1、决明子袋泡剂及其特征图谱考察?34?中国医院药学杂志 2008 年第 28 卷第 1 期ChinHospPharmJ,2008Jan,Vol28,No.01决明子袋泡剂及其特征图谱考察鄢海燕,邹纯才,方洪壮,赵梅(1.皖南医学院药学系,安徽芜湖 241000;2.佳木斯大学药学院,黑龙江佳木斯154007)摘要目的:探求决明子袋泡剂的高效液相色谱特征,为决明子袋泡刑的生产,使用提供特征图谱依据.方法:样品加入沸水 35mL,置盖保温,浸出液加盐酸 4.7mL,加热水解,用氯仿回流提取.采用梯度洗脱技术进行高效液相分析.色谱柱为ZorbaxEclipseXDB-Ct8 柱,流动相为乙腈一 0.1
2、 磷酸水溶液,体积流量为1mL?min;检测波长为 278Din,参比波长为 550nlTl.用数字化色谱综合信息指数法处理色谱特征信息.结果:得到了不同浸出时间的决明子袋泡刑提取液的特征图谱,且浸出时间不同,决明子袋泡剂提取液的检出峰数,检出率,重叠峰数,重叠率有较大差别,经综合信息指数法比较相似度,决明子袋泡剂保温 20min 提取液(1120 号)的相似度低于决明子袋泡刑保温 40min 提取液(1 1O 号) 的特征图谱库的相似度阈值.结论:采用特征图谱可控制决明子袋泡剂在不同保温时间下的内在质量 .关键词 决明子 ;袋泡刑; 特征图谱;相似度中图分类号R282.7;R927.2文献标
3、识码A文章编号1O()1.5213(2(1()8)01 003405StudyonthespecificchromatogramoftheCassiaeobtusifoliaTeabagYANHalyan,ZOUChun-cai,FANGHongzhuang2,ZHAOMei(1.DepartmentofPharmacy,WannanMedicalCollege,AnhuiWuhu241000,China;2.DepartmentofPharmacy,JiamusiUniversity,HeilongjiangJiamusi154007,China)A】BsrI1LCr:O 埘ECngigTo
4、investigateHPLCprofilesoftheCassiaeobtusifoliaTeabagandprovidebasisfortheproductionanduseofspecificchromatogramofCassiaeobtusifolia.METHODSBoitedwaterwasaddedtothesamplesofCassiaeobtusilia,coveredandheated.The1ixiviumwashydrolyzedwithhydrochlorideacidandthenrefluxextractedwithchloroform.TheHPLCwasco
5、nductedonZorbaxEclipseXDC18columnwithacetonitrile-water(0.1phosphoricacid)asmobilephaseingradientelutionataflowrateof1.0mL?min.Thedetectionwavelengthandreferencewavelengthwere278nlnand550nlTl,respectively.Theintegratedchromatographic-digitizedinformationwastreatedbyindexofcompositeinformafloraRESULT
6、SThespecificchromatogramsoftheTeabaglixiviumindifferenttimeswereobtainedandthedetectingpeaksandratio,overlappingpeaksandratiooftheCassiaeobtusifoliaTeabagaredifferentatdifferenttimes,Tocomparethesimilaritybyindexofcompositeinformation.the1ixiviumheatedfor20minwas1essthanthatfor40min.CONCLUSIONThequa
7、tityofCassiaeobtusifoliaTeabagcouldbecontrolledbythismethed.KEYWORDS:Cassiaeobtusifolia;Teabag;specificchromatogram;thesimilarity决明子为豆科植物决明(CassiaobtusifoliaL.)或小决明(CassiatoraL.)的成熟种子 L1,含蒽醌类化合物和萘骈吡喃酮类等多种化学成分,具有清肝明目,润肠通便的功效.决明子为常用中药,已开发出多种制剂,多以大黄酚和总蒽醌类成分的含量来评价药品质量2-3,而中医药理论强调中药所含的某一种活性成分均不能代表其整体的功效.
8、为了更全面,更合理的反映决明子袋泡剂内在的本质,有必要对其色谱特征进行研究.本实验采用梯度洗脱的高效液相色谱法来表征决明子袋泡剂的色谱特征,并用数字化色谱谱的综合信息指数法 L5对决明子袋泡剂的特征峰及其相似度进行了研究,为决明子袋泡剂的生产,使用提供部分资料.1 材料惠普 1100 高效液相色谱仪,包括 Agilent1100四元泵,惠普 1100 二极管阵列检测器,惠普色谱化学工作站;样品与试剂见表 1;以上生药样品经佳木斯大学生药学教研室刘娟教授鉴定为决明(CassiaobtusifoliaL.)的种子,符合中国药典 2005 年版规定;芦荟大黄素对照品(批号 766200210),大黄
9、素对照品(批号 756200110),大黄酸对照品(批号774200311),大黄酚对照品(批号 796200204),大黄素甲醚对照品(批号 7582004080)均购自中国药品生物制品检定所;乙腈,甲醇为色谱纯,其他试剂为分析纯.2 方法与结果2.1 样品制备2.1.1 决明子袋泡剂的制备取决明子生品,粉作者简介 鄢海燕 ,女,副教授,电话:05534223663,E-mail:yhy08O中国医院药学杂志 2008 年第 28 卷第 1 期 ChinHospPharmJ,2008Jan._Vol28,N_l11?35?表 15 批大决明子生药样品Tab1Fivebatchesofcrud
10、esampleCassiaobtusejolia碎,过 5 号筛,称取 2g,用滤纸袋包装,制备决明子袋泡剂.2.1.2 对照品溶液的制备称取芦荟大黄素,大黄酸,大黄素,大黄酚,大黄素甲醚对照品适量,以甲醇为溶剂,配制成 200mg?I 的芦荟大黄素,大黄酸,大黄素,大黄酚,大黄素甲醚纯组分对照品溶液和 5种对照品的混合溶液.2.1.3 供试品溶液制备将袋泡剂加入沸水 35mL,置盖分别保温 2(),40min,将袋取出,浸出液加盐酸 4.7mI,加热回流 1.5h,放冷,加氯仿 25mL,回流 20min,取出,分取氯仿层,酸水层再加氯仿 25mL,回流 20min,分取氯仿层,同上法操作,
11、加氯仿再回流提取 2 次,合并 4 次氯仿提取液,加水 2()mL振摇洗脱,弃去水层,将氯仿液蒸干,残渣加甲醇微热使溶解,定量转移至 10mL 量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀.放置,取上清液经 0.45/zm 微孑 L 滤膜滤过.2.2 色谱条件色谱柱:ZorbaxEclipseXDBC18(4.0mm25(1ITlm,5m),保护柱:ScienhomeC18 柱 (3.01Tim20mm,5 肚 m);流动相:乙腈(A)一0.1 磷酸水溶液(B)作梯度洗脱,0min,1ooAA90B;5min,15A85B;10min,40A60B;40rain,70A3()B;41min 后 1(】()A;流
12、速:1.0mI?min ;柱温:室温;检测波长:278rim,参比波长:55(i)nm; 进样量:i0I.分析时间:50rain.2.3 色谱特征峰标定2.3.1 特征峰选定按“2.1.3“项下方法做空白试验,结果见图 1.检出峰中峰面积最大值及峰高最大值分别在 200A 及 15mAU 以下,因此选取 AreaReject=20(),HeightReject=15 对所有供试品进行积分,选取有积分值的峰作为决明子的特征峰.取决明子袋泡剂供试品溶液按选定色谱条件测定,记录其色谱图,按规定方法积分,结果见图 24.止0l020304050t/min图 1 空白溶液的特征图谱Fig1Thechro
13、matogramofblanksolutionforCassiaeobtuseolia2.3.2 部分特征峰确认取芦荟大黄素,大黄酸,大黄素,大黄酚,大黄素甲醚纯组分对照品溶液和混合对照品溶液按上述色谱条件测定,见图 2.3图 2 标准品溶液的 HPLC 特征图谱1 一芦荟大黄素;2 一大黄酸;3 一大黄素;4 一大黄酚;5 一大黄素甲醚Fig2Thechromatogramofstandardsolution1.aloesemodin;2.rheim3.emodin;4.chrysophaol;5.physcion0l020304050t/min图 3 决明子袋泡剂保温 20min 提取液的
14、 HPLC 特征图谱Fig3ChromatogramoftheCassiaeobtusefoliaTeabaglixiviumheatedfor2()min10l02O3O4O5Ot/min图 4 决明子袋泡剂保温 40min 提取液的 HPLC 特征图谱Fig4ChromatogramoftheCassiaeobtuseoliaTeabaglixiviumheatedfor4()min比较各对照品溶液的色谱图与供试品溶液的色谱图,由色谱保留时间及色谱工作站峰判定功能,初步确定图 3,4 中的 9,12 和 13 号峰分别为大黄素,大黄酚和大黄素甲醚峰.2.3.3 大黄酚的确定按正交投影法的原
15、理和方法,采集纯组分对照品色谱峰峰值处的光谱数据 A和供试品溶液相对应的色谱峰所包含的光谱数据矩阵 B(b,b,b 一 b),m 为供试品目标色谱峰的保留时间点,运用光谱相关色谱方法,分别以 B 的每一光谱矢量 b 对 A 进行正交投影运算(IAA)b,按公式C=b 汀(IAA)b/(IIbiII(IAA)bII)计算供试品溶液光谱正交投影前后光谱矢量的夹角余弦 Ci(i=1,2,m),通过 Ci 接近于零的程度判定色谱峰的纯度.由计算结果得到,图 3,4 中的9,12 和 13 号峰分别为大黄素,大黄酚和大黄素甲36.生里堕堕垫堂垄查塑生箜鲞篁塑旦!:!:醚峰纯色谱峰.选定大黄酚峰为决明子袋
16、泡剂图谱 2.4.3 重复性试验制备 5 份决明子袋泡剂的供的参照峰.试液,进行色谱测定,记录特征图谱.结果表明,所2.4 方法学考察选定的特征峰的相对保留时间和相对峰面积有较好2.4.1 稳定性试验取决明子袋泡剂,制备供试的重复性,RSD 分别小于 1.4 和 5.液,分别于 0,2,4,6,12 及 24h 测定特征图谱,考察 2.5 决明子袋泡剂指纹特征的测定及技术参数相对保留时间,峰面积比值的一致性.分析结果表制备决明子袋泡剂 10 批,分别获得其保温 20rain明,供试品溶液在 24h 内稳定,选定的特征峰的相和保温 40min 的供试品溶液.以1 号决明子袋泡对保留时间的 RSD
17、 小于 0.8,峰面积比值的 RSD 剂为基准样品,共有峰窗口限度为 0.02,强峰数为小于 3.结果表明,选定的特征峰的相对保留时 8,共有率要求80,强峰出现频次要求8,对间和峰面积比值相当一致,稳定性良好.决明子袋泡剂样品的相对保留时间(a)和相对峰面2.4.2 精密度考察取由决明子袋泡剂制备的供积(Ar)进行数据处理,得 1()批次决明子袋泡剂分试液,连续重复进样 5 次,记录特征图谱.结果表别保温 20rain 和 40rain 提取液的特征图谱库.结明,所选定的 14 个特征峰的相对保留时间和相对峰果见表 2.并利用综合信息指数法对决明子袋泡剂面积比值无明显变化,RSD 分别小于
18、0.3 和 3,保温 20rain 提取液和保温 40min 提取液的相似度符合特征图谱要求.进行分析.结果见表 3.表 2 决明子袋泡剂保温 20rain 提取液(11 20 号)和决明子袋泡剂保温 40rain 提取液的特征图谱库(110 号)的比较Tab2ComparisonofthechromatogramsoftheTeabagextractheatedfor20rainand40rain注:a 为相似度均值;b 为相似度阈值表 3 决明子袋泡剂保温 20rain 提取液(11 20 号)的特征图谱与决明子袋泡剂保温 40rain 提取液(110 号 )的特征图谱库的相似度比较Tab
19、3ComparisonofthechromatogramsoftheTeabagheatedfor2()rainand41)rain注:a 为检出峰数;b 为检出率/;c 为重叠峰数;d 为重叠率中国医院药学杂志 2008 年第 28 卷第 1 期ChinHospPharmJ,2008Jan,Vol28,No.01?37?由表 2 可知,决明子袋泡剂保温 40rain 的提取液(1 10 号)的检出峰数为 15 个,检出率为 100,重叠峰数为 15 个,重叠率为 100;而决明子袋泡剂保温 20rain 的提取液(1120 号)的检出峰数为1112 个,检出率为 73.338(),重叠峰数为
20、 11号)的特征图谱与特征图谱库相比较,其相似度在0.5130.627 之间 ,低于决明子袋泡剂保温 40rain提取液(1 10 号) 的相似度阈值 0.746.2.6 不同产地决明子袋泡剂 HPLC 特征图谱的比较12,重叠率为 84.6288.89.分别取产地为河北,安徽,江苏,浙江,上海的 5由表 3 可知,以决明子袋泡剂保温 40rain 提取批决明子生药样品,每批制备保温40rain 的袋泡剂液(1 10 号)建立的特征图谱库,其相似度阈值为提取液 2 份(11()号)和 20rain的袋泡剂提取液 20.746.决明子袋泡剂保温 20min 提取液(112(J 份 (112()号
21、),按“2.5“项进行测定,结果见表 4,5.表 4 不同产地决明子袋泡剂保温 20min 的提取液(11“20 号)和不同产地决明子袋泡剂保温 40min 的提取液的特征图谱库(1 10 号)的比较Tab4ComparisonofthechromatogramsoftheTeabagextractheatodfor20minand4()minffromdiffenectproducingplaces)注:a 为检出峰数;b 为检出率/;c 为重叠峰数;d 为重叠率 /表 5 不同产地的决明子袋泡剂保温 20min 的提取液(11“20 号)的特征图谱与不同产地的决明子袋泡剂保温 40min
22、的提取液(1 10 号) 的特征图谱库的相似度比较Tab5ComparisonofthechromatogramsoftheTeabagheadtedfor20minand40min(fromdifferentproducingplaces)注:a 为相似度均值;b 为相似度阈值由表 4 可知,不同产地的决明子袋泡剂保温 40 不同产地的决明子袋泡剂保温20min 的提取液(11min 的提取液(11()号)的检出峰数为 15 个,检出 2()号)的检出峰数为 1213 个,检出率为 8()率为 100,重叠峰数为 15 个,重叠率为 100;而 86.67,重叠峰数为 1213,重叠率为88
23、.88?38?92.86.中国医院药学杂志 2008 年第 28 卷第 1 期 ChinHospPharmJ,2008Jan,Vol28,No.01由表 5 可知,以不同产地决明子袋泡剂保温 40min 提取液(110 号)建立的特征图谱库,其相似度阈值为 0.736.不同产地决明子袋泡剂保温 2Omin 提取液(1120 号)的特征图谱与特征图谱库相比较,其相似度在 0.5130.629 之间,低于不同产地的决明子袋泡剂保温 40min 提取液(110 号)的相似度阈值 0.736.可见,采用特征图谱技术可有效地控制不同产地的决明子袋泡剂在不同保温时间下质量.3 讨论色谱条件选择试验中,比较
24、了甲醇作为有机相及不同浓度磷酸的流动相,也比较了不同流速及不同的梯度方式,结果以所选定的色谱条件为最佳.以往的文献报道中均采用大黄酚为测定指标来控制决明子及其制剂的质量,但在决明子袋泡剂的特征指纹图谱中大黄酚并非为含量最高的成分且含量分布并不均匀.在 10 批决明子袋泡剂保温 4【)min 提取液中的 8 强峰中,7 批含有大黄酚,列第 5的有 1 个,第 6 的有 3 个,第 7 的有 3 个;在 10 批决明子袋泡剂保温 20min 提取液的 8 强峰中,1(】批均含大黄酚,列第 4 的有 5 个,第 5 的有 3 个,第 6均匀设计优化紫草的醇提工艺的有 2 个.而决明子袋泡剂中的高含量
25、化学成分有待进一步深入研究,以便更科学合理地阐明决明子袋泡剂的内在质量.通过表 2,表 4 可知,保温时间不同,决明子袋泡剂提取液的检出峰数,检出率,重叠峰数,重叠率则不同;通过表 3,表 5 又知,决明子袋泡剂保温 20min 提取液(1120 号)的相似度低于决明子袋泡剂保温 40min 提取液(110 号)的相似度阈值.说明保温时间对决明子袋泡剂有效成分的浸出量有较大影响.对于最佳的保温时间和有效成分浸出量之间的关系将进一步研究.参考文献:1中国药典一部s32005:98.E2张启伟,阴健 ,张俊.生,炒决明子及其煎剂中部分活性成分的比较 EJ.中草药,1996,27(2):79 81.3张启伟,阴健 ,张颖,等.决明子质控方法的研究 EJ.中国中药杂志,1996,21(11):646648.E4洪筱坤,王智华着 .中药数字化色谱指纹谱 EM.上海 :上海科学技术出版社,2(103:67108.Es孟庆化 ,刘永锁,蒋淑敏,等.色谱指纹图谱综合信息指数在中药质量控制中的应用研究 EJ.中国天然药物,2004,2(6):359364.收稿日期20070111
