1、21三体综合征产前诊断,临床（定向）1班 付霈文 201210130101,2,案例1：张某，女，31岁，商场收银员，怀孕15周，担心所孕胎儿不正常前来进行遗传咨询。经询问得知，张某的一表姐曾生育一智力低下儿子，经某医院诊断为先天愚型，但具体核型不详。张某孕前检查各项优生指标均正常，孕期无感冒服药史，无有毒有害物质接触史。张某的丈夫，32岁，司机，有烟酒嗜好，在妻子怀孕前半年已戒酒，减少吸烟量。两人核型检查正常，家族中无其他特殊疾病患者。根据张某的情况，作中孕期唐氏筛查，结果张某血清的AFP,hCG和uE3检查结果阳性，再行B超检查胎儿情况，证实胎儿胎龄正确，发育正常。根据上述资料，张某所孕胎
2、儿具有21三体的高风险，建议进行产前诊断。,实验原理 羊水中有一定数量胎儿脱落细胞，通过羊膜穿刺获取羊水中胎儿细胞，经体外培养后通过G显带实验进行核型分析，判断染色体是否畸形，诊断是否畸形，诊断是否患有21三体综合征。,G显带技术：指以Giemsa染料染色后，使染色体显带的技术。Giemsa染料是有噻嗪和曙红组成的，着色时DNA先于2个噻嗪分子结合，然后再与一个曙红分子结合，形成沉淀物，而DNA的某些部位对染料不敏感，由此形成明暗相间的条带。,实验材料，试剂及器材 （1）器材:离心管，离心机，天平，37温箱，载玻片，盖玻片，恒温水浴锅，光学显微镜，标本板，玻璃铅笔，定时钟，染色缸，直柄虹膜镊，
3、滴管。 （2）药品：pH6.8PBS,Giemsa,0.025%胰蛋白酶（取0.9%氯化钠100ml，加0.25%胰蛋白酶1ml）.,实验步骤取材体外细胞培养制片显带核型分析,取材1 腹部备皮，排光膀胱，平卧位常规消毒后铺无菌洞巾。 2 麻醉，一般不必需要，精神紧张者或可用普鲁卡因或利多卡因麻醉。,取材 3 选择穿刺部位，经B超胎盘定位后避开胎盘。中期妊娠时，一般选择在耻骨联合上3横指相当于子宫下段处，于腹中线或左右侧旁，扪及囊样感的部位做穿刺。 晚期妊娠时，先扪清胎先露，然后上推先露部，在先露部下方穿刺；也可在胎儿颈背部空隙处或胎儿肢体侧空隙处穿刺。,确定穿刺部位后，以2021号腰椎穿刺针垂
4、直刺入腹壁，通过腹壁及宫壁两侧阻力，当有落空感时即进入羊膜腔，抽出芯针，见羊水溢出，接上注射器，顺利抽的清亮羊水，再次证实在羊膜腔内后，可注射药物。如欲做羊水检查，则抽取羊水20ml立即送检。 5 穿刺完毕后拔出穿刺针，局部压迫5分钟，穿刺部位敷以无菌纱布，胶布固定。,细胞体外培养 无菌超净台上将羊水注入50ml无菌离心管内，1500r/min，常温离心10min,移去上清，留约0。5ml上清液，枪尖混匀，分装吸取至3个60mm培养皿，每皿添加4ml羊水完全培养基，37摄氏度5%CO2培养箱中培养6-7d,制片培养6-7d后，倒置显微镜下观察细胞生长情况，有若干梭形型细胞克隆生长，每个克隆细胞
5、状态较好且形成细胞岛，更换新鲜培养液，每天观察，2-3d后，每个细胞岛已长成一个个较大克隆且细胞融合度达70%-80%，并出现数目不等的较多圆形，类圆形透亮细胞时，可进行细胞收获，收货前一天或当天更换培养液，加入秋水仙素，至浓度为0.1微克每毫升，作用4-4.5h镜下观察有大量鱼眼样，透明细胞出现时，即可收获。吸取培养上清至一新离心管加入0.25%胰酶，37摄氏度消化2min,1000r/min离心10min,弃上清，加入0.075mol/LKCL低渗液，37摄氏度12-13min用3:1甲醇、冰醋酸预固定和固定后，滴片，常规G显带。,显带 将只好的染色体标本，置72摄氏度-75摄氏度烤箱中烤
6、片3h。 放入预温至37摄氏度的0.025%胰酶溶液中（pH=7.27.4）消化1min左右，每次的作用时间并不完全相同，颗先试一张片子，再根据现在效果调整胰酶的作用时间,在Giemsa染液中染色10min,自来水冲洗干净，晾干后，即可阅片 镜检;在显微镜高倍目镜下检查显带标本，在染色体上若出现清晰的深浅相间的带型，即可取标本，可供摄像分析,标准型 占患者总数的92.5%，患儿体细胞染色体有47条，有一条额外的21号染色体，核型为47，XX（XY），+21。其机制为亲代（多为母亲）的生殖细胞在减数分裂是染色体不分离,此外还有嵌合型，核型为46，XX(XY)/47，XX(XY),+21，患儿的智商较其他两型高，临床并发症的发生率液相对较少,易位型 最常见为D/G易位，D组中以14号染色体为主，核型为46，XX（XY）,-14,+t(14q:21q)，少数为发生着丝粒融合，形成等臂染色体，15号染色体。另一种为G/G易位，是由于G组中两个21号染色体，核型为46，XX(XY)，-21，+t(21q;21q),
