1、甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)测定的临床意义上海海员医院中心实验室 张抗 万雄萍早在 1966 年，Hopsu-Havu 和 Glenner 等在鼠的肝、肾组织中发现了一种新的二肽氨基肽酶。这种酶能水解甘氨酰- 脯氨酰-B-萘胺，释放二肽甘氨酰脯氨酸，而被称为甘氨酰脯氨酸 -B-萘胺酸 1 。由于甘氨酰脯氨酰-B-萘胺有致癌作用，Nagatsu 等合成了新底物甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺 2 ，并为大家广泛接受，这种酶也一度被称为甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺酶，现已通称为甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(Glycyl proline dipeptidyl aminopeptidase,GPDA)。GPDA
2、分布于肝、肾、结缔组织、唾液腺和血清、唾液等体液中，但其生理功能尚不清楚。由于 GPDA能特异地水解释放肽链 N-末端的甘氨酰 -脯氨酸(Gly-Pro)，而胶原分子中富含有这种 Gly-Pro 结构，提 GPDA的生理作用可能与胶原肽降解有关。七十年代，血清 GPDA 测定被逐渐引入到临床应用。一、血清 GPDA 对肝癌鉴别诊断的价值在若干学者发现肝胆疾病病人血清 GPDA 升高之后，Kojima 等首先报道了原发性肝癌(PHC)病人血清 GPDA活性(198110.4U/L,n=53)不仅显著高于健康对照组 (77.517.1U/L,n=100)，而且显著高于慢性肝炎，肝硬变和其他胆道疾病
3、(如胆石症、阻赛性黄疸等) 病例组 3 。部分肝癌病人的血清GPDA 超过 200U/L，而 20 例超过 200U/L 的病例中，除一例总胆管结石外，其余都是肝癌。 综合国内外文献报道，原发性肝癌病人血清 GPDA 约为健康人的 1.52.5 倍 37 ；阳性率在 57100%不等。原发性肝癌病人血清 GPDA 水平与转移性肝癌病人无显著差异 3 。但 Hutchinson 等报道，转移性肝癌病人血清 GPDA 高达健康对照的 3.3 倍，阳性 87.5%(14/16)；其中一例 67 岁老年女病人在血清 GPDA 升高一周后，血清转氨酶活性才出现高，提示血清 GPDA 对早期发现肝细胞损伤
4、，可能比转氨酶更加敏感。原发性肝癌病人血清 GPDA 活性与 AFP 水平不相关 3，9 。对 178 例原发性肝癌病人的检查发现，AFP 阳性 131 例( 阳性率 73.6%)，AFP 阴性 47 例(阴性率 26.4%)。而 AFP 阳性和阴性两组病例的血清 GPDA 活性分别为 82.603.33U/L 和 83.635.63U/L，升高的阳性率分别为 63.4%和 66.0%；把 AFP 阳性和阴性病例合并计算，血清 GPDA 活性为 82.872.86U/L，升高的阳性率为 64.0%；这些差异都不具有统计学意义。三例 AFP阴性的亚临床期原发性肝癌病人，有 2 例 GPDA 升高
5、。提示血清 GPDA 与 AFP 有良好的互补作用。亚临床期原发性肝癌病人的血清 GPDA 活性虽然显著高于健康人(P 0.01) ，但其活性水平和阳性率均显著低于临床期病人，反映了血清 GPDA 水平与原发性肝癌的病情有关 5 。用 3 甲基-DAB 诱导肝癌的大鼠，血清中 GPDA 活性大约也为健康鼠的 2 倍，而肝癌组织的匀浆和微粒体部分的 GPDA 比活性都显著低于健康鼠者；而用肝癌组织制取的细胞液部分的 GPDA 比活性，显著高于用正确肝组织制取者。说明肝癌时血清 GPDA 的升高，是由于微粒体内酶向外释放增多引起，与血清 r-GT 升高是由于合成增多而引起的机制不同 4 。急性肝炎
6、，慢活肝、肝硬变、阻塞性黄疸等，血清 GPDA 可有不同程度升高，但升高幅度不及肝癌病人。但是，重症肝炎 7 、酒精性肝炎 8 时，血清 GPDA 升高幅度十分显著，可超过肝癌病人。与上述肝胆疾病时血清 GPDA 升高不同，十九例肝血管瘤病人，无一例血清 GPDA 超过正常值上限 5 。说明对影象学诊断“占位性病变”者，血清 GPDA 测定具有定性鉴别作用。如果血清 GPDA 升高可以排除血管瘤的诊断。二、血清 GPDA 在胃癌诊断中的价值几乎在发现肝胆疾病病人血清 GPDA 升高的同时，发现胃癌病人血清 GPDA 明显下降 10，11 。尽管下降机理迄今不明，但这种现象已为国内外诸多报道证实
7、。饶有趣味的是，用六种氨基酸合成六种 X-脯胺酰对硝基苯胺(X=不同氨基酸)作底物，测定正常人和胃癌病人的血清 GPDA，尽管不同底物测得的 GPDA 活性水平有十分明显的差别，但每种底物各自测得的胃癌病人血清 GPDA 活性均值，都在正常人的一半左右 11 。近年若干报道采用较高浓度的底物，提高了 GPDA 活性的绝对值，但没有改变正常人和胃癌病人血清 GPDA 活性均值的倍比关系。 其它良性胃肠道病变，血清 GPDA 也可略有下降 12 。下降幅度较大的为胃溃疡，依次为慢性胃炎和十二指肠球部溃疡。把低于正常对照组血清 GPDA 活性均值减去三个标准差，作为判别胃部良、恶性病变的临界值，低于
8、此值为阳性，则胃溃疡、慢性胃炎和十二指肠球部溃疡的阳性率依次为 10.4%、6.2% 和 0；远低于胃癌的阳性率(72.5%) 。良性病变时血清 GPDA 活性下降，可否作为癌变的早期信号，尚有待进一步研究。但是对血清 GPDA 显著下降者，应该警惕胃癌的可能。肺癌、贲门癌和食管癌病人血清 GPDA 活性也有不同程度的下降，下降幅度依上述顺序依次由大到小。如果胃癌和这些器官癌症病人出现肝转移时，GPDA 活性可明显升高。胃癌切除后，血清 GPDA 也有回升趋势。三、其他疾病时的血清 GPDA 水平对类风湿关节炎(RA)病人血清 GPDA 活性的观察发现，病程在 15 个月以上者，血清 GPDA
9、 活性显著低于健康对照(P0.05)，酶活性水平与病程长呈负相关 (=-0.53,P0.05) ，两者之间的关系为 Y(酶，U/L)=56.74-0.20X(病程，月) 。可以推理，诸如 RA 这种进行性疾病，病程愈长，接受有效治疗愈多，病人的病情也愈重，疾病累及范围愈大，血清 GPDA 也愈低。系统性红斑性狼疮(SLE)病人血清 GPDA 也显著低于健康对照(P 0.01) ，但酶活性与临床表现不相关 13 。RA 和 SLE 病人血清 GPDA 活性下降，可能是由于长期炎症，使结缔组织明显萎缩，导致全身总胶原减少引起。急性淋巴细胞性白血病、淋巴肉瘤和何杰全氏病病人，血清 GPDA 显著低于
10、健康对照，而慢性粒细胞性白血病病人与健康人无显著差 14 。四、尿液中的 GPDA用荧光法测定人尿 GPDA 活性，发现同一健康人天内天间 GPDA 活性水平很小变异，以每克肌酐相应的酶活性报告时尤为如此 15 。肾小球肾炎病人的尿 GPDA(10.569.1U/L 或 17.4419.8U/克肌酐)显著高于健康对照(2.16 1.2U/L 或 4.301.7U/克肌酐) 16 。肌酐清除值 (Ccr)较高者，尿 GPDA 较低，反之则较高。Ccr 在130ml/min 之间的病人，Ccr 与尿 GPDA 活性略呈负相关 (r=-0.567)。将收集保存在 4冰箱的正常人和肾小球肾炎病人的晨尿
11、，超滤浓缩后，通过 Sephadex G200 柱层析，正常人尿 GPDA 主峰(峰)在靠近空容量处，分子量 400000，其后紧随一个很小的峰(峰) ，分子量 230000；而肾病病人尿 GPDA 的峰、峰位置虽与正常人相当，但峰为小峰，峰为大峰。而用正常人和病人的新鲜尿液，两者的层析谱一致。正常人和病人尿 GPDA 的峰 ，对底物的 Km 值十分接近。肾病病人尿GPDA 值峰 的 Km 值略低于峰，与从人肾提纯的 GPDA 的 Km 值接近。峰GPDA 的分子量远大于人血清 GPDA 分子量 (220000)。以上结果提示，峰、峰的酶在分子特性、来源和进入尿液的机制存在着差异16 。把从人
12、颌下腺提取的 GPDA 和肾病病人尿，分别加入到正常人尿中，GPDA 的回收率为 983.6%和952.2%，提示尿中不存在该酶的激活剂、抑制剂等干扰物质，尿液毋须处理，可直接用于 GPDA 测定。五、GPDA 水平的生理变异用脐带血为样品，测定血清 GPDA 活性，六十五例新生儿的血清 GPDA 显著低于健康成人(2376 岁)14 ，说明从婴儿出生到 20 岁的迅速发育价段，血清 GPDA 活性逐渐升高。这可能与胶原量的增加有关，也提示 GPDA 在胶原肽降解中的作用。四十岁以下的青年男子的血清 GPDA，略高于青年女子(P0.001) ；四十岁以上女子的血清 GPDA 略高于40 岁以下
13、的青年女子(P0.05) ，但男子不然 11 。以每克肌酐表示尿 GPDA 活性，四十岁以上的女性组和男女混合计算组均显著高于 40 岁以下的青年男、女组和男女混合计算组(P0.005)；如果不以年龄划分，则女性显著高于男性(P0.005) ；一百六十二例健康人的尿 GPDA 活性呈明显的正态分布 15 。综上所述，血、尿 GPDA 测定有着比较广泛的临床意义和应用前景。尤其是对原发性肝癌的诊断，对影象学诊断为“占位性病变”的定性鉴别，以及对胃癌的诊断和监测胃癌等其他器官的肝转移等，都是一项值得采用的试验。由于原发性肝癌病人血清 GPDA 与 AFP 水平不相关，两者具有良好的互补作用。参考文
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