1、嗜酸性粒细胞直接计数 eosinophil count（EOS）,学习目标,1. 解释嗜酸粒细胞直接计数的原理 2. 分析稀释液成分与计数结果的关系 3. 阐述嗜酸粒细胞直接计数的临床意义 4. 进行嗜酸粒细胞直接计数,返回,上一页,下一页,复习前课,嗜酸粒细胞的参考值是多少？哪些情况会升高？,返回,上一页,下一页,答案： 参考值：0.5 % 5%；（0.05 0.5） 109/L 增多：（1）过敏性疾病（2）寄生虫病 （3）某些皮肤病（如湿疹）（4）某些传染病及传染病恢复期（5）某些恶性肿瘤和血液病（如Ec白血病）,嗜酸粒细胞直接计数,为什么要直接计数（目的意义）?,返回,上一页,下一页,测
2、定每升血液中嗜酸粒细胞浓度数，虽然可从白细胞浓度数和嗜酸粒细胞%的乘积得知，但由于嗜酸粒细胞所占百分率低，加之在血片上细胞分布不十分均匀误差很大，所以，在临床上需要准确了解嗜酸粒细胞的变化时，多采用直接计数法。,嗜酸粒细胞直接计数,【原理】 用嗜酸粒细胞稀释液将血液稀释一定倍数破坏其红细胞和部分其他白细胞，将嗜酸粒细胞颗粒染色，充入计数池内，计数一定体积内嗜酸粒细胞，经换算得出每升血液中嗜酸粒细胞数。,返回,上一页,下一页,嗜酸性粒细胞稀释液种类繁多，虽配方不同但作用大同小异。分为：嗜酸性粒细胞保护剂（如乙醇、丙酮、乙二醇）、嗜酸性粒细胞着色剂（如：溴甲酚紫、伊红、固绿等）破坏其他细胞和增强嗜
3、酸性粒细胞着色物质（如：碳酸钾、草酸铵）抗凝剂（如：枸橼酸钠、EDTA）防止乙醇和液体挥发剂（如甘油）,嗜酸粒细胞直接计数,【稀释液】 .乙醇-伊红稀释液0.95乙醇 30.0l 甘油 10.0l 碳酸钾 1.0 柠檬酸钠 0.5 20g/伊红 10.0ml 蒸馏水加至 100.0l,返回,上一页,下一页,嗜酸粒细胞直接计数,试剂成分的作用 1.乙醇为嗜酸粒细胞保护剂其浓度以3035较为合适。 2.甘油可防止乙醇挥发。 3.碳酸钾可促进红细胞和中性粒细胞等溶解并增加嗜酸粒细胞对染料的着色力。 4.枸椽酸三钠可防止血液凝固。 5.伊红可使嗜酸性颗粒染橘红色。,返回,上一页,下一页,嗜酸粒细胞直接
4、计数,乙醇-伊红稀释液的特点 优点：试剂稳定，视野清晰、无沉渣。在室温下可保持个月。 缺点：稀释液内含甘油，比较粘稠，细胞不易摇匀和下沉。,返回,上一页,下一页,嗜酸粒细胞直接计数,2.Hinkelman氏液伊红 0.2g 95苯酚 0.5ml 40甲醛 0.5ml 蒸馏水加至 100ml,返回,上一页,下一页,嗜酸粒细胞直接计数,【操作】 . 取稀释液0.38ml于小试管内，吸血20l，立即轻轻混合均匀待红细胞溶解。 充分混匀充入双侧计数池内。静置2min5min。 低倍镜下计数10个大方格（两侧计数池的中央和四角的大方格）内嗜酸粒细胞数。,返回,上一页,下一页,嗜酸粒细胞直接计数,.计算
5、嗜酸粒细胞数10个大方格内嗜酸粒细胞数20106注意：稀释倍数与计数域发生改变后应按实际操作换算成每升血液中的细胞数。,返回,上一页,下一页,嗜酸粒细胞直接计数,【注意事项】 .本试验应在30min内计数完毕。否则嗜酸粒细胞逐渐破坏，使结果偏低。 .血液加入稀释液中，要及时混匀，以免细胞聚集，但又不宜过分振摇,以免嗜酸粒细胞破碎。,返回,上一页,下一页,嗜酸粒细胞直接计数,【注意事项】 .住院患者作用酸粒细胞直接计数应固定时间，以免受日间生理变化的影响。 .注意与未破坏的中性粒细胞区别，中性粒细胞颗粒一般不受色或受色极浅，且其颗粒较小。 若出现嗜酸粒细胞被破坏，可适当增加乙醇的剂量。,返回,上
6、一页,下一页,嗜酸粒细胞直接计数,临床意义1.参考区间 ：0.051090.5109 嗜酸性粒细胞直接计数的生理变化：在劳动、寒冷、饥饿、精神等因素刺激下，交感神经兴奋通过下丘脑刺激垂体前叶产生促肾上腺皮质激素（ACTH），使肾上腺皮质产生肾上腺皮质激素。肾上腺皮质激素可阻止骨髓内嗜酸性粒细胞释放，并使其向组织浸润，从而使外周血中嗜酸性粒细胞减少。因此正常人嗜酸性粒细胞白天降低夜间较高，上午波动大，下午比较恒定。,返回,上一页,下一页,嗜酸粒细胞直接计数,临床应用 （1）观察急性传染病的预后。 （ 2）观察大手术和烧伤病人的预后。（3）肾上腺皮质功能和脑垂体前叶功能测定(减数试验)。,返回,上
7、一页,下一页,（1）观察急性传染病的预后,肾上腺皮质激素能提高机体的应激性，当急性传染病如伤寒等使肾上腺皮质激素分泌增加。嗜酸性粒细胞减少，恢复期嗜酸性粒细胞又逐渐增加。如果临床症状严重，嗜酸性粒细胞不减少说明肾上腺皮质功能衰竭。,（ 2）观察大手术和烧伤病人的预后,手术后4小时嗜酸性粒细胞显著减少甚至完全消失。2448小时后逐渐增多，增多速度与病性变化基本一致。 大面积烧伤病人数小时后嗜酸性粒细胞下降至零，且维持较长时间，如果手术和大面积烧伤后病人嗜酸性粒细胞不下降或持续下降，说明预后不良,（3）肾上腺皮质功能和脑垂体前叶功能测定(减数试验)。,减数试验原理,注射肾上腺素 （间接刺激）,垂体
8、前叶,释放促肾上腺皮质激素 （ACTH）,肾上腺皮质,嗜酸粒细胞减少,注射ACTH (直接刺激）,返回,上一页,下一页,释放肾上腺皮质激素,减数试验结果判断,在正常情况下，注射ACTH （促肾上腺皮质激素）或肾上腺素后，嗜酸粒细胞比注射前应减少50以上。 肾上腺皮质功能正常，但垂体前叶功能不良时，注射ACTH直接刺激后，嗜酸粒细胞下降50以上，而注射肾上腺素，间接刺激后则不下降。 垂体功能亢进时，注射ACTH和肾上腺素，都可使嗜酸粒细胞降低 80 100。 垂体前叶功能正常，肾上腺皮质功能不良时，则注射ACTH和肾上腺素后，嗜酸粒细胞下降均不到50。,返回,上一页,下一页,减数试验结果判断,注
9、射促肾上腺皮质激素ACTH 注射肾上腺素（Adrendin）（直接刺激） （间接刺激） 1.正常 下降50% 下降50% 2.垂体功能亢进 下降80%100% 下降80%100%3.垂体功能正常 下降50% 下降50% 肾上腺皮质功能不良4.垂体功能不良 下降50% 不下降 肾上腺皮质功能正常,返回,上一页,下一页,总结,嗜酸粒细胞直接计数的目的是准确了解嗜酸粒细胞的变化，以观察急性传染病、烧伤和手术的预后，特别是了解肾上腺皮质功能和脑垂体前叶功能。,返回,上一页,下一页,嗜酸粒细胞直接计数,嗜酸粒细胞直接计数需要专用稀释液破坏红细胞和其他白细胞。镜下嗜酸粒细胞颗粒染橘红色，有立体感，残存的中
10、性粒细胞颗粒不受色。 计数遵循白细胞计数的基本原则。,返回,上一页,下一页,请您练习,1.取稀释液0.36ml血40l，计数9个大格有细胞18个，请报告结果？,答案：Ec/L18/910（36040）/401060.2109/L,返回,上一页,下一页,作业,1.作一嗜酸粒细胞直接计数，取血20l，计数9个大格，结果计算时，所数细胞总数20为最终报告结果。问本次操作中取稀释液是多少？,返回,上一页,下一页,返回,上一页,下一页,红斑狼疮细胞检验,红斑狼疮细胞检查，是在体外检查LEC因子存在的试验 系统性红斑狼疮（SLE）是一种多发于青年女性的累及多脏器的自身免疫性炎症性结缔组织病。,红斑狼疮()
11、细胞的形成,在系统性红斑狼疮和某些自身免疫性疾病患者的血液内，常含有抗细胞核的抗体（属于Ig），在体内它可使受累的白细胞核的解聚，核溶解和破坏，失去原有的致密结构而变得模糊，形成一种圆形云雾状的均匀物质，称之为均匀体。均匀体可同时吸引数个吞噬细胞于其周围，形成花形细胞簇，也有的均匀体游离存在于血液中，最后被一个中性粒细胞吞噬而成为红斑狼细胞 。,返回,上一页,下一页,返回,上一页,下一页,LE细胞的形成需要的条件：,患者特有的抗细胞核抗体 受损或退变的细胞核 具有吞噬能力的白细胞,返回,上一页,下一页,二、检验方法,细胞的检查方法较多，一般以血块法较简便。 .取静脉血2LmL，置小试管内，室温
12、中待其凝固后，立即用竹签捣碎血块。,返回,上一页,下一页,二、检验方法,.以177（1000r/min）离心5min10min，使白细胞适当集中，置37孵育2。.再将白细胞层吸入红细胞压积管内，以 1600（3000min）离心 10min 小心吸取白细胞层涂片24张，干燥后，瑞特染色镜检。,上一页,下一页,返 回,三、细胞的形态特征,典型的红斑 狼疮细胞是在一个 中性分叶核粒细胞 （亦可为单核细胞。 但罕见）中吞噬了 至数个圆形或椭圆形呈云雾状的、染成淡红 色的均匀体，吞噬细胞常胀大，其本身的核被 挤在一边，仅在均匀体周围可看到少许细胞质。,返回,上一页,下一页,LE细胞的形态特征,返回,上
13、一页,下一页,注意,必须找到典型的细胞才能报告阳性结果，仅见游离均匀体或花形细胞簇，不能报告阳性，应反复检查。,返回,上一页,下一页,四、注意事项,.取血后应立即检查，不能搁置过久。.孵育时间为2，若时间过短，阳性率低；孵育时间过长，细胞容易退变，增加识别困难。,返回,上一页,下一页,四、注意事项,.为了提高阳性率，应多检查几张涂片。检查时应先用低倍镜观察全片，高倍镜寻找，特别应注意涂片的尾部和两侧，可疑时用油镜鉴定。,返回,上一页,下一页,四、注意事项,注意与血片中其他 吞噬现象区别:中性粒 细胞或单核细胞吞噬衰 老退变的细胞核 称为果 馅细胞。,返回,上一页,下一页,四、注意事项,果馅细胞
14、多为单核细胞吞噬的细胞核，其特征是，被吞噬的细胞核尚有完整的染色质结构和染色特性，即使有退行性变，也多染色较深，无均匀感，无明显肿胀感。吞噬细胞的胞质量丰富，核被挤现象不明显。,返回,上一页,下一页,五、临床意义,系统性红斑狼疮患者， 细胞阳性率一般为 7090。通常在活动期容易找到，在缓解期不易找到，使用激素治疗后常消失，病情严重者，在骨髓、血液、胸腹水的直接涂片中，亦可找到细胞。 其他自身免疫性疾病，如类风湿、硬皮病以及活动性肝炎等，亦可发现细胞。因此发现细胞，发现LE细胞尚需结合临床表现及抗核抗体检查才能确诊。,返回,上一页,下一页,总结,血块法(凝血法)的操作 1采血凝固 2捣碎血块
15、3离心孵育 4离心分层 5涂片染色,返回,上一页,下一页,点彩红细胞的检验,上一页,下一页,返 回,概 念,嗜碱性点彩红细胞简称点彩红细胞，是未完全成熟的无核红细胞，在其发育过程中，由于某些病理因素的作用，胞质中残存的嗜碱性物质RNA发生变性沉淀，经碱性染料（如亚甲蓝等）染色，在胞质内可见色泽鲜明、大小不等的深蓝色颗粒。,上一页,下一页,返 回,原理,点彩红细胞+碱性染料亚甲蓝红细胞呈浅蓝绿色，胞质中颗粒染深蓝色计数1000个红细胞中的点彩红细胞数计算出点彩红细胞的百分率。,上一页,下一页,返 回,操作,制血片 固定：甲醇，3min。 染色：碱性亚甲蓝，12min。 水洗、待干 计数:1000
16、个红细胞中的点彩红细胞,上一页,下一页,返 回,点彩红细胞的检验,或计数5个视野中的红细胞总数和50个视野中的点彩红细胞，计算点彩红细胞的分数数。,上一页,下一页,返 回,临床意义,1.参考值：0.03。 2. 点彩红细胞增多见于：（1）重金属中毒。（2）化学药物中毒患者。（3）某些血液病和恶性肿瘤。 3.常用作铅中毒的诊断筛选指标。,上一页,下一页,返 回,目标形成性检验及校正,网织红细胞、点彩红细胞、嗜多色红细胞系，表现形态有何差异？ 答案：有联系。它们都是红细胞中残存有嗜碱性RNA，在瑞特染色血片中，呈均匀分布，染灰蓝、红蓝色等，称为嗜多色性红细胞；若用煌焦油蓝活体染色一部分呈网状、点粒状蓝色结构即是网红细胞，如因职业中毒RNA变性，呈散在的染淡蓝色颗粒，称为点彩红细胞。,上一页,下一页,返 回,
