生物信息学实验三步骤加答案(仅供参考).doc

1、工具软件：1、VecScreen2、RepeatMasker（http:/www.repeatmasker.org/）3、CpGPlot/CpGReport/Isochore (http:/www.ebi.ac.uk/emboss/cpgplot/)4、Neural Network Promoter Prediction （http:/www.fruitfly.org/）5、Splice Site Prediction (http:/www.fruitfly.org/seq_tools/splice.html)6、ORF finder7、GENSCAN8、NEBcutter V2.09、Gen

2、efisher10、Primer 3.011、REBASE作业：1、使用 VecScreen 工具，分析下列未知序列，输出序列长度、载体序列的区域、可能使用的克隆载体都有哪些。AAGCTATGNACCTGNNTACGNAATTCGNNGCTCGGTGACCCGGGGNTCCTCTAGNGNTGGCCAGNGGACCCCAAGCTTCGGNTGCAGNTACACACACACACACACACACACACNTGGACCAGAAGAACCCCANGCTTCGGATCCCAAGATTTTACTCGTAGGGCTACCCATCACGCACACATATATACCCACACACACACACACACACACAC

3、ACACACACACACATATGTGCCAGAGACCCCAAGCTTCGGATCAAAATCCGTTCAGTGAGTTTTTGCGTGAAAGAGTAACACACACCCACACACACACACACACACACACACACACACACACACACACACACNCACANNCACACACACACACACACANAGACACATGCTAGTGTATGATGGCCAGAGACCCCAAGCTTCGGATCCGGCTCGACACACACACACACACACAACACACACACAATCGTCGACCTGCNNGCATGCAAGCTTGGCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTG

4、GGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCANCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGANGCGGCATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGNATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGNTAAGNAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGNTTAAAGACA

5、AGCTGTGACCGTCTCCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTNCCGNNNTCNCCTGAACGCGCNAGACGAAAGGGCCTNNNGAAACGCCNATTTTATGGGTTAAGG答：在 ncbi 工具中搜索 vecscreen将序列复制粘贴到框中运行-View report-输出序列长度 918、载体序列的区域 456-854、可能使用的克隆载体都有Cloning vector pRKW2 Cloning vector pBR322 Cloning vector pGEM-13Zf(+) M13mp18 phage cloning vector2、使用相应工具

6、，分析下列未知序列的重复序列情况，输出重复序列的区域、包含的所有重复序列的类型、重复序列的总长度及 Masked Sequence。进入 ncbi 主页-选择 blast填入序列-blast- 可看出来这个序列是人类的-搜索 RepeatMasker-进入 RepeatMasker 主页-进入 RepeatMasking-复制序列-DNA source 选择 human-运行- 点连接-GTTTGGGGCCAGAGTGGGCGAGGCGCGGAGGTCTGGCCTATAAAGTAGTCGCGGAGACGGGGTGCTGGTTTGCGTCGTAGTCTCCTGCAGCGTCTGGGGTTTCCG

7、TTGCAGTCCTCGGAACCAGGACCTCGGCGTGGCCTAGCGAGTTATGGCGACGAAGGCCGTGTGCGTGCTGAAGGGCGACGGCCCAGTGCAGGGCATCATCAATTTCGAGCAGAAGGAAAGTAATGGACCAGTGAAGGTGTGGGGAAGCATTAAAGGACTGACTGAAGGCCTGCATGGATTCCATGTTCATGAGTTTGGAGATAATACGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGGCAGGCTGTACCAGTGCAGGTCCT

8、CACTTTAATCCTCTATCCAGAAAACACGGTGGGCCAAAGGATGAAGAGAGGCATGTTGGAGACTTGGGCAATGTGACTGCTGACAAAGATGGTGTGGCCGATGTGTCTATTGAAGATTCTGTGATCTCACTCTCAGGAGACCATTGCATCATTGGCCGCACACTGGTGGTCCATGAAAAAGCAGATGACTTGGGCAAAGGTGGAAATGAAGAAAGTACAAAGACAGGAAACGCTGGAAGTCGTTTGGCTTGTGGTGTAATTGGGATCGCCCAATAAACATTCCCTTGGATGTAGTCTGAG

9、GCCCCTTAACTCATTGTAGGGAAAAGAAAGAGAGATCAGACTGTTACTGTGTCTATGTAGAAAGCTGTTATCCTGCTAGCTGTAGAAATGTATCCTGATAAACATTAAACACTGTAATCTTAAAAGTGTAATTGTGTGACTTTTTCAGAGTTGCTTTAAAGTACCTGTAGTGAGAAACTGATTTATGATCACTTGGAAGATTTGTATAGTTTTATAAAACTCAGTTAAAATGTCTGTTTCAATGACCTGTATTTTGCCAGACTTAAATCACAGATGGGTATTAAACTTGTCAGAATTTCT

10、TTGTCATTCAAGCCTGTGAATAAAAACCCTGTATGGCACTTATTATGAGGCTATTAAAAGAATCCAAATTCAAACTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA3、使用CpGPlot/CpGReport/Isochore工具，分析下列未知序列，输出CpG岛的长度、区域、GC数量、所占的百分比及Obs/Exp值。答：进入 EMBLTOOLsequence analysiscpgreport输入序列run输出 CpG 岛的长度为 385、区域 48-432、GC 数量 297、所占的百分比为 77.14及

11、Obs/Exp 值 1.01gi|31581532|ref|NM_019880.2| Mus musculus mitochondrial carrier homolog 1 (C. elegans) (Mtch1), mRNAGCCCGCCCGCCATGCCCCCTCGCCCCGCGGCGTGAGTGGTGCTGCCAGGACCCTCCCCTTGACGTTCGGGGGCGTGGCCAGCACCACGTGACGGGGAGTGACCTCCACGCCTGGCGCCATGGGGGCTTCGGACCCGGAAGTGGCGCCTTGGGCTCCCGGCGGCGCCGCGGGGATGGCGGGAGCCGG

12、AGCTGGTGCAGGAGCTCGGGGCGGCGCGCCGGCCGGAGTCGAGGCCCGCGCTCGGGACCCACCACCCGCGCACCGCGCGCACCCTCGCCATCCTCGGCCCGCGGCTCAGCCGTCGGCGCGCAGGATGGACGGCGGCCCGGGCGCCCCGGGCTCCGGGGACAACGCCCCGACCACCGAGGCGCTGTTCGTGGCGCTGGGCGCGGGCGTGACGGCTCTCAGTCACCCGCTGCTCTACGTGAAGCTGCTGATCCAGGTGGGTCATGAGCCGATGCCCCCCACCCTTGGGACCAATGTGCTGGG

13、GAGGAAGGTCCTCTACCTGCCGAGCTTCTTCACCTATGCCAAGTACATTGTGCAGGTGGATGGGAAGATAGGGCTCTTCCGGGGCCTGAGCCCCCGCCTTATGTCCAACGCCTTGTCCACTGTGACCCGCGGCAGCATGAAGAAGGTTTTCCCTCCAGATGAGATGGAGCAGGTTTCCAACAAGGACGACATGAAGACCTCACTCAAGAAAGTTGTGAAGGAGACATCGTATGAGATGATGATGCAGTGTGTATCGCGAATGCTGGCCCATCCCTTACACGTGATCTCGATGCGATGCAT

14、GGTGCAGTTTGTGGGACGGGAGGCCAAGTACAGTGGTGTGCTGAGTTCTATTGGGAAGATCTTCAAGGAAGAGGGGCTGCTGGGATTCTTCGTTGGCTTAATCCCTCACCTCCTGGGCGATGTGGTTTTCTTGTGGGGCTGTAACCTGCTGGCCCACTTCATCAATGCCTACTTGGTGGACGACAGCGTGAGTGACACCCCAGGGGGGCTGGGAAACGACCAGAATCCAGGTTCCCAGTTTAGCCAGGCCCTGGCCATCCGGAGCTACACCAAGTTTGTGATGGGGATTGCAGTGAGCAT

15、GCTGACCTACCCCTTCCTGCTCGTTGGAGATCTCATGGCAGTGAACAACTGTGGGCTGCGGGCTGGACTCCCTCCGTATTCCCCTGTGTTCAAGTCCTGGATCCACTGCTGGAAGTACCTGAGTGTGCAGGGCCAGCTCTTCCGCGGCTCCAGCCTGCTTTTCCGCCGGGTGTCATCGGGGTCATGCTTTGCCCTGGAGTAACCTAAGCTGCCCGACCAAACATTTATGGGGTCTTAGCCTACCCCTGGTGAGGACCCATCATCTCAGATGCCCAAGGGTGACTCCAGCCCAGCCTGGCT

16、TCATGTCCATATTTGCCATGTGTCTGTCCAGATGTGGGCTGGTGGAGGTGGGTCACCTGGGACCTGGGGAAGCCTGGGGGAGCAGTGTTGGGGTGGCATCCCCTTCCTGCCTAGAGGTACTGGAGTCCATCTTGTACTCAGGCAGAGGCAGGCTGCAGAGGCAAACGTCACTCAGTGGCAAGGCTTCCCTGCACCTCTAGCCCAGCTCATCCTGCCAGTCAGCCAGAAGCACCCCCGCCCCCCACTTCCTGCTTTGTAAATTGGGCGCCATCACACCTGGGCCATGGGAGGCTGGCGCTA

17、TGTTCCCAACACTAATTTTCTTATACAAGGGTGGTGCCTTCTCCTGAATAGGAAATCATGTTCTCCTCAGACCATCCCCTCATCTGCTTGTCTGTGCTGGTGACGCCAGGTGTGAGGGTTCAGTCACTGTGCTGGGTGCGAATACGCACAGGTTACATAGGCCGACATCTAGTCCTCCCCTCGTGGTAAGATAGACCCATCTCCTCGAATAAATGTATTGGTGGTGATTTGGAAAAAAAAAA4、预测下面序列的启动子，输出可能的启动子序列及相应的位置。Google search Neural Network

18、 Promoter Predictionchoose Neural Network Promoter Prediction选 eukaryote 真核生物input this sequence-submit711-761 TCGCGCCACTATATGATCTGGGCGCCACTCTGGGTGACACAGCAAGACTC1388-1438 AACCTCTGTGTCTAACGGGGGTGTGTGCTCTCCCTCCTCTGGCGACCATG1755-1805 GCTGGTGGCATATATAGGGAGGGCTCGGCCTTGGCTCCACACTGGCTGCCgi|244474|gb|S79457

19、.1| alpha A-crystallin 5 flanking region human, lens, Genomic, 1868 ntGATCCTGTGTCCCCGGACAGTGCTGTAAATGTAGGAGGAAGGTGCTGCTCATGGTGCTGCTCATGATGAGTGCCCCAGTGAGCACGCCTCGAGCCCCCCTTTCATCCCTGATCCATCTGGGATGTGTCAGGTCTGATCCGCATACACTGGGCATCTGACATTTCATGGCCTTCTGACGCATGGGCTGAGATGAATTTGCAAAGCCCGGGAGTGTCCTGGGTGTGTGTTCA

20、CTCCACACGCACGAATCTGTTAGAGGCTGAGTAGGAACTAGGAGGCCAAAGAGAACCAGGCAACTTCCCACAGCCTGGACCGTACACTAGAAAAGCTAGCCTGGAGAGGGGCATGGCCTCTTCCCAGGCTGGCAGGGGGAATGTGGGGAGGACCATGCTCCCCAGGGCCAGTTTACCAAAATATCAAAATACCAAAATATCAAAAGAACTTAAAACTAGGAGTGAGCCAGGTGCAGTCTCACGCCTGTAATCCTACACTTTGAGAGCCAAGGCAGGTGGGTCACCTGAGGTCAAGAGTTT

21、GAGACCAGCCTGGCCAACACGGTGAAACCCTGTCTCTACTAAAAATACAAAAATAATAATAATAATAATAATAATAATAATTAGCCAAGTGTGGTGGCAGGCACCTGCATCTCAGCTACTCAGGAGGCTGAGGTGGGAGAATTGTTTGAACCTGGAGGCAGAGGTTGCAGTGAGCTGAGATCGCGCCACTATATGATCTGGGCGCCACTCTGGGTGACACAGCAAGACTCCATCTCAAAAACAAACAAACAAAACCGGGAGTGCCTGGGACACTTAGTGAGAACTGGACAGGGGCCATGG

22、GTCGAGGAGCAAAATAATCACCAGGACTTGTGGATAACAGGATCATGTGGGTGGTGGGTCCGCATGGGTGACAGGGACGTGGGGACATGTCGCCACCCTGACAGGAGCAGCCCAACTCAACAGCCACGGCAGGTCATGCACGGAGGCTCGAGGCGTTACGTGGGGATGTTACATCAAGGCATTACATCATTACGAGATGTAACGCTCGAGGCGTTACATCGAGGGGACGATGGCATGGGGCTGGGGCGTCCAGGGTGGGCGCAGAGGGAAGCTCAACCACGTGGTGCTCTCATCTGCCCA

23、CAGCCCAGCCCGTCTTCCTGTTGGAGGCATGTGACCCCTGGAGGACAAGCATGTGACCCCTGGAGGACAAGCATGAAACGCCATAGGCTCCCCAAGTGCTGAATTATGGCACCTTGCAGCTTCTTCTCCACGACGTTTTAACAAGCGATGCGTACTTTTGTAAGTGGTGAGTGTAACGGAGGTTCACAGATGCACTCCGCTTTGGAAACCAGTGCACTCTTGCCCAGGCCCGGTGAGACTCTGAGGACGATGTGTCTAACCTCTGTGTCTAACGGGGGTGTGTGCTCTCCCTCCTCTGGC

24、GACCATGAGGAAACCCCCGGCAGGACAAGGTGTGCAGAGAACTAGCATGGTCCCTGGCACGTAGCCCCTGCCCAGTGACTGGCAGATGAGAAGCTCCATTGTCGCCCCAGGGAGTATGGGGCACAGGCGCCTCCTTGGGTTGTCTGCCTCCCGGGAGCCCCAGGGTGCCCAGGCGGGCCTCAGCTGAGTCCAGGCCTCGGGGACAGTCCGTGCACGCTCCTGGGGCTGGGGGCGGGCACTTGTCCCAGCCACGTTTCTGCTGACTGAGCAGCCTTCTTCATGAGCTCACGCCTTTCCAGA

25、GAAATCCCTTAATGCCGCCATTCTGCTGGTGGCATATATAGGGAGGGCTCGGCCTTGGCTCCACACTGGCTGCCAGAGGCCCCGCTGACTCCTGCCAGCCTCCAGGTCCCCGTGGTACCAAAGCTGAACATGGACGTG Start End Score Promoter Sequence711 761 0.96 TCGCGCCACTATATGATCTGGGCGCCACTCTGGGTGACACAGCAAGACTC1388 1438 0.87 AACCTCTGTGTCTAACGGGGGTGTGTGCTCTCCCTCCTCTGGCGACCATG

26、1755 1805 1.00 GCTGGTGGCATATATAGGGAGGGCTCGGCCTTGGCTCCACACTGGCTGCC5、对下面序列进行六框翻译，利用 GENESCAN 综合分析(首先确定给定序列的物种来源)哪个 ORF 是正确的，输出六框翻译（抓图）和 GENESCAN 结果(包括predicted genes/exons 和 predicted peptide sequence(s) 两个部分)先 blast进入 ncbi 打开 ORF finder 粘贴入序列！在 Genetic codes 选择第一个standard!（一定有这个）点 orfFind图 搜索 GENESCA

27、N 进入 粘贴序列后点 run GENESCAN 物种来源为人类 +1 的开放阅读框为正确。CTCGCGCAGGGGGGGTCGCCTGAGATCACAGAGACAATGGTGAAGGCAGTTGCTGTCCTCGCCGGCACTGATGTCAAGGGCACCATCTTCTTTTCACAGGAAGGGGATGGTCCGACCACCGTGACTGGAAGTATCTCTGGCCTCAAGCCAGGCCTCCATGGGTTCCATGTGCACGCGCTTGGCGACACCACCAACGGCTGCATGTCGACTGGGCCACACTTCAATCCTGTTGGCAAGGAGCATGGTGCACCGGA

28、AGATGAGGACCGCCATGCCGGTGATCTTGGGAATGTGACAGCGGGAGAAGATGGTGTTGTTAATGTCAATATTACTGACAGCCAGATACCTCTTGCTGGACCCCACTCGATCATTGGCCGAGCTGTTGTTGTCCATGCTGATCCGGATGACCTTGGCAAAGGTGGACATGAGCTTAGCAAGAGCACCGGAAATGCTGGCGGACGTGTTGCCTGTGGTATCATTGGGCTCCAAGGCTAAAGCGGTTAACCTCCGAGGCAAACACCATAGAAGATCGAAGCGAGCACCTCAGGATGTTGCTG

29、TTCCATTTCCCTGTATTGGCAACACAATTTGAGTACTCCAAATAAGCGCCTGATCCATGATCAGAGAGCACTATCATGCATTTGTATATATGAACAATGTTGCGCACCTGCTTAAGTGTCTGTTCCAACAAATGCTTAAG6、进入 REBASE 限制性内切酶数据库，输出 AluI、 MboI、 EcoI 三种内酶的Recognition Sequence 和 Type。搜索 rebase，在 Or go directly to enzyme name or #: 下的框内输入酶名称后点 goRecognition Sequence ty

30、peAluI AGCT Type II restriction enzyme MboI GATC Type II restriction enzyme EcoI GAT Putative Orphan methyltransferase7、使用引物设计工具，针对下列未知序列设计一对引物，要求引物长度为 20-25bp，扩增产物长度 300-500bp，退火温度为 50-60。请写出选择的一对引物（Forward Primer and Reverse Primer） 、及相应的 GC 含量、引物的位点、Tm 值和产物长度。GTTTTGCACCTTCGTTTCCTGCGGCGGCTTCTGTCGT

31、CTCCTTGCTTTTTGCTCTCCCAGGTTCCGAGGCCGCCGCGCGTCTCCCGGGGAAGCATGGCGATGAAGGCCGTGTGCGTGCTGAAGGGCGACGGTCCGGTGCAGGGCGTCATTCACTTCGAGCAGAAGGCAAGCGGTGAACCAGTTGTGGTGTCAGGACAGATTACAGGATTAACTGAAGGCGAGCATGGGTTCCATGTCCATCAATATGGGGACAATACACAAGGCTGTACCACTGCAGGACCTCATTTTAATCCTCACTCTAAGAAACATGGCGGTCCAGCGGATGAAGAGAGGCATG

32、TTGGAGACCTGGGCAATGTGGCTGCTGGAAAGGACGGTGTGGCCAATGTGTCCATTGAAGATCGTGTGATCTCACTCTCAGGAGAGCATTCCATCATTGGCCGTACTATGGTGGTCCACGAGAAACAAGATGACTTGGGCAAAGGTGGAAATGAAGAAAGTACAAAGACTGGAAATGCTGGAAGCCGCTTGGCTTGTGGTGTGATTGGGATTGCCCAATAAACATTCCCTATGTGGTCTGAGTCTCAGACTCATCTGCTGTCCTGCTAAACTGTAGAAAAAAACCAAACCATTAAACTGT

33、AATCTTAACAGTT8、将下面的序列用NEBcutter 2.0工具分析，用产生平末端及有四个酶切位点的酶进行酶切，并用抓图提交胶图（view gel ） ，要求1.4% agarose 和Marker为100bp DNA Ladder。进入google首页，搜索NEBcutter 2.0，进入主页！粘贴入序列 选择custom digest，选择 Enzymes cutting N times，填4 个，选出平末端的-digest View gel。选择1.4% agarose和Marker为100bpCTCTCTGCTCCTCCTGTTCGACAGTCAGCCGCATCTTCTTTT

34、GCGTCGCCAGCCGAGCCACATCGCTCAGACACCATGGGGAAGGTGAAGGTCGGAGTCAACGGATTTGGTCGTATTGGGCGCCTGGTCACCAGGGCTGCTTTTAACTCTGGTAAAGTGGATATTGTTGCCATCAATGACCCCTTCATTGACCTCAACTACATGGTTTACATGTTCCAATATGATTCCACCCATGGCAAATTCCATGGCACCGTCAAGGCTGAGAACGGGAAGCTTGTCATCAATGGAAATCCCATCACCATCTTCCAGGAGCGAGATCCCTCCAAAATCAAGTGGGGCGAT

35、GCTGGCGCTGAGTACGTCGTGGAGTCCACTGGCGTCTTCACCACCATGGAGAAGGCTGGGGCTCATTTGCAGGGGGGAGCCAAAAGGGTCATCATCTCTGCCCCCTCTGCTGATGCCCCCATGTTCGTCATGGGTGTGAACCATGAGAAGTATGACAACAGCCTCAAGATCATCAGCAATGCCTCCTGCACCACCAACTGCTTAGCACCCCTGGCCAAGGTCATCCATGACAACTTTGGTATCGTGGAAGGACTCATGACCACAGTCCATGCCATCACTGCCACCCAGAAGACTGTGGAT

36、GGCCCCTCCGGGAAACTGTGGCGTGATGGCCGCGGGGCTCTCCAGAACATCATCCCTGCCTCTACTGGCGCTGCCAAGGCTGTGGGCAAGGTCATCCCTGAGCTGAACGGGAAGCTCACTGGCATGGCCTTCCGTGTCCCCACTGCCAACGTGTCAGTGGTGGACCTGACCTGCCGTCTAGAAAAACCTGCCAAATATGATGACATCAAGAAGGTGGTGAAGCAGGCGTCGGAGGGCCCCCTCAAGGGCATCCTGGGCTACACTGAGCACCAGGTGGTCTCCTCTGACTTCAACAGCGAC

37、ACCCACTCCTCCACCTTTGACGCTGGGGCTGGCATTGCCCTCAACGACCACTTTGTCAAGCTCATTTCCTGGTATGACAACGAATTTGGCTACAGCAACAGGGTGGTGGACCTCATGGCCCACATGGCCTCCAAGGAGTAAGACCCCTGGACCACCAGCCCCAGCAAGAGCACAAGAGGAAGAGAGAGACCCTCACTGCTGGGGAGTCCCTGCCACACTCAGTCCCCCACCACACTGAATCTCCCCTCCTCACAGTTGCCATGTAGACCCCTTGAAGAGGGGAGGGGCCTAGGGAGCCGC

38、ACCTTGTCATGTACCATCAATAAAGTACCCTGTGCTCAACC9、对下面序列进行六框翻译，利用 GENESCAN 综合分析哪个 ORF 是正确的，输出正确的 ORF 六框翻译（抓图）和 GENESCAN 结果(包括 predicted genes/exons 和 predicted peptide sequence(s) 两个部分) 。并针对正确的 ORF 设计一对引物，输出引物即可。另对序列进行酶切，且在正确的 ORF 区域的两侧选择有两个酶切位点的限制性内切酶进行分析，输出默认的胶图（view gel）要求 1.4% agarose 和 Marker 为 100bp D

39、NA Ladder。进入 orffinder 贴入序列 因为从 fasta 格式的特性中看出是人类 genetic codes 选择 2 vertebrate mitochondrial orfind 得出六图 进入 genescan得到图所以选择 232 到 696bp 在六框翻译上最近似的+3 是正确的进入 genefisher 选择产物长度大于 465 选择在 232 到 696bp 间的 若找不到 可放宽限制条件进入 nebcutter 选择 balf+3正确gi|48762945|ref|NM_000454.4| Homo sapiens superoxide dismutase 1

40、, soluble (amyotrophic lateral sclerosis 1 (adult) (SOD1), mRNAGTTTGGGGCCAGAGTGGGCGAGGCGCGGAGGTCTGGCCTATAAAGTAGTCGCGGAGACGGGGTGCTGGTTTGCGTCGTAGTCTCCTGCAGCGTCTGGGGTTTCCGTTGCAGTCCTCGGAACCAGGACCTCGGCGTGGCCTAGCGAGTTATGGCGACGAAGGCCGTGTGCGTGCTGAAGGGCGACGGCCCAGTGCAGGGCATCATCAATTTCGAGCAGAAGGAAAGTAATGGACCAGT

41、GAAGGTGTGGGGAAGCATTAAAGGACTGACTGAAGGCCTGCATGGATTCCATGTTCATGAGTTTGGAGATAATACAGCAGGCTGTACCAGTGCAGGTCCTCACTTTAATCCTCTATCCAGAAAACACGGTGGGCCAAAGGATGAAGAGAGGCATGTTGGAGACTTGGGCAATGTGACTGCTGACAAAGATGGTGTGGCCGATGTGTCTATTGAAGATTCTGTGATCTCACTCTCAGGAGACCATTGCATCATTGGCCGCACACTGGTGGTCCATGAAAAAGCAGATGACTTGGGCAAAGG

42、TGGAAATGAAGAAAGTACAAAGACAGGAAACGCTGGAAGTCGTTTGGCTTGTGGTGTAATTGGGATCGCCCAATAAACATTCCCTTGGATGTAGTCTGAGGCCCCTTAACTCATCTGTTATCCTGCTAGCTGTAGAAATGTATCCTGATAAACATTAAACACTGTAATCTTAAAAGTGTAATTGTGTGACTTTTTCAGAGTTGCTTTAAAGTACCTGTAGTGAGAAACTGATTTATGATCACTTGGAAGATTTGTATAGTTTTATAAAACTCAGTTAAAATGTCTGTTTCAATGACCTGTATTTTGCCAGACTTAAATCACAGATGGGTATTAAACTTGTCAGAATTTCTTTGTCATTCAAGCCTGTGAATAAAAACCCTGTATGGCACTTATTATGAGGCTATTAAAAGAATCCAAATTCAAACTAAAAAAAAAAAAAAAAAA