1、第三节 食品中有机酸的分离与测定 有时要求了解食品中特定有机酸的含量或要了解全部有机酸的组成 对于有机酸的分离与定量具有现实意义 一、概述 气相色谱法 (GC) 离子交换色谱法 (IC) 高效液相色谱法 (HPLC) 毛细管电泳法 (CE) 二、有机酸的分离与测定方法简介三、气相色谱法n 一、原理 :在硫酸的催化下，使有机酸成为丁酸衍生物，用气相色谱法定量。n 二、适用范围 :n 本法适用于水果，蔬菜、腌制的农产品，清凉饮料、酒精饮料、酱油、蛋黄酱、咖啡等，可分别定量的有机酸有甲酸、乙酸、内酸、异丁酸、正丁酸、乳酸、异戊酸、正戊酸、异己酸、正己酸、乙酰丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、反丁烯二酸、苹
2、果酸、酒石酸、反丙烯酸以及柠檬酸等。分析时需要的酸的最小含量，因酸的种类不同而异 :甲酸、乙酸等低相对分了质量酸为 1mg，苹果酸、柠檬酸等约 10mg，酒石酸若少于 10mg便不能获得高精度分析结果。n 三、试剂n 离了交换树脂 :使用阳离了交换树脂AmberLite(一种人工合成的酚甲醛离子交换树脂 )CG120、阴离了交换树脂AmberLite CG4B ; AmberLite IRA410。n 四、仪器n 气相色谱仪 :装有氢火焰离了检测器，程序升温装置。n 色谱柱 :填充 10%SiLicone Dc560 （ 60-80日）的 3mm X 2m不锈钢柱或玻璃柱。n 五、测定n （
3、1）试样制备 :将试样在 600C热水中均质，离心分离得有机酸提取液。取一定量 (为了以 0.1 mol/LNaOH液中和，约需 l0mol)通过离子交换树脂柱（图 11-2），使有机酸被阴离子交换树脂吸附。n 取下阳离了变换树脂柱，将 50mL 、 2mo1/L氨水通过阴离了交换树脂柱，使酸转变为铵盐洗脱。洗脱液用旋转式蒸发器浓缩，馏出过剩的氨后，再通过阳离了交换树指柱，使有机酸成为离态。n 用酸酞作指示剂，用 0.1 mol/LNaOH溶液滴定，求总酸量。同时使有机酸成为钠盐。将相当于滴定值约 10毫升的试样浓缩，在具塞试管内干涸。n 1（ 2）酯化：在用上述方法制备的有机酸中，加 2mL
4、丁醇、 2g无水硫酸钠， 0.2mL浓硫酸，连接冷凝竹，在电热板上平衡沸腾约30min(加热不断搅伴 )，使有机酸成了酯。n （ 3）酯的提取 :酯化终了，加水和己烷5mL。使醋转溶于己烷中，每次用约 5mL己烷提取 3次，用安全移液竹移入 20mL容量瓶中 【 容量瓶中事先己袋有 0.5%十九烷(内标 )的己烷溶液 1mL】 用己烷定容。再中入 0.5g无水硫酸钠，去除混入的微量硫酸。取 5uL进行气相色谱分析。（ 4）分析 :柱子在 60 下保持 6min后，以每分钟升温 5 速度升至 250 ,氮气 、氢气、n 空气的流量分别是 60、 50,、 900mL/min气化室和检测器的温度为
5、 260 。n 将己知浓度的标准有机酸用上述方法制成丁醋后，用气相色谱仪分析，制作工作曲线，样品与工作曲线相比较，计算出样品含量。 n 六、说明 :n 对于含盐盐食品如酱油等，用离子交换树脂进行前处理很困难，可用乙醚提取，操作如下 :n 取尤水硫酸钠和硅藻土各 20g置于烧杯中，加乙醚 200mL，边用大型搅拌器搅拌，边滴加，n 用盐酸调整 pH为 1-2的酱油 10mL。搅拌提取10min后收集乙醚，再用乙醚 (150mLX3次 )提取，将收集的乙醚合并于分液漏斗中。加50mL/20mo1/L氨水充分混合，使有机酸转n 溶于水中，蒸馏出氨，直至氨的气味基本消失。用 AmberLite CG 120处理成为游离酸，用n 0.1 mol/LNaOH溶液中和。所得到的酱油有机酸的钠盐蒸发干涸后，由于硫酸一丁醇作用生n 成了丁脂，供气相色谱分析用。 四、高效液相色谱法n 一、原理n 样品经过高速离心及适当超滤等处理后，直接注入反相化学键合柱 (C18填料 )的液相n 色谱体系，以磷酸二氢铵为流动相，有机酸在两种中进行了分配分离，于紫外检测器 200 nmn 波长下进行液相色谱定量分析。
