1、药物分析,第三章 药物的杂质检查,Company Logo,,Contents,特殊杂质的检查,4,Company Logo,,第一节 药物的杂质与限量,一、药物的杂质与纯度,1.纯度（Purities）药物的纯净程度,2.杂质 (Impurities) 药物中存在的无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效，甚至对人体健康有害的物质。 简言之:任何影响药品纯度的物质。,Company Logo,,第一节 药物的杂质与限量,一、药物的杂质与纯度,药物的纯度需综合考虑药物的外观性状、理化常数、杂质检查和含量测定,综合评定。,Company Logo,,3.药物纯度与试剂纯度,第一节 药物的杂质与限量,共
2、同点均规定所含杂质的种类和限量.,不同点,药物纯度从用药安全、有效和对药物稳定性等方面考虑,只有合格品和不合格品. 试剂纯度是从杂质可能引起的化学变化对使用的影响以及试剂的使用范围和使用目的加以规定,它不考虑杂质对生物体的生理作用及毒副作用.,化学试剂一般分为4个等级基准试剂、优级纯或特种试剂(光谱纯、色谱纯、农药残留检测级)、分析纯和化学纯,化学试剂不能代替药品！,Company Logo,,第一节 药物的杂质与限量,二、杂质的来源与种类,杂质的来源,生产 过程,储藏 过程,合成过程中，原料不纯或反应不完全，中间体、副产物在精制中未除尽 制剂过程 试剂、溶剂、还原剂残留 异构体、多晶体 使用
3、的金属器皿、装置、工具引入的金属杂质,在温度、湿度、日光、空气等外界条件影响下，或因微生物的作用，引起药物发生水解、氧化、分解、异构化、晶型转变、聚合、潮解和发霉等变化,Company Logo,,第一节 药物的杂质与限量,生产过程中引入杂质例子: 双氯非那胺,Company Logo,,第一节 药物的杂质与限量,贮藏过程中引入的杂质例子: 抗甲状腺药卡比马唑,Company Logo,,第一节 药物的杂质与限量,自然界分布广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质，它们含量的高低与生产工艺水平密切相关。所以也常称为信号杂质。,是指在特定的药物生产和贮藏过程中引入的杂质，也称有关物质。这
4、类杂质随药物不同则不同。,Company Logo,,三、杂质的限量(Limit Test),药物中所含杂质的最大允许量。 通常用百分之几或百万分之几 (parts per million, ppm ),注意平行原则,第一节 药物的杂质与限量,Company Logo,,第一节 药物的杂质与限量,对照法：取一定量的被检测杂质标准液和一定量供试品溶液，在相同条件下处理，比较反应结果，以确定杂质含量是否超过限量。 该法应该注意平行原则，即供试溶液和对照溶液应在完全相同的条件下反应。如加入的试剂、反应的温度、放置的时间均应相等，这样的结果才有可比性。,Company Logo,,第一节 药物的杂质与
5、限量,灵敏度法：在供试品溶液中加入一定量试剂，在一定条件下反应，不得有正反应出现。 比较法：取供试品一定量依法检查，测定特定的杂质参数，与规定的限量相比，不得更大。杂质限量计算法如下：,Company Logo,,第一节 药物的杂质与限量,注意单位统一！,Company Logo,,第一节 药物的杂质与限量,示例一 茶苯拉明中氯化物检查,取本品0.30g 置200 ml量瓶中，加水50ml、氨试液3ml和10%硝酸铵溶液6ml，置水浴上加热5min，加硝酸银试液25ml，摇匀，再置水浴上加热15min，并时时振摇，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，放置15min，滤过，取续滤液25ml置50ml纳氏
6、比色管中，加稀硝酸10ml，加水稀释至50ml，摇匀，在暗处放置5min，与标准氯化钠溶液(10g Cl-/ml)1.5 ml制成的对照液比较，求氯化物的限量。,C=10 g/ml,V=1.5 ml,S=?,Company Logo,,第一节 药物的杂质与限量,示例二 谷氨酸钠中重金属的检查：取本品1.0g，加水23ml溶解后，加醋酸盐缓冲溶液（pH3.5)2ml，依法检查，与标准铅溶液（10gPb/ml）所呈的颜色相比不得更深，已知重金属的限量为百万分之十，求算应取标准铅溶液（V）多少毫升？,Company Logo,,示例三 肾上腺素上酮体的检查,取本品0.2g,置100ml量瓶中，加盐酸
7、溶液(9-2000)溶解并稀释至刻度，摇匀，在310nm处测定吸光度不得超过0.05，酮体的百分吸收系数为435，求酮体的限量,V样品=100 ml,C酮体=?,S样品=0.2 g,第一节 药物的杂质与限量,Company Logo,,习题一 磷酸可待因中吗啡的检查,取本品0.10 g,加盐酸溶液(9-1000)使溶解成5ml，加亚硝酸钠试液2ml，放置15min，加氨试液3ml，所显颜色与吗啡试液取无水吗啡2.0mg，加盐酸溶液(9-1000)使溶解成100ml 5.0ml用同一方法制成的对照液比较，不得更深。问限量是多少？,第一节 药物的杂质与限量,Company Logo,,习题二 苯巴
8、比妥钠中重金属的检查,取本品2.0g,加水32ml，溶解后缓缓加入1mol/L盐酸溶液8ml，充分振摇，静置数分钟，滤过，取滤液20ml，加酚酞指示液1滴与氨试液恰显粉红色，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与水适量成25ml，依法检查，含重金属不得超过10ppm。试计算应取得标准铅溶液(每1ml相当于10g Pb)的体积。,第一节 药物的杂质与限量,Company Logo,,第二节 杂质的检查方法,一般有化学方法、色谱方法、光谱方法、物理方法,化学方法：显色,Company Logo,,显色反应,Company Logo,,沉淀反应,盐酸肼屈嗪中游离肼的检查:生成沉淀,Company Lo
9、go,,其它:生成气体或者滴定法,生成气体:NH3 滴定法:如 硫酸亚铁中的高铁盐检查,书上反应式有误，你们发现了吗？,碘的显色,Company Logo,,第二节 杂质的检查方法,二:色谱法是杂质检查的首选方法 1TLC法： (1)杂质对照法:取供试品溶液和一定浓度杂质对照品溶液，分别点样于同一薄层板上展开，进行斑点定位。将杂质斑点进行对应比较判断。 (2)供试品溶液自身稀释法:将一定浓度供试品溶液进行稀释并作为对照溶液，然后与供试品溶液在同一板上展开比较。 (3)杂质对照品与供试品溶液自身稀释对照并用法。 (4)对照药物法:采用与供试品相同药物作为对照，比较斑点、颜色。并进行对比控制。,以
10、后常用术语，要知道操作方法,Company Logo,,第二节 杂质的检查方法,HPLC色谱法，注意计算方法，外标法，加校正因子的计算方法。,s：已知药物对照品； R：已知杂质对照品； X：未知杂质 S：另一已知药物,Company Logo,,气相色谱法,气相色谱法：挥发性杂质的检测 计算方法：标准溶液加入法,光谱法:看书,Company Logo,,第二节 一般杂质的检查方法,(四)热分析法（Thermal analysis） 测定物质的物理化学性质与温度关系的仪器分析方法。,热重分析法(Thermogravimetric Analysis,TGA),差热分析法(Differential
11、Thermal Analysis,DTA),差示扫描量热法 (Differential Scanning Calorimetry,DSC),Company Logo,,第二节 一般杂质的检查方法,1.热重分析法 (TGA),应用热天平在程序控温的条件下测量物质的质量随温度变化的热分析技术,可计算出样品在相应温度范围内减失质量的百分率.,Company Logo,,特 点,分析样品用量少, 适用于贵重药材或在空气中容易氧化药物干燥失重测定. 灵敏度高,可达1 g以下测定速度快可用于判断结晶水或吸附水,并推断结晶水含量.,Company Logo,,第二节 一般杂质的检查方法,2.差热分析法 (D
12、TA),在程序控制温度下，测量供试品和惰性参比物(常用石英砂、煅制MgO)之间的温度差与温度(或时间) 关系的热分析技术,Company Logo,,DTA用途(1) 熔点测定,Company Logo,,(2) 定性和纯度检定根据峰的数目、形状、位置对供试品进行纯度判别,Company Logo,,草酸钙(CaC2O4H2O)的热重曲线,Company Logo,,盐酸多巴酚丁胺的DTA-TGA曲线,Company Logo,,3.差示扫描量热法 (DSC),第二节 一般杂质的检查方法,测量保持供试品和惰性参比物的温度相同, 系统所需输给供试品或参比物的能量差随温度(或时间)变化的热分析技术
13、.,Company Logo,,用于待测物质的鉴别、晶型鉴别、纯度检查以及熔点和水分等的测定，更适合于测量物质在物理变化或化学变化中焓的变化。,Company Logo,,不同纯度苯甲酸的DSC曲线,低共熔杂质,Company Logo,,应用热分析法检查药物纯度的条件 样品纯度在98.0%以上 杂质不与主成分反应 杂质不与主成分形成共晶或固熔体 杂质与熔融试样有化学相似性 药物在熔融过程中化学性质稳定 药物如存在多晶现象则必须全部转变成某一晶型,Company Logo,,甲磺酸二氢麦角毒碱的DSC-TGA曲线,失溶剂,失水,分解,Company Logo,,第三节 一般杂质的检查方法,一、
14、氯化物检查法,供试品,稀HNO310ml,H2O,AgNO31ml,标准溶液,稀HNO310ml,H2O,AgNO31ml,暗处放置5min (避免AgCl分解),Company Logo,,二、硫酸盐检查法,第三节 一般杂质的检查方法,三、铁盐检查法,1.硫氰酸铁法 (Ch.P 和USP采用),红色,Company Logo,,第三节 一般杂质的检查方法,供试品,显色，立即与同法制成的对照溶液比较,Company Logo,,2.巯基醋酸法 (BP采用),第三节 一般杂质的检查方法,红色,Company Logo,,第三节 一般杂质的检查方法,四、重金属检查法 (Pb),Company Lo
15、go,,1.第一法 硫代乙酰胺法,第三节 一般杂质的检查方法,条件：介质：醋酸盐缓冲液 (pH 3.5) 2ml 试剂：硫代乙酰胺(CH3CSNH2) 2ml杂质对照液：PbNO3 (10g/ml)灵敏度范围： 1020 g / 27ml,黄色至棕黑色混悬液,Company Logo,,2.第二法 炽灼后的硫代乙酰胺法,第三节 一般杂质的检查方法,Company Logo,,第三节 一般杂质的检查方法,3.第三法 硫化钠法,Company Logo,,第三节 一般杂质的检查方法,五、砷盐检查法,(一)古蔡氏法 (Gutzeit),溴化汞试纸,Company Logo,,第三节 一般杂质的检查方
16、法,古蔡氏法检砷器,8cm,有孔玻璃旋塞,导气管,AsH3发生瓶,溴化汞试纸,醋酸铅棉花 (60mg),HCl Zn 粒 碘化钾试液 酸性氯化亚锡试液,生成砷斑,吸收硫化氢气体,Company Logo,,注意事项,砷斑不稳定，应干燥、避光、立即比较。有机结合态的砷应破坏后检查（加酸或碱），但温度应低于600C。供试品若为铁盐，能消耗碘化钾和氯化亚锡，可加酸性氯化亚锡，使高铁离子还原后检查。 供试品（硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐）若在酸性条件下生成硫化氢或二氧化硫，与溴化汞试纸作用生成黑色硫化汞和金属汞，可先用硝酸处理，使其氧化为硫酸盐。 锑盐含量较多时，可改用白田道夫（Bettendorff
17、）法检查砷,第三节 一般杂质的检查方法,Company Logo,,(二)二乙基二硫代氨基甲酸银法 Ag(DDC)法,第三节 一般杂质的检查方法,红色胶态银,目视比色法,510nm 测定A值,Company Logo,,线性范围：110 g/40ml 含锑药物不干扰测定 用于砷盐的限量检查和微量砷盐的含量测定,书中没有D,第三节 一般杂质的检查方法,Company Logo,,（三）白田道夫法,2As3+ + 3SnCl2 + 6HCl 2As,+ 3SnCl4 + 6H+,避免锑盐还原为锑化氢，产生灰色锑斑，干扰砷斑的检出。,此法的反应灵敏度以As2O3计为20g。少量氯化汞的加入， 能提高
18、反应灵敏度达20 g /10ml。,Company Logo,,(四)次磷酸法,第三节 一般杂质的检查方法,1) 用于硫化物、亚硫酸盐以及含锑药物的砷盐检查，不产生干扰。 2）灵敏度较古蔡法低。,Company Logo,,第三节 一般杂质的检查方法,六、干燥失重法 干燥失重：药品在规定的条件下，经干燥后所减失的量。用于检查药物中的水分及其他挥发性物质。 恒重：供试品连续两次干燥或炽灼后称重的差异在0.3mg以下。 （干燥至恒重的第二次及以后每次称重都应在规定的条件下继续干燥1h后进行）,Company Logo,,七、水分测定法,第三节 一般杂质的检查方法,A供试品消耗的Fisher试液的体
19、积 B空白消耗的Fisher试液的体积 F每1mlFisher试剂相当于水的重量(mg) W供试品的重量,Company Logo,,第三节 一般杂质的检查方法,催化剂,硫酸酐吡啶，不稳定,氢碘酸吡啶,甲基硫酸氢吡啶，稳定,Company Logo,,指示终点方法： Fisher试液颜色淡黄色红棕色 永停法(以后讲）,第三节 一般杂质的检查方法,催化剂,忘记加甲醇了，起稳定作用,Company Logo,,八、炽灼残渣 (Residue on ignition)系指有机药物经炭化或挥发性无机药物加热分解后，高温炽灼所产生的非挥发性无机杂质的硫酸盐。,0.1%0.2%,12 mg,第三节 一般杂
20、质的检查方法,Company Logo,,第三节 一般杂质的检查方法,残留溶剂：在合成原料药，辅料或制剂生产的过程中使用的，但在工艺中未能完全除去的有机溶剂。,九、易炭化物检查法,十、残留溶剂法,Company Logo,,第三节 一般杂质的检查方法,色谱系统与系统适用性试验 (System Suitability Tests; SSTs) 以直径为0.25-0.18mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作为固定相，柱温为80-170；并符合下列条件：用待测物的色谱峰计算的N应大于1000；内标物与待测物的两个色谱峰的R1.5；每个标准溶液进样5次，所得待测物与内标物峰面积之比的RSD5%
21、；若以外标法测定，所得待测物峰面积的RSD10%,Company Logo,,进行有机溶剂限度测定时，根据残留溶剂的限度规定来确定对照品溶液的浓度； 进行定量测定时，应根据供试品中实际残留溶剂的实际残留量确定对照品溶液的浓度。 对照品溶液的色谱峰面积与供试品溶液中对应的残留溶剂的色谱峰面积以不超过2倍为宜。,第三节 一般杂质的检查方法,Company Logo,,Company Logo,,第三节 一般杂质的检查方法,十一、溶液颜色检查法 药物的颜色是否正常可以反映药物的纯度 十二、溶液澄清度检查法 是检查药品溶液的混浊程度，可以反映药物溶液中微量不溶性杂质的存在情况，在一定程度上可以反映药品的质量和生产工艺水平，是控制注射用原料药纯度的重要指标。 原理：光的散射 方法：供试品溶液与浊度标准液对照。,Company Logo,,第四节 特殊杂质的检查鉴定方法,方法过于复杂，请看书了解,拜托了,检查方法:光学异构体检查以考察稳定性,鉴定方法:1、合成杂质，再用LC/MS鉴定 2、制备色谱进行分离、制备，再用波谱进行鉴定,
