu/ ml,5%,95%,正常育龄妇女阴道菌群由六种不同种类的 细菌以及念珠菌、支原体等组成。,正常阴道内有100种微生物存在。,这些微生物在阴道内形成生态平衡。,阴道菌群（阴道的微生态系统）,阴道微生态概念,CFU (Colony-Forming Units) 经培养所得菌簇形成单位的英文缩写。 细菌（可见）和真菌的测量单位。cfu:colony
2、- forming unit，菌落形成单位，将稀释后的一定量的菌液 通过浇注或涂布的方法，让其内的微生物单细胞一一分 散在琼脂平板上，待培养后，每一活细胞就形成一个菌 落。与常规利用显微镜对微生物数量进行测量不同，主 要是对可见（即多数情况下形成菌落）的细菌数量进行 测量的单位。 意思就是每毫升菌液中含有多少单细胞！,阴道粘膜上皮细胞,纵切面示意图,（过路菌）,乳杆菌（原籍菌）,（条件致病菌）,是由不同种属 的宿主传来的,是其自身宿主个体对其 无免疫反应或低免疫反应， 是宿主个体固有的菌群,是由同种属不同 宿主个体传来的,阴道微生态概念,乳杆菌的作用机制,分解糖原，维持阴道酸性环境。 产生多种
3、抑菌物质：乙酸、16-18碳脂肪酸H202、乳酸菌素、硬脂酸等。 竞争粘附：也称占位性保护。 竞争营养物质：大量定位于阴道中的乳杆菌处于竞争优势状态，利用阴道上皮细胞中的糖原，减少其他细菌的碳源供应，通过竞争营养物质而干扰一些厌氧菌如白色假丝酵母菌（白念）的生长。,维持酸性环境,形成保护性菌膜,杀灭致病菌,乳酸杆菌,正常阴道菌群作用,阴道微生态平 衡的核心：,维持乳酸菌特别是产H2O2乳酸菌在阴道菌群中 的优势地位！,在阴道粘膜表面形成一层保护性菌膜， 防止入侵微生物在阴道粘膜上定植,乳酸菌产生的乳酸使阴道 分泌物维持酸性环境；,乳酸菌产生的H2O2可 杀灭入侵的致病菌。,阴道微生态概念,乳杆
4、菌 数量减少，生 化指标改变，阴道微生态破坏,阴道菌 群失调,各类 阴道炎,加重 阴道菌 群失调,各种 诱因,各类阴道炎的共性 -源于或伴有微生态破坏！,为什么要关注阴道微生态,菌群演变造成菌群结构改变，特点：,1、厌氧菌需氧菌、等条件致病菌大量增加,2、乳酸菌特别是产过氧化氢乳酸菌减少或消失,所有的阴道感染都源于或伴有阴道微生态改变,通过形态学、生物化学、免疫学和分子生物学 等方法所获得的阴道菌群数量和功能方面的信息分析阴道菌群结构的演替,条件致病 微生物菌 群数量与 功能变化,外来致病 微生物菌 群数量与 功能变化,机体反 应水平,如何评价阴道微生态？-阴道微生态评价的内涵,为什么要关注阴
5、道微生态,形态学生物标志物菌群数量与功能的变化,形态学评价-菌群数量的变化,：,形态学的方法,系统的方法,-阴道微生态评价内容,阴道微生态评价的内容,标本中细菌分布、排列的密集程度， 即每克或每毫升标本中的菌落数。分级标准 (放大倍10100观察每视野平均细菌数) I级 （记为“+”） 1个9个 II级 （记为“+”） 10个99个 III级 （记为“+”） 100个以上 IV级 （记为“+ +”） 细菌聚集成团,(涂片中所见细菌种类) I级 （记为“+”） 能辨别13种细菌； II级 （记为“+”） 能辨别46种细菌； III级 （记为“+”） 能辨别710种细菌； IV级 （记为“+“）
6、能辨别11种以上细菌。,(局部有无炎症 -菌群的致病性)有无白细胞、脓细胞渗出，有无吞噬现象等。,？,菌群的密集度,机体炎性反应,菌群的多样性,优势菌,阴道微生态形态学评价,存在的问题形态学评价结果的可靠性与实验室人员的技能和责任有关不能了解阴道菌群中正常优势菌和有害菌的功能,阴道微生态评价的内容,A、正常优势菌功能生物学标志B、致病微生物与条件致病微生物增殖的生物学标志C、机体反应性的生物学标志,了解菌群数量的变化,形态学评价,生物标志物,了解菌群 数量与功 能的变化,阴道微生态 系统评价,阴道微生态评价的内容,唾液酸苷酶,BV ,门冬酰胺蛋白酶,霉菌性阴道炎,胱胺酰蛋白酶,滴虫性阴道炎,乳
7、酸脱氢酶,急性化脓性阴道炎,透明质酸酶,BV、淋菌性阴道炎,白细胞酯酶,宫颈炎及各种阴道感染,短链脂肪酸（如乙酸、琥珀酸）增加 单胺和多胺增加（胺试验阳性） 菌胞壁糖类（如阿拉伯醇糖）增加,阴道微生态评价的方法,生物化学方法,微生物学方法,分子生物学方法,免疫学方法,1 优势菌(乳酸菌)功能的生化标志物,2 致病与条件致病微生物 增殖的生化标志物,3 机体反应性的生化标志物,乳酸菌代谢包括：过氧化氢、乳 酸乳酸菌素,微生物 代谢产物,细菌、衣原体等病原体大量增殖白细胞 吞噬病原体过多病原体释放的水解酶和 毒素分解白细胞壁白细胞酯酶释放到胞 外分泌物中白细胞酯酶活性增高。,过氧化氢浓度,SNA活
8、性,LE活性,生态优势菌指标,致病菌指标,宿主反应指标,卫生部十年百项计划推广项目 江西省星火计划项目 浙江省医药卫生科技重点推广项目,了解阴道菌群结构 和功能的变化，评价阴道的微生态状况,阴道微生态评价适宜技术,阴道微生态评价适宜技术- 细菌性阴道病联合测定技术介绍,标本采集要规范,各种病原体的性质和检测要求的不同，决定了标本的种类、取材部位、和保存条件标本运输方式等都有不同，采集标本上如有错误或疏忽，都会影响检验结果。,标本采集的规范,一般阴道感染诊断的取材，须取阴道后穹隆部位的分泌物。,取材前，要用一 支棉签揩去取材部位堆积的脓液， 用另一支棉签取 材，为提高阳性 率，还可采用重 复两次
9、取材或两 个部位的标本混合后检验的方法。,要尽量使用大一些的棉签取样，要将棉签在取材部位旋转并停留20秒,要使用试剂盒配套的保存液保存标本。标本在2-8保存不宜超过2天。,取材之前24小时 内，应无性交、 无盆浴或阴道冲 洗；在48小时内 未使用阴道润滑 剂或阴道“兴奋剂” 等化学物质,一般要求,取材部位要准确,取材方法要得当,标本量要充足,标本要正确保存 及时检验,正确取材要把握一下几点,标本采集的规范,检验原理,H2O2阴道乳酸杆菌标志物 唾液酸苷酶NAase加德纳菌、游动弯曲杆菌等BV致病菌的标志物。 白细胞酯酶炎性细胞的标志物。,H2O2（反应装置上部的反应孔）,阴道液中过氧化氢经过过
10、氧化物酶作用，释放出新生态氧，后者在4-氨基安替吡啉存在下，使3,5-二氯-2-羟基苯磺酸氧化成红色或紫色，在反应系统中加入3,5-二氯-2-羟基苯磺酸的拮抗物，当标本中H2O2浓度2mol/L，反应结果呈红色或紫色，呈色深度与H2O2 浓度成正比，标本中H2O2浓度 2mol/L，反应结果呈蓝色。 结果判读：阴性：显红色、紫色或蓝紫色阳性：蓝色 参考范围： 2mol/L为阴性,唾液酸苷酶活性测定 （反应装置中部的反应孔）,唾液酸苷酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐，释放出溴吲哚基遇重氮盐起反应呈红色或紫色，呈色深度与唾液酸苷酶活性呈正比。 结果判读： 阴性：不显色或黄色 阳性：红色、紫
11、色或蓝色，显蓝色表示唾液酸 苷酶活性浓度很高。 参考范围： 7U/ml为阴性,白细胞酯酶（反应装置下部的反应孔）,白细胞酯酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐，释放出溴吲哚基，后者在氧的条件下呈蓝色或绿色，呈色深度与白细胞酯酶活性成正比。 结果判读：参照比色板比色判读结果 阴性：“-”或“” 阳性：“+”、“+”、“+” 参考范围：白细胞酯酶7U/ml为阴性,产过氧化氢乳酸菌占优势地位,粘膜修复炎症消失,无引发BV的细菌繁殖,正 常,正 常,阴 性,异 常,增 高,阳 性,过氧化氢浓度,LE活性,SNa活性,乳酸菌减少或消失,各种阴道感染,致病菌、条件致 病菌增加,阴道微生态评价适宜技术,纠正
12、了以白细胞 升高才为“炎症”的 生殖道感染的概念,阴道感染诊断 治疗思路的新 突破,临床用途,指导妇产科临床医师从微生态角度重 新审视妇科感染性疾病； 关注感染及治疗后的阴道微生态状况， 树立“将阴道微生态恢复正常作为阴道 炎治疗的最终目标”的理念。,A、弥补现有白带常规检查只做形态学检查、不做生化检查，不能准确判断感染的程度及阴道微生态、不能评价预后等不足； B、 阴道微生态评价 C、从微生态角度评价阴道炎是否治愈； D、阴道生态制剂的用药指标； E、了解产后阴道生态，确定是否恢复性生活； F、BV诊断与疗效评价，需氧菌阴道炎、衣原体感染筛查。,阴道微生态评价意义,机体反应的生化标志物白细胞对细菌的吞噬过程,阴道微生态评价的内容,白细胞酯酶与被破坏的白细胞数量成正比 而白细胞数量与采样、涂片、月经周期有关,检测结果参考,阴道分泌物检验结果,线索细胞（clue cell）,在脱落的阴道鳞状上皮细胞上粘附有大量的加德纳尔菌,上皮细胞互相粘连成团,细胞边缘不齐似锯齿壮,表面粗糙,有许多大小不等的颗粒或斑点,似撒有一层胡椒粉。核结构模糊不清或碎解,有时细胞呈溶解样。,
