1、第六章 芳酸类非甾体抗炎 药物的分析,本类药物为不含甾体骨架的抗炎药，是 使用最多的药物种类之一。多数具有芳酸基本结构，即芳基取代羧酸结构 分类：（芳基的取代位置及芳基上的取代基）水杨酸类（邻羟基苯甲酸）邻氨基苯甲酸邻氨基苯乙酸芳基丙酸吲哚乙酸苯骈噻嗪甲酸,结构特点：芳酸类非甾体抗炎药物分子结构中，既具有苯环，又有羧基，或另有取代基。分析依据：说明：对乙酰氨基酚、尼美舒利不属于本类药物,第一节 典型药物的结构与性质 一、典型药物及结构特点水杨酸类,二氟尼柳,邻氨基苯甲酸类,甲酚那酸,邻氨基苯乙酸类,双氯芬酸钠,芳基丙酸类,布洛芬,酮洛芬,萘普生,吲哚乙酸类,吲哚美辛,苯骈噻嗪甲酸类,吡罗昔康,
2、其他非甾体抗炎药,对乙酰氨基酚,结构特点,可呈游离状态 水杨酸 、阿司匹林 具有羧基 可呈盐或呈酯 双氯芬酸钠可呈酰胺结构 吡罗昔康 具有苯环 有不同的结构特征 有硫、氯、氟等元素，也可作为鉴别的依据,（一）酸性具游离羧基显酸性，酸性受苯环、羧基和取代基的相互影响,CH3、NH2等斥电子取代基存在使酸性减弱,X、NO2、OH等吸电子取代基存在使酸性增强,邻位取代酸性间位、对位取代酸性。例：水杨酸邻位游离羟基与羧基形成分子内氢健，酸性大为增强,二、主要理化性质,（二）水解性具有酯键：阿司匹林、双水杨酯具有酰胺键：吲哚美辛、吡罗昔康、对乙酰氨基酚 利用其水解得到酸和醇的性质可进行鉴别 利用酯水解定
3、量消耗氢氧化钠的性质，可用水解后剩余滴定法测定含量 芳酸类药物还应检查因水解而引入的特殊杂质,（三）具有紫外和红外吸收 （四）基团或元素特性,第二节 鉴别试验 一、与三氯化铁反应,具酚羟基或水解后能产生酚羟基的药物,特点： （1）反应适宜的pH值为46 （2）反应极为灵敏 （3）各反应的方法,1、水杨酸反应,2、酚羟基反应对乙酰氨基酚 水溶液 蓝紫色吡罗昔康 三氯甲烷溶液 玫瑰红色美洛昔康 三氯甲烷溶液 淡紫红色,二、缩合反应酮洛芬,具有二苯甲酮结构，酸性条件下与二硝基苯肼缩合生成橙色偶氮化合物,三、重氮化偶合反应,临用新配,分子结构中具芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物,注意：在鉴别时，首先要使溶
4、液成酸性，然后才能滴加亚硝酸钠试液及碱性一萘酚试剂。,对乙酰氨基酚的鉴别（间接）,四、氧化反应甲芬那酸 显深蓝色，随即变为棕绿色,硫酸溶液,重铬酸钾,吲哚美辛,硫酸共存，与重铬酸钾共热，显紫色,盐酸溶液中，与亚硝酸钠溶液反应显绿色，渐变黄色,五、水解反应阿司匹林,六、特征元素的反应1、氯元素的鉴别含氯药物经过前处理，显氯化物的鉴别反应 2、硫元素的鉴别美洛昔康中含有二价硫，分解产生硫化氢，遇醋酸铅生成硫化氢黑色沉淀,七.紫外吸收和红外吸收光谱法利用药物所具有的紫外和红外吸收特征，来进行鉴别。,紫外： 1、最大吸收波长法：如双氯芬酸钠的水溶液在276nm有最大吸收 2、最大与最小吸收波长法： 布
5、洛芬 3、吸光度法： 甲芬那酸 4、吸收度比值法： 二氟尼柳,八、色谱法薄层色谱法高效液相法,第三节 特殊杂质的检查 一.阿司匹林中特殊杂质的检查 （一）合成工艺,（二）检查 1.游离水杨酸 目的：乙酰化不完全或水解产生对人体有毒性的水杨酸，结构中酚羟基易被氧化，生成有色的醌型物质，使药物成品变色 原理： 05年版药典：水杨酸结构中有游离的酚羟基，在酸性的条件下与高铁盐反应生成紫堇色（可以检出1g的水杨酸） 10年版药典：反相法，为防止阿司匹林水解，用1%冰醋酸甲醇溶液制备供试品，外标法计算,限量要求原料药：0.1%阿司匹林片：0.3%阿司匹林肠溶片：1.5%阿司匹林肠溶胶囊：1.0%阿司匹林
6、泡腾片：3.0%阿司匹林栓剂：3.0%,2.有关物质 未反应完全的酚类 水杨酸精制时温度过高产生脱羧副反应的苯酚 合成工艺过程中由副反应生成的醋酸苯酯、水杨酸苯酯和乙酰水杨酸苯酯等 10年版药典：反相色谱法，采用不加校正因子的主成分自身对照法，所有杂质峰（要扣除水杨酸峰）之和不得大于对照液主成分峰面积 05年版药典：以“溶液澄清度”检查碳酸钠试液中不溶物（利用杂质和药物溶解行为的差异）,双水杨酯中游离水杨酸的检查：水杨酸与三价铁生成有色配位化合物，在530nm下测定 原料限度：0.5%片剂限度：1.5%,二、甲芬那酸中2,3二甲基苯胺的检查2,3二甲基苯胺毒性大，会引起高铁血红蛋白血症，并对中
7、枢神经系统及肝脏有损伤中国药典采用两种方法检查：HPLC：检查有关物质，单一杂质限量为0.1%，杂质总量限量为0.5%GC：检查2,3二甲基苯胺，限量为0.01%,HPLC：检查有关物质 对照品： 5g/ml； 供试品：1mg/ml 柱效：以甲酚那酸计不低于2000 分析时间：甲酚那酸保留时间的2.5倍 检查方法：（1）供试品谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照品主峰面积的1/5(2)供试品谱图中如有杂质峰，,三、二氟尼柳中有关杂质检查 （一）合成工艺2,4-二氟苯甲酰氯 二氟尼柳间苯二胺盐酸盐 二氟尼柳2,4-二氟苯胺 二氟尼柳等,氟代、氢化、偶合等,氮化、氟代、偶合等,偶合、乙酰化
8、、氧化、水解、羧化,（二）有关物质检查 中国药典 采用TLC(正相)和HPLC (反相)检查 检查方法：自身对照法 1、有关物质A的检查 TLC供试品溶液：10mg/ml,甲醇溶剂对照品溶液：5g/ml；甲醇溶剂点样量：5 l检查方法：供试品如显杂质斑点，和对照品主斑点比较，不得更深,2、有关物质BHPLC 柱效：以二氟尼柳计，不低于2000 固定相：C18 流动相：水-甲醇-乙腈-冰醋酸 检测波长：254nm 对照品及供试品：同有关物质A检查 分析时间：主成分保留时间的3倍 检查方法：供试品溶液谱图中如有杂质峰，,四、对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查用对硝基氯苯、苯酚、硝基苯作原料，但都以对氨基
9、苯酚为主要中间体制备对乙酰氨基酚。 主要杂质：中间体、副产物及分解产物。例如：对氨基酚、对氯乙酰苯胺、O-乙酰基对乙酰氨基酚、偶氮苯、氧化偶氮苯、苯醌和醌亚胺等,检查方法：采用HPLC法测定由于对氯苯乙酰胺极性较小，要单独测定 1、对氨基酚及有关物质 C8柱，磷酸盐-甲醇为流动相，245nm为检测波长 分离时间为主成分峰保留的4倍 对氨基酚用外标法计算，限量0.005% 杂质总限量为0.5%，单个杂质峰面积不得大于对照品主峰面积的0.1% 2、对氯苯乙酰胺检查方法相同，提高甲醇的比例对氯苯乙酰胺用外标法计算，限量0.005%,05年版药典 对氯苯乙酰胺：TLC法，杂质对照品法 对氨基酚 对照法
10、,药物主成分对乙酰氨基酚无此呈色反应,第四节 含量测定 一、酸碱滴定法 （一）直接滴定法原理：利用药物中游离羧基的酸性，采用碱滴定液直接滴定。例：阿司匹林原料药的含量测定,测定方法及计算 反应摩尔比为11,阿司匹林 ChP取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml，溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）滴定。每lml的氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）相当于18.02mg的C9H8O4。,碱性区变色,用中性乙醇溶液作溶剂溶解阿司匹林且防止酯键水解。 “中性乙醇”是对中和法所用的指示剂而言，否则会使测定结果偏高,优点：简便、快速,缺点：酯键水解干
11、扰（不断搅拌、快速滴定）酸性杂质干扰（如水杨酸超限时）,适用范围：不能用于含水杨酸过高或制剂分析，只能用于合格原料药的含量测定,温度对滴定结果影响不大,讨论：,水杨酸、甲芬那酸、布洛芬、二氟尼柳、双水杨酸酯等均可采用直接滴定法使用溶剂和指示剂有差异,甲醇水为溶剂，酚红指示剂,（二）剩余量滴定法美洛昔康 性质：具有羧酸性质，显一价酸性，但在甲醇、乙醇、水中极微溶或几乎不溶 测定方法：加入定量、过量 的氢氧化钠滴定液溶解供 试品，剩余的氢氧化钠滴 定液用盐酸滴定液回滴定,与羰基共轭的烯醇式羟基,（三）水解后剩余滴定法 酯的一般含量测定方法 1、水解后的剩余滴定法,例： USP（32）、JP(15)
12、收载的阿司匹林含量测定方法取本品约1.5g，精密称定,加入氢氧化钠滴定液（0.5mo1/L）50.0m1，混合，缓缓煮沸10 min，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25 mo1/L）滴定剩余的氢氧化钠，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的氢氧化钠滴定液（0.5mol/l）相当于45.04 mg的C9H8O4。,2NaOH（过量）H2SO4Na2SO42H2O,剩余滴定：,水解：,反应摩尔比为12优点：消除了酯键水解的干扰空白实验目的：碱液受热易吸收二氧化碳，生成碳酸盐，使酸消耗量减少，测定结果偏高缺点：酸性杂质干扰,计算方法：式中：V0、V分别为空白试验和样品测定时消耗硫酸滴定液的体
13、积（ml)F硫酸滴定液的浓度校正因子T氢氧化钠滴定液的滴定度,2、两步滴定法阿司匹林片和阿司匹林肠溶片 例：阿司匹林片的测定： 取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于阿司匹林0.3g），置锥形瓶中，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）溶解后，振摇使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）至溶液显粉红色，再精密加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）40m1，置水浴上加热15分钟并时时振摇，迅速放冷至室温，用硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）相当于18.02mg的C9H8O4,第一步
14、：中和： 目的：中和存在的游离酸，阿司匹林也同时成为钠盐,终点：溶液显粉红色,第二步 水解后剩余滴定,水解：,特点：反应摩尔比为11消除了酸性杂质的干扰降低了酯键水解的干扰,剩余滴定：,2NaOH（过量）H2SO4 Na2SO42H2O,片剂含量测定结果的计算 每1ml的NaOH滴定液 (0.lmol/L) 相当于18.02mg的阿司匹林（C9H8O4）。,（四）非水溶液滴定法吡罗昔康具有吡啶环，显弱碱性，采用冰醋酸做溶剂，高氯酸为滴定液测定,二、紫外分光光度法直接紫外分光光度法适用于二氟尼柳、美洛昔康、尼美舒利制剂、对乙酰氨基酚及部分制剂的含量测定二氟尼柳胶囊含量测定：对照品法,三、高效液相色谱法 HPLC法用于测量阿司匹林栓剂的含量 1.色谱条件色谱柱：C18柱（填料为十八烷基硅烷键合硅胶）流动相：乙腈：四氢呋喃：冰醋酸:水=20：5：5：70检测波长：276nm2.系统适用性理论塔板数（n）：按阿司匹林峰计应不低于3000分离度：阿司匹林、水杨酸之间的分离度（Rs)应大于1.5 3、计算方法：外标法,抑制阿司匹林的解离,
