1、Avermectin 粗粉的结晶工艺研究与杂质分析(1)作者：刘吉季清荣常志东，谢智张贵峰申淑锋孙兴华雷超刘会洲 【关键词】Avermectin；,高效液相色谱；,质谱；,杂质；,结晶摘要：采用高效液相色谱电喷雾串级质谱的方法对avermectin 粗粉中的杂质进行定性分析。确定了主要杂质成分为：与 B1a 结构相类似的B1b、A1a、A1b、A2a、A2b、B2a6 个组份，其中A1a、B1b、B2a 多次结晶也不易去除。随后考察了avermectin 粗粉在甲醇、乙醇、正丁醇和丙酮中的重结晶，甲醇和正丁醇对杂质的去除效果更好；乙醇与丙酮相当，但对杂质去除的选择性不同。关键词：Avermec
2、tin；高效液相色谱；质谱；杂质；结晶StudyonthecrystallizationofavermectincrudepowderanditsimpuritiesanalysisABSTRACTAvermectincrudepowderwerepurifiedbycrystallizationanditsimpuritieswereidentifiedbyHPLCESIMSMS.MainimpuritiesincrudepowderwereB1b,A1a,A1b,A2a,A2bandB2a,whichweresimilartoB1ainstructure.TheseparationofA1
3、a,B1bandB2awasverydifficultduetotheirgreatlysimilarstructurestoB1a.Recrystallizatonusingmethanol,ethanol,nbutanolandacetoneassolventsweredonerespectivelyanditwasfoundthatmethanolandnbutanolweregoodsolventsfortheseparationofimpurities.Theimpuritiescouldbeselectivelyseparatedusingmethanol or acetone.K
4、EYWORDSAvermectin;HPLC;Massspectrometry;Impurities;CrystallizationAvermectin 是十六元大环内酯类抗生素，具有很强的杀虫活性，是一种良好的杀螨虫、昆虫和寄生虫的药物，可以用于人、畜和农作物1 。作为杀虫剂，avermectin具有高效性和广谱性，它可以同时驱杀几乎所有的线虫类、昆虫类和螨虫类寄生虫，且一次用药能达到 80%100%的驱净率2，3 。Avermectin 的残毒低，有很好的杀虫选择性，是一种良好的大面积控制害虫的杀虫剂4 ，也是生产多种药物的原料，改造多产生在侧链，如 C4“、C5 和 C255 。已商品化
5、的衍生物有很多种，如：ivermectin、emamectin、doramectin、moxidectin、eprinomectin 等。Avermectin 是由除虫链霉菌Streptomycesavermitilis 产生的一组大环内酯类物质，包括结构相似的 8 种天然组分6 。根据 C5 位上取代基不同，C22 和 C23 之间的单双键差异及 C25 位上取代基的不同，分别用 A、B；1、2；a、b 组合表示，B 组分药效较 A 组分强，B1 组分较 B2 组分强，B1 组分中AvermectinsR1R2XYA1aCH3C2H5CH=CHA1bCH3CH3CH=CHB1aHC2H5CH
6、=CHB1bHCH3CH=CHA2aCH3C2H5CH2CHA2bCH3CH3CH2CHB2aHC2H5CH2CHB2bHCH3CH2CH 图 1 天然 Avermectins 的化学结构3又以 B1a 药效更好一些7 。所以 avermectin 的提纯一般针对 B1a 组分。Avermectin 是胞内产物，其生产工艺包括发酵、浸提、浓缩结晶和重结晶提纯。其中结晶是 avermectin 纯化工艺的关键，目前工业上需多次结晶才可得到较好的产品。文献中已有对 avermectin 结晶工艺的研究报道8 ，但主要是从结晶的宏观条件和设备尺度上开展的，从分子尺度上对影响晶体纯度的杂质未进行详细探
7、讨。由于 avermectin 一次结晶中杂质含量较高，成分复杂，因而研究结晶中的杂质成分以及结晶对不同杂质的去除状况，对 avermectin 的纯化工艺研究有重要意义。本文定性分析 avermectin 结晶中的杂质成分，从分析avermectin 结晶中杂质的角度，对不同结晶工艺进行了比较，分析各种杂质分离难易的原因，发现结晶溶剂对avermectin 结晶中杂质的去除有选择性，为 avermectin 生产工艺提供理论依据。1 材料方法材料 Avermectin 结晶粗粉和 avermectin 精粉均由华北制药集团爱诺有限公司提供。甲醇、乙醇、正丁醇、丙酮均为分析纯，购自北京北化精细
8、化学品有限责任公司。方法Avermectin 一次粗粉的重结晶选用冷却结晶方法，实验装置图参见文献9 。将 avermectin 粗粉重结晶三次，比较各次结晶的纯度及杂质的去除状况。乙醇为结晶溶剂，按照程序降温方法冷却结晶9 ；结晶过程中搅拌速度：150r/min，降温区间为 6521，晶体纯度采用 HPLC 分析，由面积归一化法定量。Avermectin 结晶中的杂质分析 Avermectin 粗粉重结晶一次，取结晶母液采用 HPLCESIMSMS 分析成分。HPLCESIMSMS 仪器配备二元泵，二极管阵列检测器的高效液相色谱仪，色谱柱为 C18 不锈钢柱，LCQDecaXP 离子阱质谱仪
9、。HPLC 条件流动相为甲醇水，流速 1ml/min，进样量10l，检测波长 245nm，柱温 35。ESIMSMS 条件离子源喷射电压 35kV，毛细管温度 275，夹套气，流速35ArbitaryUnits，检测方式为正离子检测。结晶溶剂对杂质的去除效果以甲醇、乙醇、正丁醇、丙酮作结晶溶剂按程序降温9的方式进行冷却结晶，考察不同结晶溶剂对杂质的去除效果。结晶过程中搅拌速度150r/min，降温区间：甲醇结晶 5521，丙酮结晶5021，正丁醇结晶：6521。晶体纯度采用HPLC 分析，由面积归一化法定量。2 结果与讨论Avermectin 粗粉的重结晶以乙醇作为结晶溶剂对avermecti
10、n 粗粉进行重结晶，HPLC 分析给出粗粉、一次重结晶、二次重结晶和三次重结晶所得晶体中 B1a 的纯度分别为 7865%、9356%、9543%和 9597%，各次重结晶所得晶体的 HPLC 分析结果如表 1 所示。B1a 组分的保留时间为17736min，由标准品的 HPLC 对照得到。结晶对某些保留时间组分的去除效果较好，例如对保留时间在 12496 和21716min 组分，一次重结晶基本可以去尽；另一些组分则通过多次重结晶亦难去除，导致多次重结晶都难以得到纯度较高的 avermectin 产品。深入研究 avermectin 的结晶，需对 avermectin 粗粉中的其他成分进行分析。（作者：3COME 未知本文来源于爬虫自动抓取，如有侵犯权益请联系 service立即删除）
