1、一、试验方法1、DPPH 自由基清除率的测定本实验采用 1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl(DPPH)法测定样品清除自由基活性。1.1 实验原理1,1-二苯基-2-苦肼基（1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl(DPPH)）是一种稳定的以氮为中心的自由基，其乙醇溶液显紫色，最大吸收波长为 517nm。当 DPPH 溶液中加入自由基清除剂时，其孤对电子被配对时，吸收消失或减弱， 导致溶液颜色变浅， 显黄色或淡黄色，在 517nm 处的吸光度变小，其变化程度与自由基清除程度呈线性关系，故该法可用清除率表示，清除率越大，表明该物质清除能力越强。1.2 溶液的配
2、制0.08mmol/L DPPH 溶液的配制：精密称取 DPPH8.0mg，用无水乙醇溶解并定容至 200ml 棕色容量瓶中，得浓度为 0.004%的 DPPH 溶液，避光保存， 备用。1.3 实验步骤：分别取不同浓度的各样品溶液（0.24,0.48,0.72,0.96,1.20mg/ml）1.0ml，置 10ml 离心管中，加入 3.0ml 的 DPPH 溶液，室温避光反应 30min，同时以无水乙醇为空白，于 517nm 波长处测定吸光值。按下列公式计算 DPPH 自由基清除率。DPPH 自由基清除率（%）= A 0-(As-Ac)/ A0100%公式中，A 01.0ml 蒸馏水 +3.0
3、mlDPPH 溶液的吸光度值As1.0ml 样品溶液 +3.0mlDPPH 溶液的吸光度值Ac1.0ml 样 品溶液+3.0ml 无水乙醇的吸光度值将实验重复三次，求得清除率的平均值。2、总的抗氧化活性的测定总的抗氧化活性实验采用改良后的 Prieto 法。2.1 实验原理：磷钼络合物测定方法的原理是 Mo(VI)被抗氧化物质还原成绿色的 Mo(V)络 合物，其最大吸收波长为 695nm。抗氧化物质活性越强，测定的吸光度值越大。此方法操作简单 ，所用 试剂低廉、方法重现性好，非常适合抗氧化性的测定。2.2 溶液的配制样品液:同上磷钼试剂:0.6mol/L 浓硫酸溶液、 28mmol/L 磷酸钠
4、溶液和 4mmol/L 钼酸胺溶液混匀，即得。2.3 实验步骤分别取不同浓度的各样品溶液（0.24,0.48,0.72,0.96,1.20mg/ml）1.0ml，置10ml 离心管中，加入 3.0ml 试剂溶液（试剂溶液中包括 0.6mol/L 的硫酸、28mmol/L 的磷酸钠、4mmol/L 的钼酸铵）。混合液于 95水浴锅中分别水浴30min，60min、90 min、120 min、150 min。放冷至室温，695nm 处测 吸光度值。以蒸 馏水为空白，吸光度值越大，表明抗氧化能力越强。BHT 做 为阳性对照。将 实验重复三次，求平均值。三、还原力的测定3.1 实验原理以普鲁士蓝Fe
5、 4(Fe(CN)6)3 之生成量作为指标，将六氰合铁酸钾K 3 Fe(CN)6 还 原成 K4Fe(CN)6，再利用 Fe3+形成 Fe4(Fe(CN)6)3，由 700nm 处吸光值变化检测还原力大小。吸光 值愈高表示样品的还原力也就越强。3.2 溶液的配制3.2.1 样品的配制：用乙醇配制浓度分别为 0.24,0.48,0.72,0.96,1.20mg/ml 各样品溶液，浓度分别为 0.06,0.12,0.18,0.24,0.30mg/mlBHT 溶液，Vc 溶液。3.2.2 0.2mol/LPBS，PH=6.6:A 溶液:0.2mol/L Na 2HPO4 溶液:称 Na2HPO4.2
6、H2O35.63g，定容至 1000mL;B 溶液 : 0.2mol/L NaH2PO4 溶液:称 NaH2PO4.2H2O31.21g，定容至 1000mL;取 A 溶液 37.5mL 加 B 溶液 62.5mL，即为 pH=6.6 的 0.2mol/L PBS。3.3 实验步骤不同浓度的各样品溶液（0.24,0.48,0.72,0.96,1.20mg/ml）1.0ml，加入0.2moL/L 的磷酸 盐缓冲液（pH=6.6）2.5mL 和 1%的铁氰化钾溶液 2.5 mL，得混合物于 50水浴保温 20 分钟 ，然后加入 2.5ml10%（w/v）三氯乙酸溶液,混合溶液3000rpm 离心 10min，精密吸取上清液 2.5ml，加入 2.5ml 蒸馏水和 0.5ml0.1%的三氯化铁溶液，在 700nm 处测吸光度（吸光度值越大， 还原力越强）。BHT 做为阳性对照。将 实验重复三次，求平均值。
