1、高效液相色谱法测定氯霉素氢化可的松滴耳液中氯霉素和氢化可的松的含量高效液相色谱法测定氯霉素氢化可的松滴耳液中氯霉素和氢化可的松的含量金克宁(南昌铁路中心医院,南昌 330003)摘要:目的建立高效液相色谱法测定氯霉素氢化可的松滴耳液中氯霉素和氢化可的松的含量.方法采用反相 p!Bondpakc.色谱柱;甲醇.水(70:30) 为流动相; 检测波长为 242nm,外标法定量.结果氯霉素和氢化可的松的线性范围分别为 530p!g/mL(r=0.9995),16g/mL(r=0.9997);平均加样回收率分别为:100.2%(RSD=0.75%),99.53%(RSD=0.97%,n=5);日内 R
2、SD 分别为 0.67%和 0.66%(n=5),日问 RSD 分别为 0.74%和 1.07%(n=4).结论该方法简便,准确,适合该制剂质量检验分析.关键词:氯霉素;氢化可的松;滴耳液;高效液相色谱中图分类号:R917.O1;R927.2 文献标识码:B 文章编号:1007-7693(2003)06-0507-02DeterminationofchloramphenicolandhydrocortisoneineardropsbyHPLCYINKe-ning(NanchangCentralHospitalofRailway,Nanchang330003,China)ABSTRACT:OBJ
3、ECTIVEToestablishHPLCmethodfordeterminationofchloramphenicolandhydrocortisoneineardrops.METHODp!BondpakCI8columwasusedasthestationaryphaseandmethanolwater(70:30)asmobilephase,thedetectivewavelengthWas242am.thecontentswerecalculatedbyexternalstandardmethod.RESULTSThelinearrangesofchloramphenicolandhy
4、drocortisonewere530g/mL(r=0.9995)and16p!g/mL(r=0.9997),respectively;theaveragerecoveryswere100.2%(RSD=0.75%)and99.53%(RSD=0.97%,n=5);theRSDofintradaywere0.67%and0.66%(n=5);theRSDofinter?daywere0.74%andI.07%(凡=4).CONCLUSIONThismethodissimpleandaccurate,whichcanbeusedforthequalitycontrolofthispreparat
5、ion.KEYWORDS:chloramphenicol;hydrocortisone;eardrops;HPLC氯霉素氢化可的松滴耳液为中国医院制剂规范第二版收载的制剂,由氯霉素,氢化可的松,乙醇,聚乙二醇,丙二醇等组成的滴耳剂,具有抗炎,抗过敏作用,临床上用于中耳炎治疗.有关氯霉素和氢化可的松的含量测定方法主要有紫外光谱法,高效液相色谱法,卡尔曼分光光度法】等,对于该制剂,规范中仅规定了用紫外分光光度法测定氯霉素的含量,而没有氢化可的松的含量测定方法.本实验建立了反相高效液相色谱法,同时测定以上两种成份,方法简便,结果准确,重现性好.1 仪器与试药美国 WatersHPLC 系统:510
6、泵,486 紫外检测器,U6K进样阀;中科院大连化学物理研究所提供的 DL 一 800 色谱工作站;日本岛津公司的 160A 型紫外分光光度仪.氯霉素对照品(99.4%,上海第六制药厂 010135),氢化可的松对照品(99.6%,湖北制药厂 010716M),乙醇,聚乙二醇,丙二醇均为药用规格,甲醇为色谱醇,水为重蒸馏水.氯霉素氢化可的松滴耳液为本院自制.2 方法和结果2.1 色谱条件色谱柱:p!BondpakCI8 柱(1Op.,3.9mmx300mm);流动相:甲醇一水(70:30);柱温:室温;检测波长:242am;流中国现代应用药学杂志 2003 年 12 月第 2O 卷第 6 期速
7、:0.9mL/min;进样量:8p!L.2.2 系统性试验按上述色谱条件,分离色谱图见图 1.氯霉素保留时间为 3.90rain,理论塔板数为 2805;氢化可的松保留时间为5.13rain,理论塔板数为 3085.氯霉素与氢化可的松的分离度为 3.11.2.3 线性关系精密称取氯霉素对照品 50mg,氢化可的松 10mg,分别置 100mL 量瓶中,用流动相稀释并定容,得贮备液.分别精密量取氯霉素和氢化可的松贮备液 0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0mL 置 50mL 量瓶中,加入流动相稀释至刻度,摇匀.按上述色谱条件,依次进样 8p!L,测定峰面积,以峰面积积分值为纵坐标,氯霉
8、素及氢化可的松浓度为横坐标,分别进行线性回归.处理结果:氯霉素浓度在 530p!g/mL 内线性关系良好,回归方程为:A:5.1448C 一 4.308,r=0.9995;氢化可的松浓度在 16g/mL 范围内线性关系良好,回归方程为:A=19.907C 一 2.2806,r=0.9997.2.4 加样回收率精密量取已知浓度的氯霉素氢化可的松滴耳液样品0.5,1,1.5mL,分别置 5OraL 量瓶中,再分别精密加入贮备液0.5,1,1.5mL,用流动相稀释至刻度,摇匀,平行配制 5 份,按ChinJMAP,2003December,Vo1.20No.6507上述色谱条件,进行回收率测定,结果
9、见表 1.2.5 精密度试验以流动相精密配制含氯霉素 l5mL,氢化可的松3g/mL 供试液,分别按上述色谱条件,间隔 1h,重复进样 5次,结果氯霉素的 RSD:0.67%,氢化可的松的 RSD=0.66%;上述供试液隔日进样 1 次,连续 4d.测定结果 ,氯霉素的 RSD:0.74%,氢化可的松的 RSD=1.07%.表 1 氯霉素和氢化可的松加样回收率测定结果(n=5)Tab1Recoveryofchloramphenicolandhydrocortisoneintheeardrops(n:5)药物样品本含量加入量平均测定量平均回收率(Ixg/mL)(g/mL)(Ixg/mL)(%)2
10、.6 干扰性试验按处方比例配制不含氯霉素和氢化可的松的空白样品,并按样品分析方法稀释并测定,结果不影响氯霉素和氢化可的松的测定,见图 1.广广-_103.57广r-_103.57t/min广03.57ABC图 1 对照品(A), 样品(B),空白样品 (C)色谱图Fig1HPLCchromatogramsofreferencesbustance(A),sampie(B)andblank(C)1.氯霉素(tR:3.90min);2.氢化可的松(tR=5.13rain)1.ehloramphenicol(tR3.90rain);2.hydrocortisone(tR:5.13rain)508Chi
11、nJMAP,2003December,Vo1.20No.62.7 样品测定取不同批号的待测样品 2 份,分别精密量取 ImL 置50mI 量瓶中,加流动相定容,再精密量取 1mL 置 25mL 量瓶中,加流动相至刻度,每样 5 份,按上述色谱条件测定,结果见表 2.表 2 样品含量测定结果(n=5)Tab2Contenctsofchloramphenicolandhydrocortisoneinsampies(n=5)3 讨论3.1 流动相的选择选择不同比例的甲醇一水作流动相,可见氯霉素和氢化可的松的保留时间随甲醇比例的增大而减小,氢化可的松的保留时间受甲醇比例的影响更大,当甲醇的比例从 55
12、%增大到 70%时,氯霉素的保留时间从 7.30rain 减小到 3.90rain,而氢化可的松的保留时间从 15.42min 减小到 5.13rain;用冰醋酸调流动相 pH 值,发现 pH 值在 6.53.0 范围内并不影响被测物的色谱行为.当甲醇与水的比例调整到 70:30,流速为 0.9mmin 时,被测物保留时间适当,分离度较好, 峰形好,系统稳定.3.2 检测波长的选择将适当浓度的氯霉素和氢化可的松溶液在 200400nm 波长内进行紫外扫描,发现氯霉素在 278nm 处有最大吸收,氢化可的松在 242nm 处有最大吸收,考虑到制剂处方中,氢化可的松的量仅为氯霉素量的 1/5,选择 242nm 为测定波长,在此波长下检测完全满足测定要求.参考文献1中国医院制剂规范M. 第二版.1995:158.2叶云,杨艳 ,肖顺林,等.HPI 法测定复方氯霉素栓中氯霉素含量J.药物分析杂志,1998,18(4):269.3中国药典.2000 年二部S.2000:480.4金克宁,张本全 ,汤伟.卡尔曼滤波分光光度法测定复方氯霉素滴耳液中两组份的含量J】.中国医院药学杂志,1996,16(5):210.收稿日期:2002?1216中国现代应用药学杂志 2003 年】2 月第 2O 卷第 6 期
