1、广西某地发病猪场主要病原的检测与调查分析.44.疫情报告 L|VEsTOCKANDPoULTRY|NDUsTRYN0231广西某地发病猪场主要病原的检测与调查分析骆永泉一,黄伟坚,谭意军,覃焕鹏,陈记文,邓晓霞(1.广西大学动物科学技术学院,广西南宁 530005;2,贺州市动物疫病预防控制中心;3.贺州市八步区动物疫病预防控制中心)中图分类号:$858.28 文献标识码:B 文章编号:1008 0414(2008)07004402摘要于 2006 年 9 月至 2007 年 7 月间.对广西某市以发热,咳嗽,呼吸困难,皮肤及耳朵发绀和高发病率及高病死率等为主要临床特征的 39 个发病猪场所采
2、集的53 份病料进行了主要病原检测.检测结果显示,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS,r)阳性3O 份,阳性率 56.60%(30/53);猪 2 型圆环病毒(PCV2)阳一 1-25 份,阳性率47.17%(25/53);猪流感病毒(SIV)阳 t1-21 份,阳性率 39.62%(21/53);猪瘟病毒(HCV)未捡出阳性; 其中可捡出 2种以上病原的有 26 份病料,占 48.06%(26/53).检测结果与调查分析表明 ,猪繁殖与呼吸综合征(PRRS),猪 2 型圆环病毒 (PCV2)和猪流感(SI)是导致该市猪场疾病发生流行的主要病种,而 JLPRRS,PCV2 和 SI 常呈二重或多
3、重合并感染,这为该市发病猪场针对性地做好疫痛的防控提供了科学依据.关键词猪繁殖与呼吸综合征猪 2 型圆环病毒猪流感猪瘟流行病学调查分析广西某市为养殖大市.生猪养殖业是其主导产业.自 2006 年 8 月以来,该市部分猪场仔猪陆续发生一种以发热,咳嗽,呼吸困难,皮肤及耳朵发绀为主要临床特征的猪传染病,发病率为 2O%一 80%.病死率达 20%一 50%.给养猪业造成严重经济损失.为了查明病因,查清该病在该市的流行现状,尽快制定针对性强的防控技术措施.笔者于 2006 年 9 月至 2007 年 7 月问,对采自 39 个发病猪场的 53 份病料进行主要病原检测以及初步调查分析.先将结果报告如下
4、:1 材料与方法1.1 材料1.11.1 病料:2006 年 9 月至 2007 年 7 月期间,收集该市部分乡镇的 39 个发病猪场 53 份病料.包括病猪的脾,肺,淋巴结等,按常规方法采集送交实验室检测.1.1.2 实验材料及试:PCR 及 RTPCR相关试剂如 Trizol(细胞裂解液 ),氯仿,异丙醇,75%乙醇,DEPC 等试验材料均采购自 TakaRa 公司.1,13 主要实验仪器:高速台式离心机,电泳槽,冰箱,PCR 扩增仪,凝胶成像分析仪等.1.1.4 引物设计与合成:设计引物,分别对 PRRSV,HCV2,CSFV,SIV 等主要病原进行检测,扩增目的片段,引物均由上海生工生
5、物工程技术服务有限公司合成.1-2 流行病学调查重点了解各发病猪场对猪主要传染病的免疫情况猪的购人来源情况,猪的发病日龄,发病率,死亡率,病程,用药治疗情况,主要临床症状,剖检病变等相关流行病学资料.1.3 方法1.3.1 病料处理:取病料(脾,肺,淋巴结 2gE 右.在灭菌研钵里剪碎并磨至糊状,加入 8mL 的 Hanks 液(pH7.0 7.2),再仔细研磨,然后分装.于一 20冰箱和室温反复冻融 35 次.10000rpm( 转,分离心 )10min,取上清液即为病毒悬液.1.3.2 病毒 RNA 与 DNA 的提取:按常规方法提取病原的 RNA 和 DNA.1.3.3RTPCR 鉴定:
6、扩增 PRRSV:取 16L与 1L 反向引物(25pm0l/L)混匀,于 PCR仪中 705rain.905min,水浴中 5rain.加入如下试剂:5xBuffer,5tzL;10mMol/LdNTP;2tzL,Rnasin(RNA 酶抑制剂);收稿日期:2oo80620作者筒价:骆永泉,男,高级兽医师,主要从事猪病防治工作通讯作者:黄伟坚,教授,博士1.OL,MMLV(反转录酶);0.5,总量 25L.置 PCR 仪,42C1h,955min,产物 cDNA 于 20保存.PCRF 反应在 25L 体系中进行,反应程序:95,预变性,5min;95oC30S,5730S,72 45S 共
7、 45cycks:72oC10min,延伸.扩增产物用 1%琼脂糖凝胶电泳观察结果.扩增 CSFV.扩增 SIV.1.3.4PCR 鉴定:扩增 HCV2.2 结果2.1 猪病发生的主要流行特点2.1.1 流行的范围广.传播的速度较快.1 个猪场发生疫情后,几天可波及整个猪群,并可向周边猪场传播.2.1.2 流行的方式:呈爆发流行.大中小猪场或散养猪户均有发病发病率为 20%80%.病死率达 20%50%.2.1.3 以中小年龄猪较多发生.成年猪和育肥猪发病较轻,母猪发病多样化.2.1.4 疫情发生复杂,呈混合感染多,发病后细菌感染常见.2.1.5 使用药物治疗治疗效果不理想.收效甚微.2.2
8、主要临床症状2.2.1 发热,咳嗽,呼吸困难,皮肤及耳朵发绀和高发病率及高病死率.病猪皮肤发红,耳朵腹部等有紫红色发绀,有的皮肤出血点.2_2.2 病猪有呼吸症状,喜欢扎堆卧倒.部分病猪眼睛有结膜炎等.2.2.3 部分病猪:便秘,腹泻,尿黄.2.2.4 母猪感染发病后有流产,死胎,木乃伊发生,个别死亡.2_2.5 病程长的病猪皮肤苍白,被毛松乱,个别后退转圈,后肢瘫痪站立不稳,有神经症状.2.3 主要剖检病变情况2.3.1 肺部主要病变:有出血斑点部分出现实变,出现斑驳褐色状的间质性肺炎病变,肺门淋巴结出血.2.3.2 淋巴结病变:有的肿大,水肿,出血.2.3.3 肝脏无特征性病变;心脏质地变
9、软,有的心冠出血;个别脾脏边缘有锯齿状梗死:肾脏有的肿大,土黄色,质脆,部份有的针尖状出血点.2.3.4 部份病猪软脑膜充血,出血,水肿.3 诊断疫情报告?4S?表 1-,检测时间.病料数量送检猪场数检测结果(阳性病料数)PCV 一 2PRRSv.SirHC3.1 主要病原的检测对所采集的病料,用 Rr_PCR 或 PCR方法进行检测,结果以 PRRSV 为主.检出率为 56.60%,其次为 PCV-247.17%,SIV39.62%,未检出 HC.详见表 1.从 39 个猪场采集的 53 份病料的检测结果发现:PCV-2 阳性 25 份,阳性率47.17%(25/53);PRRSV 阳性 3
10、0 份,阳性率 56.60%(30/53);SIV 阳性 21 份,阳性率 39.62%(21/53);HCV 未检出阳性.3.2 主要病原混合感染的检测其中有 26 份病料检出 2 种以上病原存在,占 49.06%(26/53),将 53 份中PRRSV 阳性病料 ,同时检测其它 3 种病原,将结果分类,结果发现,PRRSV 与其它病原的混合感染较严重,二重感染如 PRRSV+PCV 一 2 所占比率为39.62%(21/53),PRRSV+SIV,所占比率32.07%f17/53);三重感染如 PRRSV+PCV 一 2+SIV30.19(16/53)所占比率%,HCV 未检出阳性.4 分
11、析与讨论4:1 本调查应用 RTPCR 技术从送检病料中检JJPCV 一 2,PRRSV,SIV,HCV的存在,具有准确,特异,快速简便的优点,对当前猪病疫情复杂,临床症状及病理变化不够典型,只凭眼观判断易造成误诊的情况下.更适用于对临床样品的快速诊断.4_2 从检测结果看,分别从 53 份病料中检出了 PRRSV 阳性 30 份,阳性率 56.60%(30153);PCV 一 2 阳性 25 份,阳性率 47.17%(25/53);SIV 阳性 21 份,阳性率 39.62%(21/53):HCV 未检出阳性.其中有 26 份病料检出两种以上病原存在,di49.06%(26/53).表明发病
12、猪中.PRRSV,PCV2,SIV 感染比例比较大,有个别猪场感染比较严重,而且以PRRSV 为主应该引起养猪户和有关部门的重视.做好防疫工作.4.3 同时发现有将近一半的猪场都是以混合感染为主,占了 49.06%,而 PRRSV,PCV2,SIV 等均可导致猪体的免疫抑制,降低机体抵抗力,造成细菌的继发感染,加重疫情.造成严重经济损失.因此为了提高猪只对疫苗的免疫效果,建议这些猪场注射疫苗时配合使用免疫增强剂.4.4 这次从发病猪的病料中没有检测到HEy.由此可以看出这些猪场的猪瘟防制措施做得比较好,这和猪场长期以来重视猪瘟免疫工作分不开.4.5 在本次检测过程中我们还发现,SIV的检出率较
13、高.而 SIV 具有重要的公共卫生意义.应引起重视.同时发现 SI 主要集中在秋冬季节;51O 月后病料中没有检出到流感 SIV.这说明在秋冬季节要特别重视流感 SIV 的预防.4.6 当地大部份养猪户的猪苗都有从外省引进的习惯,由于某些原因,一些病原难免会从流通环节传人,猪病的防控形势十分严峻.4.7 我们进行本试验调查的目的是了解引起当前当地猪病的主要病原感染情况.由于进行过猪伪狂犬病(PR)的免疫后,PR 的发生已明显降低 ,所以本次试验未进行 PR 的检测 .同时由于条件限制在这次调查中没有从血清学,细菌学等其他方面进行流行病学调查.所以这次调查的结果有一定的局限性或片面性.5 结语5
14、.1 加强饲养管理.降低饲养密度,实行严格的全进全出制和混群制度,减少环境应激因素,控制并发感染,保证猪群具有稳定的免疫状态,加强猪场内部和外部的生物安全措施,购猪时保证猪来自无病的猪场是预防控制猪病,降低经济损失的有效措施.5_2 建立完善的生物安全体系.将消毒卫生工作贯穿于养猪生产的各个环节.最大限度地降低猪场内污染的病原微生物,减少或杜绝猪群继发感染的机率.有效预防和控制其他感染性疾病,做好猪瘟,猪伪狂犬病,猪细小病毒病,猪气喘病等疫苗的免疫接种.提高猪群整体的免疫水平,减少呼吸道病原体的继发感染,增强抵抗力.5.3 坚持自繁自养的原则,改变从外引进猪苗的习惯.避免从疫区引进猪只,严格控制外来人员,车辆,货物进入猪场.猪群的随意流动是传播与扩散猪病的重要原因.运输和贸易带来的猪群流动是传播与扩散猪病的重要途径;对该地区这些猪场坚持和推行自繁自养,改变从外引进猪苗的习惯十分迫切.5.4 全面开展猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫接种,对预防和控制猪繁殖与呼吸综合征的发生起到关键的作用.5.5 药物预防,预防性投药和药物治疗,对控制细菌源性的混合感染或继发感染,减少发病和死亡.是可取的做法 II
