1、99mTc 示踪法初步研究注射 NGF 家兔药代动力学(1)作者：付昌文，吕天润，曹小建，刘军【摘要】目的使用 99mTc 示踪初步研究注射用 NGF 在家兔体内药代动力学。方法将 NGF 用 99mTc 标记，利用同位素示踪法和 TCA 沉淀法测得 NGF 含量与放射性计数的线性关系，并由静脉注射至家兔体内，通过上述检测方法得到不同时段血浆中微量 NGF 浓度，使用 3P87 软件分析药代动力学参数并初步分析组织分布。结果 NGF 静脉注射后的家兔体内代谢符合二隔室分布模型；按剂量 40g/kg 静注后，测得 T1/2=、T1/2=、AUC=hml。结论99mTc 具有较好的示踪效果，适用于
2、体内药代动力学研究。【关键词】99mTc-NGF；药代动力学；TCA 沉淀法【Abstract】ObjectiveTostudythepharmacokineticsofNGFinrabbitbyisotopictracing.MethodsNGFwaslabeledwith99mTc，andits-raycountswasdetectedbyisotopictracingandtrichloroaceticacidprecipitationmethod.Fromcpmof-rayandNGFcontentofsamples，thestandardcurvewasdrawnanditwasne
3、arlyawasinjectedintorabbitbodyfromvenaauris.Samplesofrabbitbloodwerecollectedindifferenttime.ThetechniquesabovewereusedtodetectNGFconcentrationinrabbitbloodanddatawereinputtedintocomputertoanalysisthepharmacokineticparameterbysoftware.ResultsThemetabolisminvivoconformsthedouble-compartmentsmodel.Wit
4、hthedoseof40g/kg，thepharmacokineticsparameterswereasthefollows：T1/2=、T1/2=、AUC=hml。ConclusionThemarkof99mTChasbettereffectonpharmacokineticresearchofnervegrowthfactor.【Keywords】99mTc-NGF；pharmacokinetics；TCA神经生长因子（NGF）是神经营养因子家族中最重要的生物活性物质，其对神经元的生长、发育、分化、再生和功能表达具有重要的调控作用。现阶段其在应用上已经公认对脑和脊髓损伤、早老性痴呆13 、
5、糖尿病周围神经性疾病4等有很好效果。发现者 StanleyCohen 和 RitaLevi-Montalcini 于 1986 年获得诺贝尔医学奖5 。有关 NGF 的血药浓度检测已有很多报道，但都比较复杂。本文将 NGF用 99mTc 标记，利用同位素示踪法和 TCA 沉淀法测得 NGF含量，从而初步研究 NGF 脂质体在家兔体内药代动力学，以期为其他相关试验及今后的临床应用提供必要的参考资料。1 材料与方法仪器与试剂仪器 GC-911 射线计数仪（中国科技大学仪器厂） ；UltrospecXX 紫外分光光度仪；DFM-96 多排放射免疫计数仪（众成电机技术公司） ；FJ-391A1 型活度
6、仪（北京放射性仪表厂） ；3P97 软件；FA1004 电子天平（上海精科天平） 。试剂 小鼠颌下腺 NGF（南京军事医学研究所提纯，纯度98%，文章另发） ；99mTcO4；亚锡（上海化学试剂三厂） ；Kieselgel60F254 硅胶板（德国 EMscience） ；柠檬酸缓冲液（南京森科医药公司） ；三氯乙酸（南京生兴生物技术公司分装） ；SephadexG-25。实验动物实验用新西兰兔。方法同位素示踪法与 TCA 沉淀法检测血浆中微量 NGF 用放射性元素 99mTc 标记 NGF，对 99mTc-NGF 用 TCA 沉淀6 ，然后对沉淀物进行 计数仪计数，数值与 NGF 的含量存在
7、线性关系，从而测定在血浆中微量 NGF 的浓度。标准曲线的制备 99mTcNGF 的制备：配制亚锡（Sn2）柠檬酸缓冲液（cit） 。取 NGF20ml（含20mgNGF） 、cit 溶液 100ml 及配制的Sn2-cit 溶液20ml，将其置于小瓶中，充入氮气 35min，即制备完药箱置于 4冰箱待标记时取出。加 10mgVitC 于 cit 溶液中，制备成 10mg/mlVitC 溶液；取出制备的药箱，在其小瓶中加高锝酸（99mTcO4） ，然后加入配制的 10mg/mlVitC 溶液，混匀。即制备完 99mTcNGF。样品经 SephadexG-25 凝胶柱分离纯化，收集各组分，测量每
8、管的 计数，合并各峰收集组分并取出 60l，加考马斯亮蓝 R-250 染色，用紫外分光光度仪测定 595nm 处的吸光度，计算 NGF 的化学量。以收集 99mTc-NGF 峰的总放射性除以上样层析时的总放射性，即得 99mTc-NGF 的标记率。99mTc-NGF 峰的总放射性除以该峰的总蛋白质量，即得比活度。纸层析法测定 99mTc-NGF 的放化纯度。配制 10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、500ng/ml 及1000ng/ml99mTc-NGF 溶液各 1 份，各吸取 20ml 于试管中，加 150l 生理盐水及 30l 兔血清，加 20三氯乙酸200l，5000rpm
9、 离心 3min。去上清，测定各试管中沉淀物放射性计数，绘制标准曲线，求回归方程及回归系数。测定方法的确证通过检测回收率及重复性试验研究证明该方法的可行性。回收率的测定：配置 99mTc-NGF 浓度为250、500、750ng/ml 各 5 份，然后按照上述方法（标本处置同标准）测定实测 99mTc-NGF 的浓度；共进行 5 次计算该方法及线性关系回收率。每次测定前同时测定标准品沉淀物的放射性计数并绘制标准曲线以去除核素衰变影响。精确度的测定：配制成浓度为 250、500、750ng/ml 的99Tc-NGF 样品各 5 份，按照上述方法（标本处置同标准）测定 NGF 浓度，每个浓度一天内
10、重复测定 5 次，计算日内相对标准偏差；每天测定 1 次，连续 5 天测定，计算日间相对标准偏差，测定当日重新标记和配制标准液。实验方法 操作当日标记 99mTcNGF，按上述方法测定放化纯度和比活度。取 5 只等重健康家兔（，雌雄各半） ，静脉注射 NGF，剂量均为 40mg/kg。快速于一侧耳缘静脉注射后，压迫止血，立即于另外一侧耳缘静脉用采血针头从近心端向远心端分别于30s、1min、3min、5min、10min、15min、30min、1h、 、2h、 、3h、及 4h 采血，采血时使用 20ml 定量毛细虹吸管吸取血样，快速将血液加入内有 1ml 生理盐水的试管中，然后再加入 20三氯乙酸，5000rpm 离心 3min。去上清，沉淀物封口保存后待统一测定。（作者：3COME 未知本文来源于爬虫自动抓取，如有侵犯权益请联系 service立即删除）
