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材料的固定.doc

上传人:cjc2202537 文档编号:222908 上传时间:2018-03-24 格式:DOC 页数:2 大小:86.50KB
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资源描述

1、固定的目的迅速杀死组织,防止细胞自溶,使细胞组织形态结构尽可能保持接近生活时的状态。凝结细胞中的某些成分使材料适当硬化而便于切片。保护细胞组织使其物质不致溶解和流失。促进细胞组织对某些染色剂的着色。固定的原理化学作用蛋白质遇乙醇等试剂凝结。物理作用脂肪等遇锇酸发生沉淀作用。固定液理想固定液:保存所有组织的原位组成和细微结构;不会导致组织细胞膨胀或收缩;增强组织或细胞着色或媒染作用单纯固定液:只含一种固定剂,很少使用。定剂:乙醇、乙酸、甲醛、铬酸、苦味酸。混合固定液: 常用固定液FAA配方:福尔马林 5ml,冰乙酸 5ml,70% 酒精 90ml配方:福尔马林 10ml,冰乙酸 3ml,50%酒

2、精 87ml既是固定液,也是保存液,一般根、茎、叶、花药和子房都可用,固定 12 小时以上。FPA福尔马林 5ml,丙酸 5ml,70% 酒精一般根、茎、叶、花药和子房的组织切片,固定时间 824 小时并可保持更长时间。卡诺(Carnoys )固定液配方:纯酒精(或 95%)15ml,乙酸 5ml配方:纯酒精 30ml,乙酸 5ml,氯仿 15ml配方:甲醇 30ml,乙酸 5ml,氯仿 15ml用于根尖、花药的压片及子房的石蜡切片,固定时间 1530 分钟,其他材料不超过 24 小时,做组织化学,显示 DNA 和 RNA 效果好。保存:95% 85%70%酒精长期保存。4%多聚甲醛固定液4

3、克多聚甲醛溶于 100ml Ph7.2,0.1mol/L 磷酸缓冲液(PBS )不会与蛋白质产生广泛交联而不影响探针进入细胞,用于组织化学、免疫定位、原位杂交等,4下新鲜配制固定液固定组织 14 小时,细胞 2030 分钟,转入 1530%蔗糖溶液,置 4冰箱过夜。铬酸-乙酸固定液10%铬酸 7ml,乙酸 1ml,蒸馏水 92ml,麦芽糖 2 克固定幼嫩小材料,如根尖、小子房,固定实践24 小时,固定后流水冲洗 24 小时,梯度乙醇(15% 70%)脱水,转 70%乙醇保存。纳瓦申(Navashins)固定液(铬酸乙酸甲醛固定液)A 液:10%铬酸 8ml,10%乙酸 60ml,蒸馏水 32m

4、lB 液:福尔马林 20ml,蒸馏水 80ml使用前将 A、B 两液 等体积混合。一般植物组织和细胞学材料都适用,固定时间 1224 小时,固定后流水洗 24 小时,梯度酒精脱水,70%酒精保存备用。固定材料时应注意的问题材料必须新鲜;材料与固定液的体积比 1:20;材料上的毛及鳞片应去掉;固定材料应抽气;固定前要写好标签,表明材料编号,固定液种类,材料名称,固定日期,贴于固定瓶侧面。 冲洗目的是洗去固定液,便于材料着色及永久片的保存。流水冲洗:水溶液配制固定液用水冲洗。静水洗涤:乙醇配制固定液用同样浓度乙醇洗涤。脱水是用脱水剂逐步取代样品中水分的过程目的去水并使细胞组织变硬以利于浸蜡、透明和切片

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