1、非那雄胺颗粒在健康人体的生物等效性研究实验研究非那雄胺颗粒在健康人体的生物等效性研究郝光涛,单婷婷,高洪志,李海燕,杜娜娜 2 刘泽源(1 军事医学科学院附属医院临床药理室,北京,i00071;2 蚌埠医学院,蚌埠,233000)摘要目的:研究 2 种非那雄胺制剂在健康人体的生物等效性 .方法: 采用双周期自身交叉随机试验设计,22 名健康男性志愿者单剂量口服非那雄胺颗粒(试验制剂)或非那雄胺片(参比制剂)5mg,分别于给药前及给药后 0.25,0.5,1,1.5,2,3,4,6,8,l2,24,36,48h 采集血样,血浆样品采用高效液相色谱一质谱一质谱测定 ,计算两者的药物动力学参数,进行
2、生物等效性评价.结果:非那雄胺血药浓度在 1100gg?L 范围内线性关系良好(r=0.9981),最低定量浓度为 1g?L.,日内及日间 RSDl5%;服用试验制剂或参比制剂后血浆中非那雄胺的 cm.分别为(39.366.18)和(43.86l1.95)g?L.;t分别为(2.02O.70) 和(1.82 0.85)h;tl2 分别为(7.353.8O) 和(6.672.75)h;AUC分别为(398.9217O.92)和(389.41160.55)gg?h?L;AUC 分别(367.84137.08)和(367.65155.40)gg?h?L.;试验制剂非那雄胺的相对生物利用度.,分别为(
3、105.1729.84)%和(106.35 29.48)%.结论: 试验制剂和参比制剂具有生物等效性.关键词非那雄胺;高效液相色谱.质谱一质谱;生物等效性中图分类号:R969.1 文献标识码:A 文章编号:16728157(2009)05027004BioequivalentAssessmentofFinasterideGranulesinChineseHealthyVolunteersHAOGuang.tao,SHANTing.ring,GAOHongzhi,LIHai.yan,DUNana,LIUZeyuanDepartmenfofCli“icalPharmacology,Affiliat
4、edHospitalofAcademyofMilitaryMedicalSciences,Beijing,100071,“2BengbuMedicalCollege,Bengbu,233000)ABSTRACTObjective:Toevaluatethebioequivalenceoffinasteridegranulesandtablets.Methods:Asingleoraldoseoffinasteridewasgivenrespectivelyto22malehealthyvolunteersinarandomizedself-crossoverprogramwithdoublec
5、ycletostudyitspharmacokinetics.ThesampleswereanalyzedbyHPLCMS/MS.Thepharmacokineticparametersandbioequivalenceoftwopreparationswerecalculated.Results:Thelinearrangeoffinasterideinplasmawasfrom1to100PgL.O.9981)andthelimitofdetectionwas1ggL 一.whileRSDofintra dayandinter-daywerealllessthan15%.Themainph
6、armacokineticparametersoffinasteridegranulesandfinasteridetabletswereasfollows:Cm(39.366.18)and(43.8611.95)PgL;tm(2.020.70)and(1.820.85)h;t1/2(7.353.80)and(6.672.75)h;AUC0.(398.92170.92)and(389.41160.55)ggh?L;AUCo 一,(367.84137.08)and(367.65155.40)g?hL;F0 一 andF0 一oftestpreparationwere(105.1729.84)%a
7、nd(106.3529.48)%.Conclusion:Thefinasteridegranulesisbioequivalenttofinasteridetablets.KEYWORDSFinasteride;HPLCMS/MS;Bioequiva1ence非那雄胺是 4 一氮杂甾类系列中第一个批准上市的良性前列腺增生(BPH)治疗药物,是一种强效,特异性的 50【.还原酶选择性抑制剂,通过抑制 5c【.还原酶,阻止睾酮向双氢睾酮(DHT) 转化,使血浆和前列腺 DHT 水平下降,而睾酮水平略有升高但仍保持在正常生理范围内,此外,它与雄激素受体无亲和力,对促性腺激素如 LH 和 FSH 作用
8、较弱,对性功能的影响较小,是目前临床治疗 BPH 的首选药.本文研究山东新时代药业有限公司研制的非那雄胺颗粒与杭州默沙东公司生产的非那雄胺片的药代动力学特征,评价两者的生物等效性,为临床合理用药提供理论依据.1 材料与方法1.1 药品与试剂试验制剂:非那雄胺颗粒(山东新时代药业有限【作者简介】郝光涛,男,药师,主要从事临床药理学研究.Tel:(010)66947269通讯作者:刘泽源,男,主任医师,主要从事临床药理学研究 .Tel:(010)66947251270ChineseJournalofDrugApplicationandMonitoring2009Vo1.6No.5实验研究公司,规格
9、:每袋 5mg,批号:080109);参比制剂:非那雄胺片(杭州默沙东制药公司,规格:每片 5mg,批号 272709);非那雄胺对照品(山东新时代药业有限公司);内标:地西泮对照品(中国药品生物制品检定所,纯度 99.0%,批号 12309601);甲醇,乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯;空白人血浆由军事医学科学院附属医院血液科提供.1.2 试验仪器API3000 型三重四极杆串联质谱仪,配有电喷雾离子化源以及 Analyst1.4.2 数据处理软件(美国AppliedBiosystems 公司);Agilentl200 高效液相色谱系统,包括四元输液泵,自动进样器,切换阀(美国Agilen
10、t 公司).1.3 受试对象男性健康成年志愿者 22 名,平均年龄(35.84-3.4)a,身高(1.694-0.06)1TI,体重(62.44-6.1),体重指数(21.94-1.3)kg?m .血常规,尿常规,肝功能,肾功能,血压,心电图及胸透等检查未发现异常.受试前两周及试验期间不服用任何其他药物.本试验经军事医学科学院附属医院医学伦理委员会审查批准.试验前本课题负责人向受试者说明试验目的,药物特性,临床应用及主要不良反应等,由本人签署知情同意书,并于试验前 1d 住院.1.4 试验方案和血样采集本试验采用双周期自身交叉试验设计,单剂量口服给药,22 名受试者按随机数字分为 A,B 两组
11、,各组受试者于禁食 12h 后分别服用山东新时代药业有限公司研制的非那雄胺颗粒与杭州默沙东公司生产的非那雄胺片,服用剂量为 5mg,空腹用 200mL 温开水送服,服药后 2h 方可再饮水,4h 后统一进食低脂膳食.两次用药间隔 7d.受试者分别于给药前及给药后 0.25,0.5,1,1.5,2,3,4,6,8,12,24,36,48h 采集上肢静脉血约 5mL 置于事先加好肝素的抗凝管中.血液标本于常温下静置约 0.5h 后,以 3000r?min.离心 10min,分离上层血浆约 2mL,分两管冻存,于一 20保存备用.1.5 分析方法 IJ-Zl1.5.1 色谱条件色谱柱:Agilent
12、CIR 柱(2.1lnm150mm,3pm);流动相:甲醇.2mmol?L.乙酸铵(含0.1%甲酸水溶液)=80:20;流速 :0_3mL?min;柱温:20qC;进样量:2.5.1.5.2 质谱条件离子源:离子喷雾离子化源;离子喷射电压:4500V;温度:400;源内气体 1(N,)压力:10psi;源内气体 2(N2)压力:7psi;气帘气体(N2)压力:8psi;正离子方式检测;扫描方式:选择多离子反应监测(MRM)方式;非那雄胺和地西泮的碰撞电压分别为 42V 和 45V;碰撞气(N:)压力:中等;用于定量分析的离子反应分别为 m/z373.4 一/z305.4(非那雄胺)和 m/z2
13、85 一,/z193(地西泮).1.5.3 血浆样品处理精密量取 500 此血浆样品,置具塞玻璃试管中,依次加入 50 内标溶液(100g?L 地西泮溶液),50 甲醇溶液 ,50txL0.1mol?L.NaOH,混合均匀 ,再加入 3mL 萃取液( 正己烷.异丙醇=8O:20),充分涡旋混合 3rain,2500r?rain 离心 5min,取上清液于另一试管中,水浴 40氮气挥干,120I.tL 流动相复溶,进样 2.5pL 进行 LCMS/MS分析.1.6 数据处理根据血药浓度.时间曲线末端血药浓度点,以 lnC对 f 进行回归,求得消除速率常数 k.,f./=0.693/ke;cm,为
14、试验的实测值,以梯形面积法计算 AUC.,AUC.=AUC.一+(,为最后一次可检测血药浓度的采样时间;Ct 为末次可测定样本的药物浓度);CL/F=D/AUC(D 为给药剂量);Vd/F=CL/F/. 经对数转换后进行方差分析及在 0【:0.05 水平上进行双单侧f 检验, 对 fm 进行非参数检验 ,对两种制剂的生物等效性进行评价.2 结果2.1 方法专属性考察按“1.5-3 血浆样品处理 “项下方法分析空白血浆样品,加入非那雄胺标准溶液和内标地西泮溶液的血浆样品,受试者给药后收集的血浆样品.结果表明,空白血浆中的内源性物质不干扰非那雄胺和地西泮的测定.2.2 标准曲线与线性范围取空白血浆
15、 500,依次加入非那雄胺标准系列溶液 50 和内标 50,配制成相当于血浆浓度为 1,2,5,l0,20,50 和 100Pg?L 的血浆样品,每点为5 样本,按“血浆样品处理 “项下操作,取 2.5pL 进行LC.MS/MS 分析 ,记录色谱图 .以血浆中待测物浓度为横坐标,待测物与内标物的峰面积比值为纵坐标,用加权(W=1/X)最小二乘法进行回归运算【3,求得直线回归方程,即为标准曲线:Y=0.054+0.0003(r=0.9981).结果表明:非那雄胺在 1100 岭?L内线性关系良好,定量下限为 1lag?L.中国药物应用与监测 2009 年第 6 卷第 5 期/l实验研究:0.10
16、00O5000O.O2.0e4O24tminAI4.2324f/m1nBI4.23I.0e4O.OO24tminII3.62UU24f/mln1.00e4O24f/m1n2424t/min/mi11I)图 1 典型的 HPLCMS/MS 色谱图A 一空白血浆;B 一空白血浆中加入非那雄胺(1gg-L)和地西泮(100g?L);C 一空白血浆中加入非那雄胺(10Pg?L.)和地西泮(100g?L.);D 1 号受试者第一周期服用非那雄胺 1h 后的血浆样品I 一非那雄胺;II 一地西泮 (内标)Fig1picalchromatogramsbyHPLC-MS/MSAblankplasma;Bbla
17、nkplasmaspikedwithfinasteride(1lag?L)anddiazepam(100gg?L);Cblankplasmaspikedwithfinasteride(10Pg?L-t)anddiazepam(100PgL.);DahealthypersonSplasmasample1hafteroraladministrationIfinasteride;1IdiazepamfIS2.3 精密度与准确度试验按“ 血浆样品处理“ 项下操作 ,制备非那雄胺低,中,高 3 个浓度(分别为 2,l0,50gg?L.)的质量控制(Qc)样品,每一浓度进行 6 样本分析,连续测 3d,共
18、 3 批,根据当批的标准曲线,计算 QC 样品的测得浓度,根据 QC 样品结果计算本法的准确度与精密度.取空白血浆 500pL,依次加入非那雄胺标准系列溶液 50 和内标 50,配制成相当于血浆浓度为 2,10,50g?L 的血浆样品,每点为 3 样本,按“血浆样品处理“项下操作 ,取 2.5 进行 Lc.MS/MS 分析,272记录色谱图.以每一浓度两种处理方法的峰面积比值计算相对回收率,低,中,高 3 个浓度的相对回收率结果见表 1.表 1 血浆中非那雄胺的精密度与回收率.n=6Tab1Intradayandinter-dayprecisionandrecoveryrateoffinast
19、erideinhumanplasma.n=62.4 稳定性考察按“ 血浆样品处理“ 项制备低 ,中,高(2,10,50g?L)3 个浓度的质控样品, 每个浓度进行 3 样本分析,将质控样品室温放置 4h,一 20下反复冻融 3次,一 2O下冻存一个月及检测样品室温放置 6h 条件下,测定样品浓度.结果表明,非那雄胺在上述条件下稳定性均良好.2.5 质量控制以低,中,高 3 种浓度含非那雄胺的血浆质控样品与每个分析批的待测样品同时测定,质控样品浓度为 2g?时,测定结果相对偏差小于 20%,10,50g?L.时测定结果相对偏差小于 15%.2.6 平均血药浓度.时间曲线22 名受试者口服试验制剂
20、或参比制剂后的平均血药浓度.时间曲线见图 2.51)454()3jI)22()15105()图 2 受试者单剂量口服试验或参比非那雄胺制剂平均血药浓度一时间曲线十一试验制剂;_|-r_ 一参比制剂Fig2Meanplasmaconcentrationtimecurvesafterasingleoraladministrationoftwofinasteridepreparations一testpreparation;1-一 referencepreparation2.7 药动学参数受试者单次口服试验及参比制剂后的主要药代动力学参数见表 2.ChineseJournalofDrugApplica
21、tionandMonitoring2009Vo1.6No.5L63nIn2/I实验研究表 2 受试者口服非那雄胺后的药代动力学参数.,l=22,Tab2Pharmacokineticparametersoftwofinasterideprepar-ationsafteroraladministration.=22.2.8 生物等效性评价与参比制剂比较,试验制剂的相对生物利用度分别为(105.1729.84)% 和(106.35 29.48)%.试验制剂和参比制剂的 AUC,AUC 及 C 经对数转换后进行方差分析及双单侧 t 检验,对 t 进行非参数法检验,结果表明:两种制剂在处方与周期间无显
22、着性差异(P0.05o 受试制剂中非那雄胺 AUC 的 90%置信区间在参比制剂的 91.09%111.87%,AUC 的 90%置信区间在参比制剂的91.69%113.84%,Cm 的 90%置信区间在参比制剂的 86.30%96.21%,tm 由实验数据得检验统计量为,十算 =0.9699,uoo5=1.96,Uool 一 2.58,受试制剂的U 计算Uoo5,U 计算Uo 所以判定受试制剂和参比制剂具有生物等效性.2.9 安全性评价本研究中未出现与试验相关的严重不良事件,没有受试者因为出现不良事件而退出本研究.3 讨论本研究非那雄胺血药浓度采用 HPLCMS/MS 测定,最低定量浓度为 1?L 一,在 1100L 范围内线性关系良好(r=0.9981),每个样品分析时间仅
