1、球菌(coccus),四联球菌(tetrad),球菌(coccus),葡萄球菌(streptococcus),球菌(coccus),八叠球菌(sarcina),杆菌(bacillus),不同杆菌的大小、长短、粗细很不一致。,螺形菌(spiral bacterium),实验六 细菌的特殊染色（芽孢、鞭毛）,单毛菌,双毛菌,丛毛菌,周毛菌,一 实验目的,掌握细菌的芽孢、鞭毛染色原理及方法； 辨认细菌鞭毛和孢子的形态； 巩固无菌操作技术。,二 实验原理,芽孢染色 由于芽孢壁厚、透性低、不易着色，应当用石碳酸复红、结晶紫等进行染色菌体和芽孢囊着色，而芽孢囊内的芽孢不着色或仅显很淡的颜色，游离的芽孢呈淡
2、红色或浅蓝紫色的圆或椭圆形的圈。用着色强的染色剂孔雀绿或石碳酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的燃料经水洗后被染色，而芽孢一经染色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体便于区分。 鞭毛染色 在染色前用媒染剂进行处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛的直径加粗，然后在进行染色。,三 实验器材,1.活材料：培养2天的枯草芽孢杆菌，培养18-30小时的大肠杆菌和变形杆菌； 2.染色液和试剂 ：Tyler法染色液：复红染色液、香柏油、二甲苯、蒸馏水、5%孔雀绿水溶液、0.05%碱性复红、0.1%美蓝染色
3、液等； 3.器材： 载玻片、 擦镜纸、显微镜、接种环、载玻片、吸水纸、试管、小滴管、酒精灯、镊子等,四 实验方法步骤,（一）芽孢染色Schaeffer与Fulton氏染色法 （1）涂片：按常规方法将待检细菌制成一薄的涂片。 （2）晾干固定：待涂片晾干后在酒精灯火焰上通过23次。 （3）染色： 加染色液：加5%孔雀绿水溶液于涂片处（染料以铺满涂片为度），然后将涂片放在铜板上，用酒精灯火焰加热至染液冒蒸汽时开始计算时间，约维持15-20min。加热过程中要随时添加染色液，切勿让标本干涸。（加热时温度不能太高）。 水洗：待玻片冷却后 ，用水轻轻地冲洗，直至流出的水中无染色液为止。 复染：用蕃红液染色
4、5min。 （4）水洗、晾干或吸干。 （5）镜检：先低倍，再高倍，最后在油镜下观察芽胞和菌体的形态。 结果：芽胞呈绿色，菌体为红色。,注意事项：染色加热过程要及时补充染液，切勿让涂片干涸。,（二）鞭毛染色 硝酸银染色法,（1）清洗玻片 （2）菌液的制备及制片 （3）染色 滴加A液，染46min。 用蒸馏水充分洗净A液。 用B液冲去残水，再加B液于玻片上，在酒精灯火焰上加热至冒气，约维持0.51min（加热时应随时补充蒸发掉的染料，不可使玻片出现干涸区）。 用蒸馏水洗，自然干燥。 （4）镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜检查。 结果：菌体呈深褐色，鞭毛呈浅褐色。,（三）运动性的观察,1 制片：在干净的载玻片上滴一滴生理盐水，取一环菌液与之混合，加0.01%美蓝与之混合均匀，盖上盖玻片； 2 镜检：先用低倍镜找到目标，在用高背镜观察，可用油镜观察，但注意盖玻片的厚度。结果：有鞭毛菌做直线、波浪式或翻跟斗运动。,五 实验报告及作业,一）结果 1绘出所用材料的芽胞和菌体的形态图 2 给出鞭毛菌的形态图 二）思考 1 在芽孢染色涂片上为什么有时会出现大量游离的芽孢？ 2 芽孢和鞭毛染色中对菌龄要求有何特点？为什么？,
