1、1植物生物技术考试重点1、生物技术？现代生物技术主要包括哪几个方面的技术？生物技术(biotechnology)，也称生物工 程, 是指以现代生命科学为基础,结合先进的工程技术手段和其他基础科学的科学原理, 按照预先的设计改造生物体或加工生物原料, 为人类生产出所需要的产品或达到某种目的的一系列技术。先进的工程技术：基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程和蛋白质工程等新技术。改造生物体：获得优良的动植物品种。为人类生产所需的产品：食品、医药、能源、原料等。生物技术的产生以 DNA 重组技术的建立为标志。现代植物生物技术包括：植物组织培养技术、人工种子技术、细胞工程技术、基因工程技术。2、什么是胚
2、培养？有什么意义？ 无菌条件下将胚从胚珠或种子中分离出来，置于培养基上进行离体培养的方法。意义：克服远缘杂交不亲和性和杂种不育性，获得种间或属杂种。种间或属杂交中，受精作用能正常完成，胚也能进行早期的发育，但由于胚乳发育不良，杂种胚最终将夭折，因而不能形成有发芽能力的种子。3、什么是基本培养基？仅能满足微生物野生型菌株生长需要的培养基4、什么是转基因沉默？5、什么是逆转录酶？6、植物组织培养？将植物的离体器官（如根、茎、叶、花、果实、种子等） 、组织（如花药、胚珠、形成层、皮层、胚乳等） 、细胞（如体细胞、生殖细胞花粉等）以及去除细胞壁的原生质体，甚至幼小的植株，在人工控制的无菌环境下，应用人
3、工培养基创造适宜的培养条件，使其生长、分化并成长为完整植株的过程。也称为离体培养或试管培养。7、愈伤组织的形成的过程？8、愈伤组织的定义和特点？愈伤组织（Callus）：离体的植物器官、组织或细胞，在培养一段 时间以后，通过细胞分裂，形成一种高度液泡化、无定形状态、由薄壁细胞组成的排列疏松的组织。细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明9、阐述外植体的成苗途径。210、植物组织培养常用的培养基及各自的特点？据其营养水平分：基本培养基、完全培养基 据其态相分： 固体培养基、液体培养基据其作用分：诱导培养基、增殖培养基、生根培养基据培养物的培养过程分：初代培养基、继代培养基 组织培养中常用的培养基主要有
4、：MS、White、N6、B5、Heller、Nitsch、Miller、KM-8P培养基种类固体培养基：加凝固剂（多为琼脂）的培养基；液体培养基：不加凝固剂的培养基。初代培养基：用来第一次接种从植物体上分离下来的外植体的培养基。继代培养基：用来接种继初代培养之后的培养物的培养基。基本培养基：只含有机和无机成分，但不包括糖、激素和复杂有机添加物等。完全培养基：基本培养基的基础上，根据试验的不同需要，附加一些物质，如植物生长调节物质和其它复杂有机附加物等。 2、培养基的特点 MS培养基 -大量元素。特点：无机盐的浓度高，具有高含量的氮、钾，尤其硝酸盐的用量很大，同时还含有一定数量的铵盐，这使得它
5、营养丰富，不需要添加更多的有机附加物，就能满足植物组织对矿质营养的要求，有加速愈伤组织和培养物生长的作用，当培养物久不转移时仍可维持其生存。 White(WH)培养基。特点：无机盐浓度较低。它的使用也很广泛，无论是生根培养还是胚胎培养或一般组织培养都有很好的效果。 N6 培养基。特点：KNO3和(NH4)2SO4 含量高，不含钼。目前在国内 已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花粉和花药培养和组织培养。 B5 培养基。特点：含有较低的铵盐，较高的硝酸盐和盐酸硫胺素。铵盐可能对不少培养物的生长有抑制作用，但它适合于有些植物如双子叶植物特别是木本植物的生长。3KM-8P 培养基。特点：特点是有机成分
6、较复杂, 它包括了几乎所有的单糖和维生素、呼吸代谢中的主要有机酸。主要用于原生质体培养。 固体培养基和液体培养基：固体培养基：使用简便，一般用于组织、愈伤组织、短枝、茎尖等材料的培养。特别适合植物的快速繁殖。缺点：一块外植体只能部分接触培养基，不能浸没在培养基中，结果培养物上下部因接受养分不匀而形成差异，不易使细胞群体保持一致。液体培养基(不加琼脂)：提供比较均匀的营养，而且细胞的 增殖速度快，一般用于细胞，原生质体的培养，也可用于愈伤组织的培养，胚状体等材料的继代培养。11、植物组织培养室需要控制的条件。温度：大多数植物组织培养温度在 2327之间。低于 15时培养，植物组织会表现生长停止，
7、高于 35时对植物生长不利。不同植物培养的适温不同。月季是 2527、番茄是 28。温度不仅影响植物组织培养育苗的生长速度，也影响其分化增殖以及器官建成等发育进程。如烟草芽的形成以 28为最好，在 12以下，33以上形成率皆最低。 光照：主要表现在光照强度、时间长短、光照质量等。有的材料培养需要光，有的则不需光；不同的植物所需的光照强度也不一样。一般 1000-5000Lx/12-16h/天。 湿度：湿度影响包括培养容器内湿度和环境湿度。容器内湿度水平主要受培养基水分含量和封口材料的影响。封口材料直接影响容器内湿度情况。封闭性差的材料易导致培养基干燥；封闭性高的封口材料易引起透气性不好。湿度过
8、低会使培养基丧失大量水分，导致培养基各种成分浓度的改变和渗透压的升高，进而影响组织培养的正常进行。湿度过高时，易引起棉塞长霉，造成污染。气体环境: 氧气是组织培养中必需的因素，瓶盖封闭时要考虑通气问题，可用附有滤气膜的封口材料。通气最好的是棉塞封闭瓶口，但棉塞易使培养基干燥，夏季易引起污染。固体培养基可加进活性炭来增加通气度，以利于发根。培养室要经常换气，改善室内的通气状况。液体振荡培养时，要考虑振荡的次数、振幅等，同时要考虑容器的类型、培养基等。 12、植物组织培养最常用的C 源、常用的激素及其作用和浓度？蔗糖 2%5% 作为植物生 长发育所需的营养物质和调节培养基中的渗透压生长素 诱导细胞
9、分裂和根的分化细胞分裂素 促进细胞分裂和由愈伤组织形成器官，分化不定芽赤霉素 刺激在培养中形成的不定胚发育成小植株油菜素内酯 促进伸长 提高植物內源生长素乙烯 促进 RNA和蛋白质合成和使细胞膜透性增加脱落酸 抑制外植体形成体细胞胚状体13、植物组织培养中培养基配制过程中应注意的环节？培养基的配制：准备工作、母液的配置和保存、培养基配置、培养基的灭菌 配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。各种药品要充分溶解再依次混合.配制时注意一些离子之间易发生沉淀(如Ca2+ 和S042 -)。铁盐容易发生沉淀，需单独配制。培养基的配制注意事项：1、溶解特征：大量元素易沉淀；2
10、、标签（浓度、日期）43、保存期：发现沉淀不能用。培养基的配制步骤：1、将配制好的母液按顺序排列，2、列表计算各母液用量3、先取适量的蒸馏水放入容器，再依次加入母液4、加入肌醇和蔗糖，定容后调pH5、加入琼脂，煮开至完全溶解6、分装到组培容器7、封口，贴标签14、植物组织培养的理论依据？植物细胞全能性组织培养的生理依据：激素（植物生长调节剂）调控15、植物组织培养技术在目前农业生产上的应用？1 育种上的应用: 单倍体育种：快速纯化个体，缩短育种年限， 提高育种效率等作用。远缘杂交：克服杂交不亲和性，用于植物的远缘杂交；体细胞杂交；胚珠培养。体细胞变异的应用：果树苗木等。单细胞突变体的筛选：抗性
11、育种。2 种子繁育与生产：快速繁育：兰花、香蕉、甘蔗、咖啡等。获得脱毒植株，提高种性：病毒可通过维管束传递，茎尖细胞分裂很旺，几乎没有病毒， 如土豆。人工种子：不受气候影响，苜蓿、芹菜、胡萝卜等。3 植物产品的工厂化生产：喜树的喜树碱（抗癌） ，人参皂苷，香料植物的香油精。4 种质资源的保存：对于难于产生种子，种子不易保存，或珍稀的植物。番薯的块根保存很难，可以取其茎尖进行组织培养，进行保存。16、简述植物组织无菌培养的一般步骤？外植体表面消毒：将外植体置于有螺丝盖的玻璃瓶中, 注入含有几滴活化剂的浓度适当的消毒液, 使材料完全浸没在消毒液中, 盖上盖, 把玻璃瓶置入超净工作台。消毒期间摇动
12、2-3 次, 使消毒液充分接触植物 组织。 消毒处理后, 打开瓶盖, 倒出消毒液, 注入适量的无菌蒸馏水, 再盖上盖, 摇动数次, 将水倒掉如此重复 34 次。 将材料取出, 置于一个已经灭菌的培养皿中。器械消毒：将所要使用的器械 (如解剖刀、镊子、剪刀等) 置入 95 % 乙醇中, 取出后于酒精灯火焰上灼烧, 待冷却后即可使用。所有操作器械需使用一次, 消毒一次。 用这些消过毒的将已经过表面消毒的材料切取或剥取适当的外植体。 将培养容器 的盖或塞子 打开,将外植体接种到培养基上,如果使用的是玻璃培养容器,把瓶口置酒精灯火馅上烘烤数秒钟,然后迅速用瓶盖或瓶塞封严。17、与整体植物相比，植物离体
13、组织有哪些特点？5整体植物不同的器官具有明显的分工，只要有水和无机盐就可以完成整个生命过程。离体组织与植株没有了物质、能量和信息的交流，从而：1、生长发育不受植株的控制，可以脱离原来的发育路线；2、得不到生长发育所需要的培养，从自养变成异样。3、所需要的营养与活体组织所需要的营养具有很大的差别。能量来源（碳源） ；有机成分、激素等。18、简述激素在植物组织离体培养过程中的作用？19、常用的 PCR 技术有哪些？20、PCR 反应 的条件？21、PCR 反应 中关键的试剂有哪些？22、什么是离体授粉？23、柯斯质粒？24、载体的种类以及载体应具备的特性？25、质粒载体构建的基本原则，以及质粒载体
14、的一般生物学特性？26、噬菌体的特征？什么是溶菌周期，什么是溶源周期？27、同源基因的共抑制效应？28、基因克隆操作中常用的工具酶种类？29、基因克隆的本质以及基因克隆主要包括哪些内容？30、简述植物基因组文库构建的一般步骤以及构建原则？31、什么是转基因育种？转基因育种有哪些特点？32、理想的植物受体系统应符合的条件33、根据你的理解详细说明农杆菌介导的转基因技术（包括土壤农杆菌 Ti 质粒转化系统和发根农杆菌 Ri 质粒转化系统）有哪些优点？34、以水稻为例详细介绍农杆菌介导的转基因技术的具体操过程?35、外源基因整合到植物染色体上的主要的分子鉴定方法？36、转基因检测可以从哪些方面进行检
15、测，具体的检测原理是什么？6植物基因工程理论上的三大发现：DNA 为遗传信息的携带者。DNA 的双螺旋模型和半保留不不连续复制机制。中心法则和操纵子模型。植物基因工程技术上的三大发明：DNA 体外切割与连接技术。基因工程载体的使用。DNA 分析技术：电泳、测序、杂交技术。基因工程的定义：用人工的方法，从不同生物中提取外源基因及载体DNA，经过体外切割、拼接和重组，然后采取某种方法，把重组后的带有外源基因的载体 DNA 引入植物细胞，并使其在植物细胞内进行复制和表达，以达到预期改变受体植物细胞遗传特性的目的。它的核心是重组 DNA技术。也称：遗传工程，基因操作，基因克隆，分子克隆。基因工程的生产
16、应用：克服远缘杂交（有性杂交）的困难。1、使基因在动物、植物，微生物不同生物系统中传递。2、快速、定向的获取人类所需要的生物新类型。细胞工程的定义： 利用细胞培养、细胞融合等细胞生物学方法对细胞进行改造，使细胞按人类需要生产有用的产品，或者遗传物质，从而培育新的生物类型。包括：细胞杂交技术、单克隆抗体、细胞大规模培养技术。 细胞工程的应用-原生质体融合植物组织培养室设计：准备室（培养基室）接种室（无菌操作）培养室（控制温光）细胞室（细胞研究）培养基的成分:水、无机盐、有机成分、植物生长调节剂、碳源、凝固剂及其它附加物1、无机营养无机物中有16 种是植物必须的，即C、H、O、N、P 、K、Ca
17、、 Mg、S、Fe、B、Mn、Cu 、Zn、Mo、Cl 。 I 虽然不是植物必需元素，但几乎所有的培养基中都添加 I。 植物所需要的浓度大于0.5mmol/L 的元素为大量元素，小于 0.5mmol/L 的元素为微量元素。缺氮：表现出一种很注目的花色素苷的颜色，愈伤组织不能形成导管；缺钾或磷：细胞过度生长，形成层组织减退；缺硫：愈伤组织褪绿；缺铁：细胞分裂停止；缺硼：细胞分裂停滞，细胞伸长；而缺锰铜则会影响细胞伸长。2、有机成分-氨基酸氨基酸是蛋白质的组成成分，也是一种有机氮化合物。7常用的有甘氨酸、谷氨酸、精氨酸、丝氨酸、丙氨酸、半胱氨酸以及多种氨基酸的混合物（如水解酪蛋白、水解乳蛋白）等。
18、有机氮作为培养基中的惟一氮源时，离体组织生长不良，只有在含有无机氮的情况下，氨基酸类物质才有较好的效果。有机成分 - 维生素类能明显地促进离体组织的生长。培养基中的维生素主要是 B 族维生 素，如硫胺素（维生素 B1） 、吡哆醇（维生素 B6） 、烟酸（维生素 B3，又称维生素 PP） 、泛酸（维生素 B5） 、生物素（维生素 H） 、钴胺素（维生素 Bl2） 、叶酸（维生素 B11） 、抗坏血酸（维生素 C）等。有机成分 - 天然有机物 有机附加物包括有些成分尚不清楚的天然提取物，如椰乳(CM)、香蕉泥、番茄汁(TJ) 、马铃薯泥、苹果汁、生梨汁、西瓜汁、酵母提取液（YE） 、麦芽浸出物（M
19、E）等。有机成分 - 肌醇 肌醇：环己六醇，帮助活性物质作用其他：单核苷酸等。3、碳 源糖在植物组织培养中是不可缺少的。它不但作为离体组织赖以生长的碳源，且还能使培养基维持一定的渗透压（一般培养基渗透压维持在 1.54.1MPa） 。渗透压对细胞的增殖和胚状体的形成都有十分明显的影响。一般多用蔗糖调节渗透压，其浓度为 15，也可用麦芽糖、葡萄糖或果糖等。葡萄糖或果糖价格稍贵，但可防褐化。麦芽糖价格贵，细胞培养时用。4、激 素激素对愈伤组织的诱导、器官分化及植株再生具有重要的作用.培养基中的关键物质: 主要包括生长素、细胞分裂素、赤霉素（GA3） 、脱落酸（ABA ） 、乙烯。激 素 - 生长素
20、生长素能影响植物茎和节间的伸长、向性、顶端优势、叶片脱落、生根等现象。 离体培养中的作用：诱导愈伤组织的产生；促进细胞脱分化；促进细胞的伸长；促进生根。常用的生长素有吲哚乙酸（IAA） 、吲哚丁酸（IBA） 、萘乙酸（NAA ） 、2，4二氯苯氧乙酸（2，4D） 。IAA、NAA、IBA、2,4-D 之类生长 素，可先用少量0.1N 氢氧化钠或乙醇溶解，然后再定容到所需要的体积。激 素- 细胞分裂素细胞分裂素影响植物细胞分裂、顶端优势的变化和茎的分化等。培养基中加入细胞分裂素，主要是为促进细胞分裂和由愈伤组织形成器官，分化不定芽。由于这类化合物有助于解除顶端优势对腋芽的抑制作用，可用于茎的增殖
21、。细胞分裂素有天然的和人工合成的。常用的有玉米素（ZT） 、苄氨基腺嘌呤（6BA） 、激动素（KT）等。KT、BA 等细胞分裂素则可用少量 0.1N 盐酸加热溶解，然后加水定容。激 素 比当配制的培养基中生长素/细胞分裂素 的比例高时则有利于生根；生长素/ 细胞分裂素的比例低时则有利于生芽；若两者浓度相当时，既不利于生根，也不利于生芽，而是愈伤8组织的产生占优势。其它的一些激素：赤霉素，植物组织培养中常用的是 GA3。脱落酸，在植物组织培养中对培养物有间接的抑制作用，它可抑制外植体形成体细胞胚状体。水杨酸（阿司匹林） ，能抑制 ABA 的形成，有利于胚状体的形成。5、凝固剂在固体培养时，琼脂是
22、使用最方便、最好的凝固剂。琼脂是一种高分子的碳水化合物，以色白、透明、洁净的为佳，仅溶解于热水，冷后（40以下）即凝固为固体状的凝胶。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式等有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH 等因素有关，长时间的高 温会使凝固能力下降，过酸、过碱也会使琼脂发生水解，丧失凝固能力。 琼脂糖：原生质体培养时用。Phytogel：新型凝固剂。6、水植物组织培养所必需培养基的配制必须用超纯水细胞培养主要用蒸馏水7、活性炭（AC）活性炭加入培养基中的目的主要是利用其吸附能力，减少一些有害物质的影响，如防止酚类物质污染而引起组织褐化死亡。这在兰花组织培养中效果更明显。活性炭使培养基
23、变黑，有利于某些植物生根。活性炭对物质吸附无选择性，因此使用时应慎重考虑，不能过量，一般用量为0.10.5。活性炭对形态发生和器官形成有良好的效应。 8、培养基的 pH培养基的 pH 因培养材 料不同而异，大多数植物都要求在 pH5.65.8 的条件进行组织培养。在培养过程中，培养基的 pH 不是一成不变的，往往随着培养基的水分和养料的消耗，pH 会发生一些变化。高压灭菌会 降低培养基中的 pH。配制培养基时，常用 0.lmolL 的 NaOH 和 0.lmolL 的 HCl来调节培养基的 pH。 pH 的高低会影响琼脂的凝固能力 ：pH6 培养基变硬， pH5 琼脂不易凝固培养基的灭菌和存储
24、：培养基一般采用湿热灭菌法，压力108kPa、温度为121时，维持20min 。某些激素（如GA3、ZT、IAA） 、抗生素以及某些维生素等，遇热时容易分解，不能进行高压灭菌。当使用这类化合物时，可选择使用孔径为0.45m或更小的细菌滤膜过滤灭菌。培养基一般需冷却到60以下（恰在琼脂凝固之前）再加入这些遇热分解化合物。 将滤膜安在过滤器里面进行高压灭菌。过滤器的灭菌温度不应超过121 。 植物组培培养中污染的来源：（1) 培养容器；（2）培养基本身；（3）外植体；（4）接种室的环境；（5）操作用的器械；（6）培养室的环境。9可以通过灭菌措施防止或减少污染源常用的灭菌方法：物理灭菌：高温高压灭菌
25、、干热灭菌(烘烧和灼烧) 、湿热灭菌、辐射 (紫外线、超声波、微波)灭菌、过滤灭菌。化学灭菌：酒精、升汞、过氧化氢、高锰酸钾、次氯酸钠、抗生素等化学药品处理，根据工作中的不同材料不同目的适当选用。包括：熏蒸灭菌、喷雾灭菌、消毒液灭菌。高压灭菌通常会使培养基中的蔗糖水解为单糖，从而改变培养基的渗透压。培养基中的铁在高压灭菌时会催化蔗糖水解为葡萄糖和果糖。培养基值小于5.5，其水解量更多，培养基中含有活性炭时，高压下蔗糖水解大大增强。灭菌注意事项：1、GA3、维生素、蔗糖等的降解问题；2、灼烧问题；3、紫外灯的危害；4、消毒剂对皮肤的损害。脱分化：指高度分化的植物器官、组织或细胞，在离体培养条件下
26、经过多次细胞分裂逐渐失去原来的结构、功能和分化状态，形成无组织结构的愈伤组织或细胞团的过程。再分化：指离体培养的植物细胞和组织可以由脱分化状态重新进行分化，形成另一种或几种类型的细胞、组织、器官，甚至形成完整植株。植物组织培养步骤：植物组织培养的类型：愈伤组织培养: 最为常见的组织培养器官培养: 根、茎、叶、花等胚培养：胚、胚乳、珠心、子房、细胞培养和原生质体培养：悬浮培养、单细胞培养外植体消毒的一般步骤：101、预处理，先对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，将准备使用的植物材料在流水中冲洗干净。经过预处理的植物材料，其表面仍有很多细菌和真菌。 2、将外植体置于无菌的玻璃瓶中，加入75%的酒
27、精溶液浸泡材料10S左右。倒出酒精，用无菌水冲洗一次。3、将适当浓度的消毒液(0.1%升汞或2% 次氯酸钠)，使材料完全浸没在消毒液中，盖上瓶盖，把玻璃瓶置入超净工作台灭菌一定时间。在灭菌期间须摇动玻璃瓶2-3次。 4、消毒处理后，将消毒液倒出，注入适量的无菌蒸馏水漂洗，将水倒掉，重复3-4次。外植体培养固体培养法：用琼脂或植物胶固化培养基来培养植物材料的方法。该方法操作简单，通气好，外植体固定，利于愈伤组织的诱导、分化，应用最广；但养分分布不均，生长速度不均衡，有毒物质积累，并常有褐化中毒现象发生。液体培养法：即用不加固化剂的液体培养基培养植物材料的方法。一般用于愈伤组织的繁殖、分散；主要用
28、于分离单细胞和产生体细胞无性系，生产次生代谢物质。由于液体中氧气含量较少，所以通常需要通过搅动或振动培养液的方法以确保氧气的供给，优点：生长繁殖快、均匀，工厂化生产缺点：需要摇床，频繁继代，不利分化。初代培养旨在获得无菌材料和无性繁殖系。即接种某种外植体后，最初的几代培养。初代培养时，常用诱导或分化培养基，即培养基中含有较多的细胞分裂素和少量的生长素。初代培养建立的无性繁殖系包括：茎梢、芽丛、胚状体和原球茎等。根据初代培养时发育的方向可分为:顶芽和腋芽的发育、不定芽的发育、体细胞胚状体的发生与发育。继代培养是继初代培养之后的连续数代的扩繁培养过程，外植体或愈伤组织在培养基上生长一段时间以后，由
29、于营养物质枯竭，水分散失，以及代谢产物的积累，必须转移到新鲜培养基上培养。继代培养的后代是按几何级数增加的过程。生根培养是使无根苗生根的过程，目的是使生出的不定根浓密而粗壮。生根培养可采用1/2或者1/4MS培养基，全部去掉细 胞分裂素，并加入适量的生长素(NAA、IBA等) 。快速繁殖中初代培养只是一个必经的过程，而继代培养则是经常性不停的进行过程。但在达到相当的数量之后，则应使其中一部分转入生根阶段。增殖只是贮备母株，而生根才是增殖材料的分流，生产出成品。若不及时将培养物转到生根培养基上去，就会使久不转移的苗子发黄老化，或因过分拥挤而使无效苗增多造成抛弃浪费。11（1）愈伤组织外植体先形成
30、愈伤组织，再分化成完整的植株。在愈伤组织上同时长出芽和根，以后连成统一的轴状结构（较少） ，育成植株；在愈伤组织中先形成茎，后诱导成根，再发育成植株；在愈伤组织中先形成根，再诱导出芽，得到完整植株。但在培养中一般先形成根的，往往抑制芽的形成；而相反，一般先产生芽的，则以后较易产生根。（2）胚状体发生 组织培养中再生植株可通过与合子胚相似的胚胎发生过程，即形成胚状体，再发育成完整植株。 胚状体可以从以下几种培养物产生： 直接从器官上发生；愈伤组织发生； 从游离单细胞发生；从小孢子发生。（3）器官发生途径外植体经诱导后直接形成根与芽，发育成完整的植株如茎尖、花芽、叶片、花托、鳞片等组织直接产生小苗
31、，形成小苗（芽）之前也形成少量的愈伤组织。利用在叶外植体的周围再分化出芽，如烟草。利用从鳞茎分化芽或小鳞茎，如百合，水仙。（4）原球茎型大部分兰花的培养属于这一类型。原球茎是一种类胚组织，培养兰花类的茎尖或腋芽可直接产生原球茎，继而分化成植株，也可以继代增殖产生新的原球茎，这取决于培养条件和培养基。污染的预防措施防止材料带菌：避免阴雨天在室外采集外植体； 材料预培养。严格外植体灭菌接种用具灭菌彻底严守无菌操作规程保持培养室清洁玻璃化现象：离体培养物的嫩茎或叶呈半透明水渍状，为生理失调症。玻璃化苗外形与正常苗有显著差异。其叶、嫩梢呈水晶透明或半透明，植株矮小肿胀，失绿，叶片皱缩成纵向卷曲，脆弱易碎；叶表皮缺少角质层蜡质，没有功能性气孔，不具有栅栏组织，仅有海绵组织；体内含水量高，但干物质、叶绿素、蛋白质、纤维素和木质素含量低。外植体褐变：指在接种后，其表面开始褐变，有时甚至会使整个培养基褐变的现象。是由于植物组织中的多酚氧化酶被激活，而使细胞的代谢发生变化所致。在褐变过程中，产生醌类物质，多呈棕褐色，扩散到培养基后，就会抑制其他酶的活性，从而影响所接种外植体的培养。12
