1、染色体R显带和FISH技术 对慢性淋巴细胞白血病诊断的价值,吴蔚 顾健 汪中强 江苏省苏北人民医院 扬州市血液学研究所,前言,慢性淋巴细胞白血病（CLL）的白血病细胞有丝分裂活性低下，骨髓细胞培养大多显示正常核型，因此常规细胞遗传学（CC）R显带分析方法不能完全准确地反映核型状况。 本文探讨常规R显带和组合荧光原位杂交（FISH）技术联合诊断CLL染色体异常的意义。,对象和方法,病例,10例CLL均为2008年6月至2009年12月在苏北人民医院血液科就诊的门诊及住院患者，符合张之南主编的血液病诊断及疗效标准。 男6例，女4例，年龄5474岁，平均为61岁。 对照组为5名无恶性肿瘤病史的患者。
2、,方法,R显带技术核型分析组合FISH （北京金菩嘉医疗科技有限公司） 位点特异性探针：GLP D13S25/GLPATM/GLPRB1/GLP P53着丝粒特异性探针：CSP 12 染色体,R显带技术核型分析,在培养基中加入刺激T淋巴细胞生长的有丝分裂刺激剂PHA培养72h，按常规制备染色体分析核型。每例至少分析20个中期分裂相。核型异常按人类细胞遗传学国际命名体制ISCN（2005） 加以描述。,对照组FISH 分析,观察200个间期细胞，12号染色体发现3个杂交信号的间期细胞为+12假阳性细胞;1个或无杂交信号的间期细胞为del(13q14.3) /del(17p13.1)、del(11
3、q22.3)/del(13q14) 假阳性细胞。 以阳性细胞数 平均数+ 3x标准差作为标准。 del(13q14.3)、del(17p13.1)、del(11q22.3)、del(13q14)和+12的阳性标准分别为5%、5.2%、4.2%、8.2%和3.0%。,结 果,10例CLL患者常规R显带分析和组合FISH检测结果,图1 ：45,X,-x,3p-,17p-,图2:可见1个绿色荧光信号, P53基因缺失,病例1患者的染色体核型图及FISH图,本文发现:,异常染色体的总检出率R显带分析为20%(2例)，而组合FISH为80%(8例)。 例1 R显带核型分析为3P-和17P-，同时FISH
4、发现P53基因缺失，与R显带17号染色体短臂完全缺失相吻合。 8例R显带分析为正常核型中，FISH则检测出有6例异常，其中D13S25缺失3例，P53缺失3例，ATM缺失1例，RB1缺失2例，12号染色体三体1例。,结论,FISH技术，应用荧光染料标记探针变性后与靶DNA杂交，在荧光显微镜下观察杂交信号并记录结果。因不受中期分裂相的限制，极大提高了染色体异常检出的敏感性、准确性和可靠性。,FISH技术应用的优点,扩大可检测的细胞群体，能对非分裂细胞和终末细胞进行分析，应用位点特异性探针，采用原位杂交技术，定位至小片段基因，可以检测出R显带不能辨别的较小片段的异常，尤其CLL患者白血病细胞分裂指
5、数低，应用FISH可大大提高染色体异常的检出;同时对染色体小基因片段的异常更敏感、可靠，异常检出率更高。,FISH技术应用的不足,检出染色体异常取决于能否获得相应的探针，且一种探针只能检测出一种异常。 例6中，FISH因未有3P-、+3和+18染色体异常的相应探针，故未能检测出其异常。,本次研究,我们同时应用常规R显带和FISH技术进行分析，以期提高CLL染色体异常的检出率。 我们应用组合荧光原位杂交 (组合探针)技术同时检测多种异常基因，提高了其检出率，得到更多的遗传信息。,R显带分析仍是遗传学研究基础，可全面了解白血病细胞染色体的信息，FISH则是其重要补充，二者联合应用，可提高CLL染色体异常检出率，获得更多CLL的细胞和分子遗传信息。,谢谢,
