1、药物分析 Pharmaceutical Analysis,主讲：王庆,第六章 芳酸类非甾体抗炎药物 的分析,基 本 要 求,一、掌握苯甲酸类、水杨酸类药物的结构特点，主要理化性质，鉴别试验和含量测定的基本原理与方法。二、熟悉其他芳酸类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。,第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析,分类与 典型药物,理化特征,鉴别试验,杂质检查,含量测定,练习与思考,基本要求,第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析,什么是芳酸？,苯环,羧基,其他取代基,分类：苯甲酸类水杨酸类其他芳酸及其酯类,非甾体抗炎药：是一类不含有甾体骨架的抗炎药，多数具有芳酸基本结构。,第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的
2、分析,第一节 典型药物分类与理化性质,（一）典型药物结构,苯甲酸及其钠盐,一、苯甲酸类,酸性 （弱碱性）,紫外吸收,丙磺舒,酸性,紫外吸收,S元素,一、苯甲酸类,甲芬那酸,一、苯甲酸类,（二）主要理化性质,1. 溶解性: 固体，有一定熔点。除钠盐溶于水，其余不溶。2. UV和IR光谱特性：苯环，特征取代基3.分解反应特性：苯甲酸钠分解为苯甲酸丙磺舒分解为SO24. 酸性：游离的羧基,二、水杨酸类（一）典型药物结构,水杨酸（salycylic acid，SA）,结构,羧基,酚OH,性质,酸性,FeCl3反应,应用,含量测定,鉴别,阿司匹林（Aspirin,ASA）,结构： 羧基,酯键,性质： 酸
3、性,水解,应用： 含量测定（酸碱中和）,鉴别、检查,对氨基水杨酸钠 （sodium aminosalicylate，PAS-Na),结构： 芳伯氨基,酚OH,性质：重氮化偶合,应用： 含量测定,FeCl3反应,鉴别,1.酸性：具-COOH。酸性受苯环、COOH和其它取代基的相互影响。取代基为吸e基，如X，NO2，OH时，酸性; 为供e基，如CH3,NH2时，酸性取代基位置：邻位OH取代酸性强，能与邻位COOH形成分子内氢键,（二）主要理化性质,水杨酸 阿司匹林 苯甲酸,HCl 芳酸 H2CO3 苯酚,2. 溶解性: 均为固体，有一定熔点。除钠盐溶于水，其余不溶。 3. UV和IR光谱特性：分子
4、结构中具有苯环,有UV和IR特征吸收。 4. 芳伯氨基和酚羟基特性： 5. 水解特性：ASA、双水杨酯及其制剂应检查水杨酸,对氨基水杨酸钠和贝诺酯检查间氨基酚和对氨基酚。,（二）主要理化性质,三、其他芳酸类 (一)典型药物结构,布洛芬（ibuprofen）,第二节 鉴别试验,依据药物理化性质，可展开一系列鉴别方法 一、与三氯化铁反应显色 1. 水杨酸反应阿司匹林：紫堇色；双水杨酯：紫色；二氟尼柳：深紫色； 均通过产生水杨酸与三氯化铁反应显色。,第二节 鉴别试验,一、与三氯化铁反应显色 2. 酚羟基反应 对乙酰氨基酚与三氯化铁显蓝紫色,第二节 鉴别试验,二、缩合反应显色,橙色,第二节 鉴别试验,
5、三、重氮化-偶合反应 对乙酰氨基酚具有伯氨基，在酸性条件下反应可生成对氨基酚，再与亚硝酸钠进行重氮化反应，之后再与碱性-萘酚偶合生成红色偶氮化合物。,水解反应产生芳伯胺,芳伯胺重氮化,偶合反应,红色偶氮化合物,第二节 鉴别试验,三、重氮化-偶合反应含有芳伯胺基或潜在芳伯胺基的药物均可反应。,四、氧化反应 甲芬那酸+H2SO4 深蓝色随即变为棕绿色黄色并产生绿色荧光,第二节 鉴别试验,（O）,K2Cr2O7,吲哚美辛+H2SO4 紫色绿色, 随即变为黄色,（O）,K2Cr2O7,HCl,NaNO2,第二节 鉴别试验,五、水解反应,阿司匹林,白色水杨酸,第二节 鉴别试验,六、特征元素反应 分子中含
6、有氯、硫等元素可以转化为氯化物或硫化物进而进行鉴别。七、光谱法 （一）、UV （二）、IR,如丙磺舒高温加热分解，生成SO2气体，有臭味,1.最大吸收波长 测定max 例：双氯芬酸钠水溶液20 g/mL， max 276nm 2.最大与最小吸收波长法 测定max ；min例：布洛芬用0.4%NaOH溶液制备0.25mg/ml；max 265nm, 273nm; min245nm, 271nm。 3.吸光度法 在max 处测定一定浓度供试液的吸收度A例：羟苯乙酯，5g/ml max =295nm; A=0.48,（一）、紫外-可见分光光度法,4. 在max 处测定供试液的百分吸收系数。例：贝诺酯
7、在max=240nm; = 7307605. 吸光度比值法 在规定的波长测定吸收度比值例：二氟尼柳 20g/ml; A251/A315 = 4.24.6,（一）、紫外-可见分光光度法,水杨酸的红外吸收图谱,37002900cm-1,N-H、 O-H,1660cm-1,C=O,1610,1570 1480,1440,C=C,775cm-1,Ar-H,（二）、红外分光光度法,（二）、红外分光光度法,37002900cm-1,N-H、 O-H,1640cm-1,N-H,1580cm-1 1500cm-1,C=C,1300cm-1,C-N,1188cm-1,C-O,对氨基水杨酸钠的红外吸收图谱,（二）
8、、红外分光光度法,TLC : 比移值 HPLC：供试品保留时间 ，对照品保留时间,八、色谱法,第三节 特殊杂质及其检查法,一、阿司匹林及双水杨酯中游离水杨酸与有关物质的检查 （一）阿司匹林及双水杨酯的合成,水杨酸,双水杨酯,乙酰水杨酸,副产物,（二）阿司匹林中水杨酸及有关物质的检查,第三节 特殊杂质及其检查法,（二）其它有关物质的检查,第三节 特殊杂质及其检查法,第三节 特殊杂质及其检查法,二、甲芬那酸中2，3-二甲基苯胺的检查,第三节 特殊杂质及其检查法,三、二氟尼柳中有关物质的检查,有关物质A和B的检查自身对照法,相同药物，不同浓度， 相互比较，主点限量,第三节 特殊杂质及其检查法,四、萘
9、普生的有关物质的检查,四、萘普生的有关物质的检查HPLC,第三节 特殊杂质及其检查法,五、对乙酰氨基酚中氨基酚和对氯苯乙酰胺的检查,第四节 含量测定,第四节 含量测定,一、酸碱滴定法 原理：药物具-COOH；可用碱直接滴定,Aspirin,丙磺舒（Ch.P, BP, JP等），苯甲酸（Ch.P等）均采用本法。,第四节 含量测定,（一）直接滴定法,1 ： 1,乙醇作用：溶解ASA；防止ASA在水溶液中滴定过程易水解； 中性乙醇：对指示剂（酚酞）而言为中性，可消除滴定误差； pKa 36的药物溶于中性醇，可直接用NaOH滴定； pKa 69的药物要用非水溶液滴定法； 若SA不合格，不宜采用本法。,
10、应用：多国药典用于阿司匹林、双水杨酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬测定；USP和BP还用于甲芬那酸的测定。,第四节 含量测定,（二）剩余量滴定法,本品在甲醇、乙醇及水中极微溶或者几乎不溶，在丙酮中微溶。所以CHP使用定量过量的氢氧化钠滴定液溶解后，再用盐酸滴定液回滴剩余的氢氧化钠。,为什么氢氧化 钠能溶解之？,（1）原理：,（2）方法：,供试品 1.5g,0.5mol/LNaOH,50.0ml,煮沸,10,放冷,酚酞,0.25mol/LH2SO4,(V),空白 (V0),定、过量,剩余,（三）水解后剩余量滴定法,1.水解后剩余滴定法,（3）讨论：空白试验的目的SA超过限量时也不适用 （4）计算：T的
11、计算含量的计算,1.水解后剩余滴定法,I 份NaOH供试品,I 份NaOH 空白,V,VO,Vo-V相当于Asipirin消耗NaOH的ml数,剩余,1.水解后剩余滴定法,2、两步滴定法 -改进方法,用于：阿司匹林片/肠溶片的含量测定,（1）原理：片剂中加稳定剂：酒石酸/枸橼酸Aspirin SA+HAc,水解,酸性,有干扰，所以采用两步滴定法,第一步 中和,Aspirin + NaOH,钠盐 + H2O,水解产物SA + NaOH,SA-Na + H2O,酸性稳定剂+ NaOH,中性盐,第二步水 解与测定，即水解后剩余量滴定法,（2）方法,第一步：中和,供试品片粉适量,中性乙醇20ml,酚酞
12、,NaOH（0.1mol/L) 滴定至粉红色,第二步：水解与测定,中和后的 供试液,0.1mol/LNaOH40ml,水浴15,0.05mol/L H2SO4（V）,空白（V0）,2、两步滴定法,（3）讨论适用于阿司匹林片、肠溶片SA超过限量时也适用,（4）计算,2、两步滴定法,（四）非水溶液滴定法,（一）直接紫外分光光度法贝诺酯的测定：,四、紫外分光光度法,原料药：对照品比较法 片 剂：吸收系数法,（二）柱分配色谱-紫外分光光度法,USP(32)采用此法同时测定Aspirin胶囊中 Aspirin和SA,玻璃棉,供试品液：CHCl3-HCl,洗脱液1： CHCl3,中/碱性杂质先洗脱,max
13、=280nm，Aspirin(mg)=C(Au/As),硅藻土-NaHCO3,洗脱液2：冰HAc-CHCl3 10ml,洗脱液3：冰HAc-CHCl3 85ml,Aspirin后洗脱,ChP(2010)：阿司匹林肠溶胶囊、泡腾片、栓剂等含量测定采用此法,三、高效液相色谱法 HPLC,阿司匹林栓剂的含量测定,色谱条件：色谱柱C18；流动相为乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水(20:5:5:70);检测波长276nm 系统适用性试验：n3000; Aspirin与水杨酸钠的R 1.5 计算：,一、血清中Aspirin和SA的HPLC色谱条件： 色谱柱为ODS-C18(150mm 4.6mm, 5m) 流动
14、相为甲醇-水-正丁醇-磷酸(300 :200 :10：0.05) 检测波长为237nm；内标物为苯甲酸血清样品预处理血清100l + HClO450l + 不同浓度Aspirin和SA + 内标液 涡旋混合2min 离心5min 取上清液20 l进样。,第五节 体内药物分析,回归方程：以峰高比（H标/H内）对浓度回归Aspirin的回归方程：Y =5.810-3 +5.2910-2X r= 0.9996SA的回归方程：Y = 6.010-3 + 8.3310-2X r = 0.9981Aspirin和SA的线性范围分别为：120g/ml; 230g/ml回收率：空白血清 + 五种不同浓度测定，
15、Aspirin为96.0%106.0%;SA为92.0%119.5%;（五种不同浓度均应在线性范围内）,一、血清中Aspirin和SA的HPLC,色谱条件：色谱柱为LiChrospher100RP(125mm4mm, 5m)流动相为25%乙腈溶液-醋酸缓冲溶液梯度洗脱。检测波长为254nm；内标物为依他尼酸。 尿样品预处理：C8固相萃取柱，100mg填料/ml用甲醇1.0ml,然后用0.5ml蒸馏水活化。2.0ml尿样 + 内标300l(10g/ml) 上柱 1.0ml水洗脱生物杂质 再用甲醇0.5ml洗脱保留在柱上的丙磺舒和内标。洗脱液0.45m浸滤膜滤过，取5l直接进样分析。,二、尿中丙磺
16、舒的固相萃取净化-HPLC (运动员违禁药物),线性关系和回收率： 取空白尿样2.0ml +不同浓度丙磺舒+内标液，按 上述方法分析(浓度范围为0.1g/ml100g/ml)A丙/A内对C丙回归。 回收率： 丙磺舒为100%3%(n=14)； 内标为101%3%(n=12)； 人尿样测定：丙磺舒(单剂量500mg)尿排泄药-时曲线,二、尿中丙磺舒的固相萃取净化-HPLC (运动员违禁药物),练习与思考,1阿司匹林中检查的特殊杂质是 A.水杨醛 B.砷盐 C.水杨酸 D.苯甲酸 E.苯酚 2对氨基水杨酸钠中检查的特殊杂质是 A.水杨醛 B. 间氨基酚 C.水杨酸 D.苯甲酸 E.苯酚,X型题,3
17、. 直接能与FeCl3产生颜色反应的药物有 A.水杨酸 B.对氨基酚 C.阿司匹林,练习与思考,4. 能发生重氮化-偶合反应的药物有 A.水杨酸 B.阿司匹林 C.对氨基水杨酸钠 D.对氨基酚,练习与思考,5. 直接酸碱滴定法测定双水杨酯原料含量时，若滴定过程中双水杨酯发生水解反应，对测定结果的影响是 A.偏高 B.偏低 C.不确定 D.无变化 E.与所选指示剂有关,练习与思考,6. 芳酸类药物的酸碱滴定中，常采用中性乙醇作溶剂，所谓“中性”是指 A. pH=7 B.对所用指示剂显中性 C.除去酸性杂质的乙醇 D.对甲基橙显中性 E.对甲基红显中性,练习与思考,简述阿司匹林片两步滴定法的原理与操作要点。,作业,
