1、异丙酚对在体大鼠前额叶皮质细胞外液谷氨酸和 氨基丁酸含量的影响_1异丙酚对大鼠前额叶皮层细胞外谷氨酸和 -氨基丁酸的影本文来源：论文 http:/ 30只成年雄性大鼠随机分为实验组（n24）和对照组（n6） ，并在前额皮层放置微透析探针。实验组根据异丙酚浓度，用不同浓度的异丙酚（1 N6, 3, 10，30摩尔/ L，每组 4个）灌注 2 mg/L的脑脊液。对照组灌流液中无异丙酚。灌流液 10 min收集，与谷氨酸和 GABA浓度反相高效液相色谱法测定。结果异丙酚 1 mol/L 10分钟局部灌注后，没有显著差异之间的灌流液中谷氨酸的含量在不同的时间点和基本价值有（P0.05） 。3 mol/
2、L 异丙酚局部灌注后，灌流液中谷氨酸含量下降到 60%在第十的基础值，第二十分钟（P0.05） ，然后逐渐恢复至基础值水平。前额叶皮层的异丙酚浓度为 10 mol/L的局部灌注10 min后，灌流液中谷氨酸含量显著低于基础值在第十分钟到 30分钟（P0.01 或0.05） 。丙泊酚 30 mol/L 10分钟局部灌注后，灌流液中谷氨酸含量显著从第十分钟到 40分钟下降（P0.01 或0.05） 。不同浓度丙泊酚输注后，GABA 在不同时间点的灌流液中的含量差异无统计学意义（P0.05） 。结论异丙酚能降低大鼠前额叶皮层细胞外液谷氨酸含量但对 GABA含量无影响。【关键词】异丙酚，前前额叶皮层细
3、胞外液，谷氨酸，GABA（GABA）摘要：目的探讨丙泊酚局部灌注大鼠前额叶皮质（PFC）对谷氨酸和GABA外 levels.methods三十只成年雄性大鼠随机分为 4组：试验组和 1个对照组（n = 6） ，用微透析探针插入到测试组的一等兵，人工脑脊液流体（ACSF）含有不同浓度的异丙酚（1, 3, 10 和30molL 分别为 PFC）灌注在 2升/分钟；在对照组中，只有ACSF灌。灌流液收集每在实验 10分钟的反相高效液相色谱法测定灌流液中谷氨酸的浓度和 GABA结果灌流液中谷氨酸水平没有明显改变时，丙泊酚1mol/L（P>；0.05） ，但显着下降为 10和 20分钟时，丙泊酚3
4、摩尔L（P <；0.05） 。随着丙泊酚浓度的增加（10 和30mol/L） ，谷氨酸水平下降到 40分钟（P0.05） 。然而，在灌流液中 GABA水平没有改变在不同浓度的异丙酚灌注（P & gt；0.05） 。结论异丙酚可降低大鼠前额叶皮质细胞外谷氨酸水平，但对 GABA水平没有影关键词：异丙酚；前额叶皮层；细胞外液；谷氨酸；-氨基丁酸（-氨基丁异丙酚为目前临床最常用的全身麻醉药，其临床效应主要为意识及记忆消失。哺乳动物大脑联合皮质在意识、记忆等高级认知功能的调节中发挥着极其重要的作用，而前额叶皮质作为联合皮质的重要部分，与高级认知功能有着更加密切的关系1-2 。并且临床研究亦发现，异
5、丙酚产生催眠效应的同时主要使前额叶皮质内血流量下降3 。因此异丙酚引起的临床效应可能与作用于前额叶皮质有关。在哺乳动物前额叶皮质内，谷氨酸和 -氨基丁酸（GABA）是最重要的兴奋性和抑制性神经递质4 ，其含量的 95%以上存在于细胞内（突触前膜的囊泡和胞质中） ，而细胞外液所占比例很低，但前额叶皮质生理功能的发挥取决于细胞外液中的递质含量5Has the important significance and clinical effect of extracellular fluid the prefrontal cortex of propofol in glutamate and gamm
6、a aminobutyric acid GABA content between the experimental application of glutamate and content of prefrontal cortex in local infusion of propofol on prefrontal cortex in the extracellular fluid in vivo microdialysis technique1 materials and methods1.1 experimental animals and instruments, SD adult m
7、ale rats, weighing 200250 g, were provided by the experimental animal center of Shanghai Academy of Biological Sciences, Chinese Academy of sciences. 1 weeks before the experiment, rats reared in 35 cm 35 cm x 40 cm x in the cage, light / dark (12 / 12 hours, 8: 00am-8: 00pm illumination time), ambi
8、ent temperature (24 + 2) C, free water and food intake. The microdialysis probes (CMA / 12, concentric circles), outer tubes (CMA / 12), and micro pump (CMA / 100) are all products of the Swedish Carnegie medical company.1.2 artificial cerebrospinal fluid (ACSF) preparation of 6 microdialysis perfus
9、ate application of ACSF, its composition is (mmol/L): 126.5 sodium chloride and 27.5 sodium bicarbonate, potassium chloride, potassium dihydrogen phosphate 0 2.4.5, CaCl2 1.1, MgCl2 0.83, Na2SO4 0.5, glucose 11.8. 0.1 Applying mol/l NaOH, the pH value was adjusted to and the impurities were 7.3, rem
10、oved by 0.22 m microporous filter membrane stored at DEG C and 0 4 filled with 95% o2/5% CO2 mixture to saturation state.In the 1.3 group, 30 rats were randomly divided into the experimental group (n = 24) and the control group (n = 6), and microdialysis probes were placed in the prefrontal cortex.
11、The experimental group was perfused with l/min ACSF containing different concentrations of 2 propofol (1 n=6, 3, 10, 30 mol/l, 4 subgroups according to propofol concentration), while the control group was perfused with acsf.The microdialysis experiments of cortex rats were performed 1.4 prefrontal a
12、t 10 00am-3 00pm to exclude the effect of circadian rhythms on glutamate and GABA levels in the extracellular fluid of prefrontal cortex. Remove the rats from the cage and act as gently as possible to minimize irritation. Application of chloral hydrate intraperitoneal injection 10% of 400 mg/kg, unt
13、il after the onset of anesthesia rats were fixed on the stereotaxic instrument (Jiangwan type) in the prefrontal cortex, embedded microdialysis outer tube. Stereotaxic localization of prefrontal cortex according to rat brain atlas 7 a/p, 3.3, mm, l/m, 1.2, mm,V，D，5，毫米。外管固定义齿基托，将大鼠置于笼中。48 小时后取出外管核心，并
14、放置一个微透析探针连接微流量泵。在 2升/分钟的 ACSF 60分钟连续输液作为平衡相，和灌流液中的神经递质含量稳定。灌流液收集在随后的 30分钟，每 10分钟 1次，3 次，和平均值的谷氨酸和 GABA 3次的灌流液的含量作为基础值。然后，实验组用不同浓度的异丙酚灌注（1 30 mol/L）与微透析探针 10分钟（对照组丙泊酚 ACSF灌流没有）然后改为 70分钟，每 10分钟一个正常 ACSF灌，1 灌流液收集和储存在摄氏零下 70度的冰箱。反相高效液相色谱法测定灌流液中谷氨酸和 -氨基丁酸的含量（HPLC）1.5在 S处测量的统计处理数据表明，在不同点的细胞外液中的谷氨酸和 GABA含量
15、表示为基值的百分比。采用 SPSS 10统计软件进行统计分析，组和基础值进行比较，采用两因素方差分析 Dunnett-t检验。用单因素方差分析比较各组的基本值。p0.05，差异有统计学意义。2结果2.1在各组间微透析液谷氨酸和 -氨基丁酸的基本值差异无统计学意义（P & gt，0.05）在异丙酚浓度组细胞外液谷氨酸和 -氨基丁酸的浓度与对照组。见表 1。微透析液的谷氨酸和 GABA基础值比较2.2灌流液中谷氨酸含量在同一时间不同。在对照组，灌流液中谷氨酸含量在不同时间点的基线值无显著差异（P0.05） 。异丙酚浓度为 1 mol/L的局部灌注 10 min后，灌流液中谷氨酸含量在不同时间点的基
16、线值无显著差异（P0.05） 。10分钟的局部输注丙泊酚 3 mol/L后，灌流液中谷氨酸含量下降到60%在第十的基础值，第二十分钟（P0.05） ，然后逐渐恢复至基础值水平。丙泊酚输注 10 molL，10 分钟后，第十分钟液中谷氨酸含量基本值为 34%（p0.01） ，第二十分钟和 30分钟显著低于基线值（p0.01 或0.05） ，然后逐渐恢复到基线水平。10 分钟的局部输注丙泊酚 30 mol/L后，灌流液中谷氨酸含量的变化趋势相似，丙泊酚 10 mol / L的 10分钟，在第十分钟的局部灌注，至最低（P0.01） ，然后逐渐回升，但直到第四十分钟，谷氨酸的含量仍显著低于基础值水平（
17、P0.01 或0.05） 。见图 1。2.3改变灌流液中 GABA的内容在不同时间点、不同浓度丙泊酚输注后，GABA 在不同时间点的灌流液中的含量从基础值差异不显著（P0.05） ，如图 2所示。3 讨论在哺乳动物的中枢神经系统内，前额叶皮层是关节皮层的重要组成部分，外界信息和各种刺激信号到达中枢神经系统，需要在前额叶皮层整合处理 8。近年来，谷氨酸被认为在调节意识形成和不同意识水平方面起着重要作用（8） 。谷氨酸能激活 NMDA受体，通过一系列细胞内反应，如激活钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶 II，最终形成和调节意识 9，激活 NMDA受体。研究表明，硫喷妥钠腹腔注射或局部的前额叶皮质灌注能显著
18、降低细胞外谷氨酸含量 10。因此，异丙酚可以降低前额叶皮层细胞外液中的谷氨酸含量，这可能是其无意识等临床效应的原因之一。神经传递主要是通过在突触间隙中的神经递质的浓度决定的，与神经递质的浓度之间的关系，在突触间隙与细胞外液还不清楚，但在一定程度上细胞外神经递质浓度的变化可以反映细胞的突触神经递质浓度的变化。本实验发现，异丙酚可降低细胞外液中的前额叶皮层的谷氨酸水平，并通过突触前再摄取细胞外谷氨酸的释放浓度和做决定，包括神经末梢和神经胶质细胞在 11的再摄取发挥重要作用。研究表明，异丙酚可抑制大鼠海马突触体或皮质谷氨酸依赖的 Ca2 +释放 12，在不影响谷氨酸重摄取，因此异丙酚降低细胞外液中谷
19、氨酸可能是由于突触前谷氨酸释放的抑制作用所致。前额叶皮质，GABA 及周围神经纤维的谷氨酸神经末梢形成轴-体和AXO轴突的突触，谷氨酸释放的活性从而抑制前额叶皮质的锥体神经元兴奋性输出的末梢在 13-15发挥重要的调节作用。在这项研究中，异丙酚对细胞外液中 GABA含量无明显影响，因此，前额叶皮层的细胞外液 GABA可能与异丙酚的中枢作用无关。但以往的研究发现，GABAA 受体拮抗剂的应用可以减少对脑皮质切片谷氨酸的释放，抑制 12丙泊酚，表明 GABAA受体介导的异丙酚对谷氨酸释放的抑制作用，因此本实验以减少异丙酚在细胞外谷氨酸含量也可能 GABAA受体直接相关，但进一步的研究。结论：异丙酚
20、能降低大鼠前额叶皮层细胞外液谷氨酸含量，但对GABA含量无影响。参考文献 1 波斯、T、功能、解剖，觉醒，注意，系统， ， ， ， ， ，脑J，前卫，脑，RES，2000，126:65-77。 2 戈德曼 Rakic，PS，蜂窝，基础工作， ，记忆J.。神经元，1995, 14（3）：477-485。3 veselis RA，赖因泽尔 R，feshenko V，等。在 R和 L前额叶皮层脑血流量减少与剂量相关（PFC）咪唑安定和异丙酚 J.影像学 6记忆障碍时，2001, 13（摘要） 。【4】斯特科蒂，JD，神经递质系统，内侧前额叶皮质， ， ，：，势，致敏作用，兴奋剂，J，脑，RES，脑，
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