1、血细胞分析仪 复检标准的探讨,血细胞分析仪的工作原理,三分群血细胞分析仪 当细胞快速流经小孔时，由于细胞是不良导体，小孔电阻R加大，相当于小孔的横截面积a减少，在电流恒定的情况下，出现瞬间的电压变化而产生一个电脉冲，电脉冲的数量就是流经小孔的细胞数；电脉冲的大小与细胞大小成正比，因此能进行细胞分类。,血细胞分析仪的工作原理,五分类血细胞分析仪 在三分类血细胞计数仪的基础上，结合组织化学和免疫组化，高频传导、激光散射技术，推出了一系列的五分类现代多参数血细胞分析系统。从直方图到散点图；从无数据储存到宏大的数据库；从无质控文件到有多个质控文件，实现了真实意义的全自动。,血细胞分析仪的优势：重复性好
2、，干扰因素少，排除了人为主观因素影响，结果判断客观准确。 可批量样品测定和众多项目测定同时进行。 避免标本之间的污染以及标本对人的“污染”。 便于进行室内及室间质量控制,血细胞分析仪的不足血细胞分析仪测定原理虽有不同，但它的各种项目的阈值是人设定的，而且是固定的，可是病人血细胞变化是千姿百态，有部分细胞难以识别或认错干扰其它细胞计数，如有核红细胞可影响白细胞计数；细胞碎片、血小板聚集可影响血小板计数等。,有了全自动血细胞分析仪血常规检测就可高枕无忧了吗？ 三分类血细胞分析仪器白细胞的直方图正常是“两峰一谷”。如果白细胞直方图失态，则提示白细胞形态学异常或隐含白血病。 五分类血细胞分析仪由于采用
3、了多种复合技术，它们显示的不是细胞体积的直方图，而是二维或三维散点图及染色后的直方图。正常的血细胞在散点图上有其固定的位置和形态，如果散点图异常，也是异常细胞提示。,直方图或散点图的实质筛选实验血细胞分析仪的白细胞分类虽已达到了相当“完善”的程度，但血涂片染色分类仍能提供更多其它重要信息，特别是各种异常血细胞及血液寄生虫的形态学识别，这是仪器分类不能代替的。,直方图或散点图的实质筛选实验 目前公认，血细胞分析仪在形态学识别上还是一种过筛检查，特别在某些病理条件下，对于红细胞系直方图的非正态分布、双峰、多峰，白细胞系直方图的高峰、缺峰，血小板直方图异常等，显微镜检查可解释异常图形和异常报警提示，
4、而对仪器无法辨别形态的细胞，也只能通过镜检来确认 。,直方图或散点图的实质筛选实验 尤其是白细胞形态学分类与血细胞分析仪的白细胞分类有本质上的不同，三分群仅仅是根据细胞大小来分而己，即使先进的五分类也与形态学也有很大差异，又如中性粒细胞毒性病变、变异淋巴细胞、疟原虫等临床需要的指标无法显示；有的幼稚细胞、有核红细胞也不能区分；各参数之间有时还存在互相干扰。总之，血细胞分析仪的结果仅仅是属于过筛而己，不能完全代替人工镜检。,直方图或散点图的实质筛选实验 复检不仅能补充仪器形态学鉴别能力的不足，而且还可以直观地评估和验证血液学分析仪所报告结果的可靠性。凭借血片中细胞的分布比例，估计仪器给出的白细胞
5、、血小板计数、血红蛋白及白细胞分类结果是否大致相符，从而纠正某些由于仪器识别能力的限制造成的误判。,复检标准,仪器的档次、病人的情况、临床医生的要求和检验人员的经验都影响复检率。复检率差别很大，从5%40%参考依据不一致,复检标准,主张各血液学实验室根据机身的具体情况，制定本实验室的标准,复检标准,2005年全国血液体液学质量保证学术会议上朱忠勇教授提出下列几个应考虑复检的条件： 1、仪器出现警示符号 2、直方图或散点图出现异常 3、仪器给出的结果相互之间出现矛盾 4、仪器给出的结果与临床初诊或提示明显不符 5、临床初诊或提示有白血病等血液病 6、临床医生指定要镜检,复检标准,2005年国际室
6、间质评指导委员会在Laboratory Hematology 11期由Barnes执笔发表文章，他们在2002年春季邀请了20位专家开会讨论了血细胞分析仪复检问题，在会上一致通过了大会拟定的复检标准83条。,复检标准,会后这个标准在6个国家15所不同性质的综合医院、肿瘤医院、儿童医院、社区医院、私人诊所等临床实验室进行实践，他们拥有Bayer ADVIA 120、Beckman Coulter GenS 和 LH750、Sysmex SE-9000 AN和 XE-2100血细胞分析仪，共进行了13,298例验证，经过对数据详细的分析后这些标准被精炼、整理后形成复检标准41条。,复检标准,一、国
7、际血液学复检专家组推荐的41条自动CBC和DC复检规则： 1.新生儿：（1）复检条件：首次检测标本；（2）复检要求：涂片镜检。 2.WBC、RBC、Hb、PLT、网织红细胞（Ret）：（1）复检条件：超出线性范围； （2）复检要求：稀释标本后重新测定。 3.WBC、PLT：（1）复检条件：低于实验室确认 的仪器线性范围； （2）复检要求：按实验室标准操作规程（SOP）进行。,复检标准,4.WBC、RBC、Hb、PLT： （1）复检条件：无结果； （2）复检要求：检查标本是否有凝块，重测标本，如果维持不变，用替代方法计数。 5.WBC： （1）复检条件：首次结果30.0x10e9/L； （2）复
8、检要求：涂片镜检。 6.WBC： （1）复检条件：3天内Delta值超限，并30.0x10e9/L； （2）复检要求：涂片镜检。,复检标准,7.PLT： （1）复检条件：首次结果1000.0x10e9/L； （2）复检要求：涂片镜检。 8.PLT： （1）复检条件：Delta值超限的任何结果； （2）复检要求：涂片镜检。 9.Hb： （1）复检条件：首次结果其年龄和性别参考范围上限20g/L； （2）复检要求：涂片镜检，确认标本是否符合要求。,复检标准,10.平均红细胞体积（MCV）： （1）复检条件：24h内标本的首次结果105fl（成人）； （2）复检要求：涂片镜检。 11.MCV： （1
9、）复检条件：24小时以上的成人标本105fl； （2）复检要求：涂片镜检观察大红细胞相关变化，如无大红细胞相关变化，要求重送新鲜血标本，如无新鲜血标本，报告中注明。 12.MCV： （1）复检条件：24h内标本的Delta值超限的任何结果；（2）复检要求：确认标本是否符合要求。,复检标准,13.平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）：（1）复检条件：参考范围上限20g/L；（2）复检要求：检查标本是否有脂血、溶血、RBC凝集及球形红细胞。 14.MCHC： （1）复检条件：22%； （2）复检要求：涂片镜检。,复检标准,1622条为白细胞分类的复检规则： 16.无白细胞分类计数（DC）结果或DC结
10、果不全：（1）复检条件：无条件复检； （2）复检要求：人工分类和涂片镜检。 17.中性粒细胞绝对计数（Neut）： （1）复检条件：首次结果20.0x10e9/L； （2）复检要求：涂片镜检。 18.淋巴细胞绝对计数（Lym）： （1）复检条件：首次结果5.0x10e9/L（成人）或7.0x10e9/L（12岁）； （2）复检要求：涂片镜检。,复检标准,19.单核细胞绝对计数（Mono）： （1）复检条件：首次结果1.5x10e9/L（成人）或3.0x10e9/L（2.0x10e9/L； （2）复检要求：涂片镜检。 21.嗜碱粒细胞绝对计数（Baso）： （1）复检条件：首次结果0.5x10e
11、9/L； （2）复检要求：涂片镜检。,复检标准,22.有核红细胞绝对计数（NRBC）： （1）复检条件：首次出现任何结果； （2）复检要求：涂片镜检。 23条为网织红细胞的复检规则： 23.网织红细胞绝对计数（Ret）： （1）复检条件：首次结果0.10x10e9/L；（2）复检要求：涂片镜检。,复检标准,2441条为可以提示的复检规则： 24.怀疑性报警不成熟粒细胞(IG)/杆状核中性粒细胞（Band）报警提示除外： （1）复检条件：首次成人结果出现阳性报警； （2）复检要求：涂片镜检。 25.怀疑性报警： （1）复检条件：首次儿童结果出现阳性报警； （2）复检要求：涂片镜检。,复检标准,2
12、6.WBC结果不可*报警： （1）复检条件：阳性报警； （2）复检要求：确认标本是否符合要求并重测标本，如出现同样报警提示，检查仪器，如需要，进行人工分类。 27.RBC碎片： （1）复检条件：阳性报警； （2）复检要求：涂片镜检。 28.双形RBC： （1）复检条件：首次结果出现阳性报警； （2）复检要求：涂片镜检。,复检标准,29.难溶性RBC： （1）复检条件：阳性报警； （2）复检要求：检查WBC直方/散点图，根据实验室SOP证实Ret计数是否正确，涂片镜检是否有异常形态的红细胞。 30.PLT聚集报警： （1）复检条件：任何计数结果； （2）复检要求：检查标本是否有凝块，涂片镜检估计
13、PLT数，如PLT仍聚集，按实验室SOP进行。 31.PLT报警： （1）复检条件：除PLT聚集外的PLT和MPV报警； （2）复检要求：涂片镜检。,复检标准,32.IG报警： （1）复检条件：首次结果出现阳性报警；（2）复检要求：涂片镜检。 33.IG报警： （1）复检条件：WBC的Detal值超上限，有以前确认的阳性报警结果； （2）复检要求：涂片镜检。 34.左移报警： （1）复检条件：阳性报警； （2）复检要求：按实验室SOP进行。,复检标准,35.不典型和（或）变异Lym： （1）复检条件：首次结果出现阳性报警；（2）复检要求：涂片镜检。 36.不典型和（或）变异Lym： （1）复检
14、条件：WBC的Detal值超上限，有以前确认的阳性报警结果； （2）复检要求：涂片镜检。 37.原始细胞报警： （1）复检条件：首次结果出现阳性报警； （2）复检要求：涂片镜检。,复检标准,38.原始细胞报警： （1）复检条件：37天内WBC的Detal值通过，有以前确认的阳性报警结果；（2）复检要求：按实验室SOP进行。 39.原始细胞报警： （1）复检条件：WBC的Detal值超上限，有以前确认的阳性报警结果；（2）复检要求：涂片镜检。 40.NRBC报警： （1）复检条件：阳性报警；（2）复检要求：涂片镜检，如发现NRBC，计数NRBC，重新计算WBC结果。 41.Ret： （1）复检条
15、件：散点/直方图异常；（2）复检要求：检查仪器状态是否正常，如吸样有问题，重测标本，如结果维持不变，涂片镜检。,复检内容,1、对照、评估血液学分析仪所给出的血液学有关参数的可靠性，必要时加以纠正2、印证直方图和散点图上的发现3、血细胞的形态学观察4、白细胞分类,复检内容,复检的范围应该是全面的，并非单纯显微镜下作白细胞分类计数。应该把复检作为全血细胞分析（CBC）一项很重要的质量控制措施,复检的一般步骤,1、检查、了解仪器是否处于正常状态，室内质控是否在允许范围之内。2、仔细阅读仪器报告的各种参数和直方图、散点图和临床提供的初诊资料，根据本室制定的标准，确定是否需要复检。,复检的一般步骤,3、
16、复检时，首先在细胞分布适中部位浏览血片，估计白细胞数、血小板数，观察红、白细胞形态。如未发现异常，或虽发现异常，但与仪器报告一致，即可按仪器给出的结果发出报告。 4、如发现镜检与仪器报告不符或有新的发现，必须在报告单上加以描述，供临床参考。,复检的一般步骤,5、如发现幼稚、异常形态的白细胞或镜检发现仪器报告的白细胞分类与镜下观察到的不符，必须进行显微镜下分类，并以显微镜分类（纠正）的结果报告。6、异常形态的红细胞和发现血液寄生虫等也应加以描述和报告。7、必要时可提出进一步检查和观察的建议。,复检的一般步骤,注意： 由于实验室和个人之间对每个细胞的判断和解释不同，相互之间任然时有矛盾。各个实验室
17、应该按以上标准进行培训，并进行质量控制，以期在一个实验室内达到统一和标准化。,复检标准实例,301医院丛玉隆主任曾经提出过三分群仪器符合下列三条者，不需要复检的标准： 红细胞数、血红蛋白值、白细胞数、血小板数都在参考范围内； 三个直方图没有异常发现； 不是血液病患者或临床大夫提出需要注意的；,复检标准实例,复检标准初步方案为： 仪器出现的警示（Flag）符号的； 仪器不出结果的； 凡是检查结果过低过高者：如红细胞2.5010e12/L；血红蛋白70g/L；白细胞3.010e9/L、或2010e9/L；大细胞（中性粒细胞）80%；中间细胞8%；成人小细胞（淋巴细胞）50%；血小板5010e9/L
18、； 凡是参数结果间有矛盾的； 三个直方图任何一个出现异常者； 临床大夫要求镜检的。,复检标准实例,2005年北京和睦佳医院孙芾主任提出五分类血细胞分析仪（Coulter MAXM）的复检标准： 白细胞总数25x10e9/L或2.5x10e9/L； 白细胞不能自动分类； 分类结果某种细胞百分比严重异常，如中性粒细胞85%，淋巴细胞60%，单核细胞15%、嗜酸性粒细胞15%、嗜碱性粒细胞3%；,复检标准实例,异常细胞报警提示； Hb70g/L，血小板8010e9/L； 患者近日白细胞总数波动5.010e9/L； 仪器计数异常提示“R”“V”等信号； 医师要求或特殊患者的标本（如新生儿等）。,复检标
19、准实例,我中心提出的五分类血细胞分析仪（SYSMEX-1800i）复检标准 （1）血液肿瘤科所有标本； （2）临床要求镜检的标本； （3） 无白细胞自动分类结果； （4） 白细胞总数高于2010e9L或低于3.010e9L；,复检标准实例,（5）白细胞自动分类结果某种细胞百分比结果严重异常:中性分叶粒细胞90,或淋巴细胞60,或单核细胞12,或嗜酸粒细胞10,或嗜碱粒细胞3； （6） 血红蛋白 70 gL； （7）血小板 7010e9L； （8） 仪器的其他提示。,如何正确对待血细胞分析检测 遵循分析前、中、后质量控制和全面质量管理程序，发出报告前必须复核，尤其要强调异常提示下的显微镜检查。 形态学观察是最基本、最重要和最关键的复核，也是血常规检验中主要的形态学质控内容，是临床诊疗工作的需要，更是医学检验工作者的责任和义务，必须坚持下去!决不能完全“信赖”仪器一律不作复检造成漏检、误诊。,不能完全否定仪器的可靠性，全部镜下复检。 避免将宝贵的时间无谓地浪费在正常标本上面，而把精力集中到需要仔细镜下复检的“刀刃”上 。 提高工作效率的同时严把质量关“以仪器法为主，异常提示结合镜下手工复检，是普遍采用的血细胞分析模式”。,谢谢！,
