1、生物化学实验常用缓冲液的配制方法上一篇 / 下一篇 2009-03-19 13:49:27 / 个人分类：试剂类 查看( 332 ) / 评论( 3 ) / 评分( 0 / 0 ) 1、0.2mol/L 磷酸缓冲液 *组份浓度 0.2mol/L （pH 6.0） *配制量 1L*配置方法 1.称取磷酸氢二钠 .12 水 8.82 g。2.称取磷酸二氢钠 .2 水 27.34g。3.用去离子水溶解并定容至 1L。室温保存。注意：此为母液，使用时稀释 40 倍使用。2、洗脱液 *组份浓度 0.15mol/L （含 0.15mol/L 氯化钠的 0.005mol/L pH 6.0的磷酸缓冲液）*配制
2、量 10L*配置方法 1.称取氯化钠 87.66g。2.用 0.2mol/L pH6.0 的 磷酸缓冲液 250mL 溶解。3.用去离子水稀释至 10L。室温保存。3、0.3mol/L 磷酸缓冲液 *组份浓度 0.3mol/L （pH7.8 ） *配制量 0.5L*配置方法 1.准确称取磷酸氢二钠 .12 水 49.150g。2.磷酸二氢钠.2 水 2.000g。3.用去离子水溶解并定容至 0.5L。室温保存。注意：此为母液，使用时稀释 10 倍使用。4、0.2mol/L 乙酸缓冲液 *组份浓度 0.2mol/L （pH4.6）*配制量 2L*配置方法 1.准确称取乙酸钠 .3 水 54.44
3、g。2.加入 23mL 冰乙酸，溶解。3.用去离子水溶解并定容至 2L。4保存。5、0.2mol/L 磷酸-柠檬酸缓冲液（pH 2.6、4.6 、6.6）*组份浓度 0.2mol/L*配制量 各 1L*配置方法 1.母液 A（0.2mol/L 的 Na2HPO4 溶液）：称取 Na2HPO4.12 水 143.256g，用去离子水定容至 2L。2.母液 B（0.1mol/L 的柠檬酸溶液）：称取柠檬酸 .1 水 42.028g 用去离子水溶解定容至 2L。3. pH2.6、4.6、6.6 的三种缓冲液如下表配制：pH 值 A（mL） B（mL）2.6 109.0 891.04.6 467.5
4、532.56.6 727.5 272.54.按上表混匀后， 4保存。6、20SSC 缓冲液 *配制量 1L（pH7.0 ）*配置方法 1.准确称取 175.2g 氯化钠。2.准确称取 88.2g 柠檬酸钠 .2 水。3.溶解于 800mL 去离子水中。4.加入数滴 10mol/L 氢氧化钠溶液调节 pH 值至 7.0。5.加去离子水定容至 1L。注意：按实验需要可分装后高压灭菌。10SSC、5SSC、1SSC 可由 20SSC 做相应稀释得到。7、0.15mol/L 氯化钠-乙二胺四乙酸二钠缓冲液（pH8.0 ） *组份浓度 0.15mol/L*配制量 1L*配置方法 1.准确称取氯化钠 8.
5、77g。2.称取乙二胺四乙酸二钠 37.2g。3.溶于 800mL 去离子水中。4.用固体的氢氧化钠调 pH 值为 8.0。5.加去离子水定容至 1L。8、1/15mol/L 的磷酸盐缓冲液（ pH7.6） *组份浓度 0.15mol/L*配制量 1L*配置方法 1.溶液甲（1/15mol/L 的 KH2PO4 溶液）：称取 KH2PO49.078g，用去离子水溶解定容至 1L。2.溶液乙 (1/15mol/L 的 Na2HPO4 溶液 ):称取 Na2HPO4. 2 水 11.876g（或磷酸氢二钠 .12 水 23.894g）用去离子水溶解定容至 1L。3.pH7.6 磷酸盐缓冲液：将 和
6、按 1.4：8.6 比例混合即可。9、5TrisGlycineBuffer （SDSPAGE 电泳缓冲液）*组份浓度 0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5（w/v）SDS*配制量 1L*配置方法 1.称取下列试剂，置于 1L 烧杯中。Tris 15.1gGlycine 94gSDS 5.0g2.加入约 800mL 的去离子水，搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至 1L 后，室温保存。10、5SDSPAGE Loading Buffer*组份浓度 250mM TrisHCl（pH6.8 ）10（W/V） SDS0.5（W/V） BPB50（V/V） 甘油5（W/V ） 巯基
7、乙醇*配制量 5mL*配置方法 1.量取下列试剂，置于 10mL 塑料离心管中。1M TrisHCl1.25mLSDS 0.5gBPB 25mg甘油 2.5mL2.加入去离子水溶解后定容至 5mL。3.小份（ 500l/份）分装后，于室温保存。4.使用前将 25l的 2-ME 加到每小份中。5.加入 2M-E 的 LoadingBuffer 可在室温下保存一个月左右1、1M TrisHCl * 组份浓度 1M TrisHCl （pH7.4，7.6， 8.0） * 配制量 1L* 配置方法 1.称量 121.1gTris 置于 1L 烧杯中。2.加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。3.
8、按下表量加入浓盐酸调节所需要的 pH 值。pH 值 浓 HCl7.4 约 70mL7.6 约 60mL8.0 约 42mL4.将溶解定容至 1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值，因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差很大，温度每升高 1，溶液的 pH 值大约降低 0.03 个单位。2、1.5M TrisHCl *组份浓度 1.5M TrisHCl （pH8.8） *配制量 1L*配置方法 1.称取 181.7gTris 置于 1L 烧杯中。2.加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。3.用浓盐酸调 pH 值至 8.8。4.将溶液定容至 1
9、L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值，因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差异很大， 温度每升高 1，溶液的 pH 值大约降低 0.03 个单位。3、10TE Buffer *组份浓度 100 mM TrisHCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）*配制量 1L*配置方法 1.量取下列溶液，置于 1L 烧杯中。1M TrisHClBuffer（pH7.4，7.6，8.0） 100mL500 mM EDTA（pH8.0） 20mL2.向烧杯中加入约 800mL 的去离子水，均匀混合。3.将溶液定至 1L 后，高温高压灭菌。4.
10、室温保存。4、3 M 醋酸钠 *组份浓度 3M 醋酸钠 （pH5.2） *配制量 100mL*配置方法 1.称取 40.8gNaOAc.3H2O 置于 100200mL 烧杯中，加入约 40mL 的去离子水 搅拌溶解。2.加入冰乙酸调节 pH 值至 5.2。3.加入去离子水将溶液定容至 100mL。4.高温高压灭菌后，室温保存。5、PBSBuffer*组份浓度 137mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4*配制量 1L*配置方法 1.称量下列试剂，置于 1L 烧杯中。NaCl 8 gKCl 0.2gNa2HPO4 1.42 gKH2PO4 0.2
11、7g2.向烧杯中加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加 HCl 将 pH 值调节至 7.4，然后加入去离子水将溶液定容至 1L。4.高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述 PBS Buffer 中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充 1mM CaCl2 和 0.5mM MgCl2。6、10 M 醋酸铵 *组份浓度 10M 醋酸铵 *配制量 100mL*配置方法 1.称量 77.1g 醋酸铵置于 100200 mL 烧杯中，加入约 30mL的去离子水搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至 100mL。3.使用 0.22m 滤膜过滤除菌。4.密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，
12、所以不能高温高压灭菌。7、TrisHCl 平衡苯酚 *配置方法1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在 160对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致 RNA 和 DNA 的交联等。因此，苯酚的质量对 DNA、RNA 的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙
13、醇。3.苯酚平衡：因为在酸性 pH 条件下 DNA 分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其 pH 值达到 7.8 以上，苯酚平衡操作方法如下： 液化苯酚应贮存于 20，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在 68水浴中使苯酚充分溶解。 加入羟基喹啉（ 8Quinolinol）至终浓度 0.1。该化合物是一种还原剂、 RNA 酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。 加入等体积的 1M TrisHCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌 15 分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 重复操作步骤 。 加入等体
14、积的 0.1M TrisHCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌 15 分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 重复操作步骤 ，稍微残留部分上层水相。 使用 pH 试纸确认有机相的 pH 值大于 7.8。 将苯酚置于棕色玻璃瓶中 4避光保存。8、苯酚 /氯仿/ 异戊醇 *配置方法1.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯 /酚/氯仿/ 异戊醇（ 25：24：1 ）。氯仿可使蛋白（ 25 ：24 ：1） 质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2.配置方法：将 TrisHCl 平衡苯酚与等体积的氯仿 /异戊醇（ 24：1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中 4保
15、存。9、10（ W/V）SDS *组份浓度 10（W/V）SDS *配制量 100mL*配置方法 1.称量 10g 高纯度的 SDS 置于 100200mL 烧杯中，加入约 80mL 的去离子水， 68加热溶解。2.滴加数滴浓盐酸调节 pH 值至 7.2。3.将溶液定容至 100mL 后，室温保存。10、2 N NaOH *组份浓度 2N NaOH *配制量 100mL*配置方法 1.量取 80mL 去离子水置于 100200mL 塑料烧杯中（ NaOH 溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。2.称取 8g NaOH 小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3.待 NaOH 完全溶解后，用去
16、离子水将溶液体积定容至 100mL。4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。11、2.5N HCl *组份浓度 2.5 N HCl *配制量 100mL*配置方法 1.在 78.4mL 的去离子水中加入 21.6mL 的浓盐酸（ 11.6N），均匀混合。2.室温保存。12、5 M NaCl *组份浓度 5M NaCl *配制量 1L*配置方法 1.称取 292.2gNaCl 置于 1L 烧杯中， 加入约 800mL 的去离子水后搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至 1L 后，适量分成小份。3.高温高压灭菌后， 4保存。13、20 （ W/V）Glucose *组份浓度 20（W/V）Gluco
17、se * 配制量 100mL*配置方法 1.称取 20gGlucose 置于 100200mL 烧杯中，加入约 80mL 的去离子水后，搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至 100mL。3.高温高压灭菌后， 4保存。14、Solution I *组份浓度 25mM TrisHCl（pH8.0），10mM EDTA，50mM Glucose （质粒提取用） *配制量 1L*配置方法 1.量取下列溶液，置于 1L 烧杯中。1M TrisHCl（pH8.0） 25mL0.5M EDTA（pH8.0） 20mL20Glucose （1.11M ） 45mLdH2O 910mL2.高温高压灭菌后， 4保
18、存。3.使用前每 50mL 的 Soliution I 中加入 2mL 的 RNase A （20mg/mL）。15、Solution II *组份浓度 250mM NaOH，1 （W/V）SDS （质粒提取用） *配制量 500mL*配置方法 1.量取下列溶液置于 500mL 烧杯中。10SDS 50mL2N NaOH 50mL2.加灭菌水定容至 500mL，充分混匀。3.室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。注意： SDS 易产生气泡，不要剧烈搅拌。16、Solution III *组份浓度 3M KOAc，5M CH3COOH （质粒提取用） *配制量 500mL*配置方法 1.量
19、取下列溶液置于 500mL 烧杯中。KOAc 147gCH3COOH 57.5mL2.加入 300mL 去离子水后搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至 500mL。4.高温高压灭菌后， 4保存。17、0.5M EDTA *组份浓度 0.5M EDTA (pH8.0) *配制量 1L*配置方法 1.称取 186.1g Na2EDTA.2H2O，置于 1L 烧杯中。2.加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌。3.用 NaOH 调节 pH 值值 8.0（约 20gNaOH）。注意：pH 值至 8.0 时， EDTA 才能完全溶解。4.加去离子水将溶液定容至 1L。5.适量分成小份后，高温高压灭菌。6.室温保存。18、1 M DTT *组份浓度 1M DTT *配制量 20mL*配置方法 1.称取 3.09gDTT，加入到 50mL 塑料离心管内。2.加 20mL 的 0.01 M 的 NaOAc（pH5.2），溶解后使用 0.22m 滤器过滤除菌。3.适量分成小份后， 20保存。19、10mM ATP *组份浓度 10mM ATP *配制量 20mL*配置方法 1.称取 121mg Na2ATP.3H2O，加入到 50mL 塑料离心管内。2.加 20mL 的 25mM TrisHCl（pH8.0），搅拌溶解。3.适量分成小份， 20保存。
