1、腐植酸对小白鼠免疫水平影响的研究62HeilongjiangAnimalScienceandVeterinaryMedicineNo12008腐麓酸时小白曩免疫水平影响的研究赵义龙,黄金凤,赵金香,矫继峰,李太元(1.延边大学农学院,吉林龙井 133400;2.塔里木大学动科院 ,新疆阿拉尔 843300)中图分类号:$865.13 文献标识码:B 文章编号:1004 7034(2008)01006202腐植酸(Humicacid,HA)是一种天然高分子有机弱酸,是自然界植物残体腐解后的产物,广泛存在于泥煤,褐煤,风化煤及泥岩中,是无定形的芳香族类的复合物,为阴离子多的一种电解质,系由多醣类,
2、蛋白质,比较简单的酚和金属元素结合而成,其分子质量在 100020000u 之间,化学结构复杂,具有离子交换能力,螯合能力和缓冲能力.又因其呈微细球形颗粒而有较强的吸附力.经过研究发现,HA 分子内含有羧基,羰基,醌基,酚基等多种官能团.这些活性基团决定了腐植酸具有弱酸性,亲水性,吸附性和络合性等特性.此外,还确定 HA 含有氨基酸,维生素,酶类以及多种微量元素,并有较强的抗菌,抗病毒,抗炎,止血,改善微循环,抗肿瘤,调节体内免疫和内分泌功能的作用.随着研究的深入,证明腐植酸具有诸多的药理功效,在提高免疫功能,抗肿瘤等方面的作用较显着.试验通过小白鼠初步研究免疫作用效果,为腐植酸在提高机体免疫
3、力的应用上提供依据.1 材料与方法1.1 腐植酸腐植酸经过碱液处理从煤样中提取出来,煤样南延边大学农学院微生物实验室提供.1.2 试验动物昆明纯种小白鼠,由延边大学医学院实验动物中心提供.鸡,兔子,由延边大学农学院小动物室提供.1.3 药品试剂大鼠淋巴细胞分离液,PHA,Giemsa,Wright, 苏木精,伊红.1.4 迟发型过敏反应采用健康雌雄各半的昆明种小白鼠 48 只,体重2226g,随机分成 6 组,每组 8 只,自动摄食和饮水.腐植酸灌胃组按照 0.5mL/次的剂量给药,对照组给予等量的生理盐水,每天 2 次.在灌胃进行到第3 天时,每只小白鼠背部皮下注射 10%SRBC50IxL
4、.免疫后 4 天取 20%SRBC50IxL 悬液注射在小白鼠右收稿日期:2006 一 l2 一 l6:修回日期:20070228作者简介:赵义龙(1981 一),男,硕士研究生.通讯作者:李太元(1962 一),男(朝鲜族), 教授,硕士侧足垫皮下,左侧注射 50L 生理盐水.24h 后用游标卡尺(精密度 0.02mm)测定小白鼠左右足垫的厚度,2 只足垫厚度差即为肿胀厚度.1.5E 玫瑰花环形成试验试验方法参见文献2.1.6 腹腔巨噬细胞吞噬功能试验小白鼠分组方法同 1.4.小白鼠连续灌喂 10d后;给每只小白鼠腹腔注射 5%(V/V)鸡红细胞(CRBC)一生理盐水悬液 0.5mL 进行免
5、疫,10h 后脱颈椎处死,腹腔内注射阿氏液 2mL,吸取腹腔巨噬细胞冲洗液,离心,弃掉上清液,取沉淀物经 GW染色,油镜观察,计算其吞噬指数和吞噬率.1.7 淋巴细胞转化试验小白鼠分组方法同 1.4.小白鼠每天注射植物血凝素(PHA)7mg/kg,共 3d;小白鼠第 1 次灌胃与注射 PHA 同一天开始进行,连续灌胃 10d,第 8 天剪鼠尾,取血推片,瑞氏染色,油镜下计数 100 个淋巴细胞中淋巴母细胞数和过渡细胞数,计算其百分率以及淋巴细胞转化率淋巴细胞转化率(%)=过渡型+转化型/未转化型+过渡型 +转化型100%J.1,8EAC 花环形成试验试验方法参见文献4, 计数 EAC 花环形成
6、数.1.9 统计方法所有数据经 t 检验方法进行统计学处理.2 结果2.1 腐植酸对迟发过敏反应的影响通过小白鼠迟发型过敏反应试验观测腐植酸对足跖肿胀厚度的影响,结果见表 1.表 1 足跖肿胀厚度统计学分析结果(S)腐植酸灌胃组 80.50.370.07对照组 80.50.180.06注:表示差异显着(P0.05).从表 1 中可以看出,腐植酸对小白鼠足跖的肿胀厚度都有明显增加.试验数据经统计学分析表明,腐植酸与空白对照组相比差异显着(P0.05).表明腐植酸能显着提高机体的细胞免疫应答能力.2.2 腐植酸对 Ea 花环形成试验的影响黑龙江畜牧兽医)2008 年第 1 期 63通过镜检计数,计
7、算每只小白鼠的活性花环形成百分率(Ea%), 经统计学分析结果见表 2.表 2Ea 花环率统计学分析结果( s)注:表示差异极显着 (P0.01).表 2 结果表明,腐植酸组与对照组相比能极显着提高小白鼠的 E 玫瑰花环率.试验数据经统计学分析表明,腐植酸组与对照组相比 Ea 花环率差异极显着.说明腐植酸具有提高机体 T 细胞的免疫活性作用.2.3 腐植酸对腹腔巨噬细胞的影响在显微镜下观察各组小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的情况,计算其吞噬指数和吞噬率,结果见表 3.表 3 腹腔巨噬细胞吞噬指数统计学分析结果(4-s)注:表示差异极显着 (P0.01).从表 3 中可以看出,腐植酸可使小白鼠腹
8、腔巨噬细胞的吞噬能力增强.腐植酸对腹腔巨噬细胞的吞噬指数,吞噬率与空白对照组相比都有非常显着地提高.试验数据经统计学分析表明,腐植酸组与对照组相比差异极显着(P0.01).2.4 腐植酸对淋巴细胞转化试验的影响通过 PHA 稀释体内诱导法观测腐植酸对淋巴细胞转化为淋巴母细胞的影响,结果见表 4.从表 4 中可以看出,腐植酸可使小白鼠淋巴细胞对 PHA 刺激的转化反应增强.腐植酸组对淋巴母细胞形成率,过渡态细胞的百分率比空白对照组都有非常显着地提高.试验数据经统计学分析表明:腐植酸组与空白对照组相比 LBC 转化率均有极显着差异(P0.01).表 4 淋巴细胞率统计学分析结果(4-s)注:表不差
9、异极显着 (P0.01).2.5 腐植酸对 EAC 花环形成试验的影响通过镜检计数测定每只小白鼠的 EAC 花环率,结果见表 5.从表 5 中可以看出,腐植酸对 EAC 花环率有明显提高.试验数据经统计学分析表明,腐植酸与空白对照组相比差异极显着(P0.01).表 5EAC 花环率统计学分析结果(s)注:表示差异极显着 (P0.01).3 讨论(1)腐植酸是褐煤,风化煤,泥煤中提取的主要成分,具有多种免疫学作用和药理作用.结构迄今尚未完全清楚.煤样在提取过程中经碱溶,酸析,烘干得到的腐植酸,可直接用于试验研究,操作过程对外界因素要求并不严格.本试验初步探讨腐植酸对动物的免疫增强作用,结果表明在
10、对免疫过程中的抗原物质摄取,细胞免疫和体液免疫各阶段均有促进作用.(2)腐植酸具有明显提高小鼠非特异性免疫和特异性免疫的作用.通过腹腔单核巨噬细胞功能测定试验,淋巴细胞转化试验,E 玫瑰花环试验,EAC 玫瑰花环试验和足跖肿胀厚度试验 5 项免疫学试验,结果表明,腐植酸能明显提高小白鼠腹腔巨噬细胞的吞噬指数和吞噬率,淋巴细胞转化率,E 玫瑰花环率及EAC 花环率,与对照组相比差异极显着(P0.01),足跖肿胀厚度试验与对照组相比差异显着(P0.05).巨噬细胞是机体非特异性免疫反应的主要细胞,也是机体免疫监视功能的重要效应细胞,巨噬细胞的吞噬指数和吞噬率等指标,能反映出巨噬细胞的生物活性.北京
11、医科大学和山西医学院的动物试验证明,HA 能加强巨噬细胞的吞噬功能,这与本试验结果一致.本试验结果也表明,腐植酸能提高机体内的 T 细胞的数量,增加淋巴细胞的转化率,能增强或促进机体的细胞免疫功能;对 Ea 花环率也有所提高,其结果与空白对照组比较 Ea 花环形成率差异极显着;对 EAC 花环率也有所提高,其结果与空白对照组比较 EAC 花环形成率差异极显着.(3)研究结果表明,腐植酸能明显提高小白鼠的免疫水平,这说明从煤样中提取的腐植酸具有良好的免疫活性和免疫药理学作用.腐植酸原料的来源十分广泛,提取方法简单,操作简便易行,可以大规模提取,这为今后腐植酸的生产和开发提供了依据.参考文献:1杜念兴.兽医免疫学 M.2 版.北京:中国农业出版社,1995:2142l6.2林清华.免疫学实验 M.武昌:武汉大学出版社,1999:210.3张雪梅,鞠玉琳 ,熊焕章.中药 CNx,fd“鼠细胞免疫水平的影响J.黑龙江畜牧兽医,2oo6(2):79.4何昭阳,胡桂学 ,王春风.动物免疫学实验技术M.长春:吉林科学技术出版社,2002:146149.5关骏良,杨海恩 .腐植酸的药用价值J.中药材,1999(8):430.(009)
