1、复方维生素 B 注射液的 HPLC 分析中国药科大学JournalofChinaPharmaceuticalUniversity2002,33(2):16l163l61?简报?复方维生素 B 注射液的 HPLC 分析郑朝华,季一兵,陈玉英(中国药科大学分析化学教研组,南京 210038)关键词烟酰胺维生幸 B;高教液相色谱法;复方维生幸 B 注射液中囝分类号:Rgl7 文献标识码:A 文章编号:10005048(2002)020l61-04复方维生素 B 注射液主要组分为烟酰胺及维生素 Be,临床上用于防治维生索缺乏症,是良好的营养类肌肉注射类,并具有辅酶作用的维生索注射剂.目前水溶性维生素含
2、量测定方法主要为 HPLC法.但文献报道中的方法所采用的流动相比较复杂,都加入了己烷磺酸钠 0,樟脑磺酸等离子对试剂.使体系复杂,影响分离的重现性,并且离子对试剂往往比较昂贵不易得.另外,与文献报道不同,本复方注射液中不但有水溶性维生索 Be,B,烟酰胺.还有脂溶性物质卵磷脂及表面活性剂等,成分更加复杂.给分离带来了一定的困难.而本文采用C.柱,以乙腈 0.D1mol/L 硫酸钠水溶液(5:95)成功分离了各组分.该分离体系简单方便,更适用于药品质量控制中的含量测定.并对烟酰胺和维生素 B 进行了含量测定.1 仪器和药品日本岛津 LC 一 10A 高效液相色谱仪,日本岛津SPD 一 10A 检
3、测器,浙江大学 N2000 色谱工作站.烟酰胺和维生索 B 对照品及维生素 B 注射液均由徐卅 l 制药厂提供,乙腈,硫酸钠均为分析纯,水为纯净水.2 试验部分2.1 色谱条件色谱柱:LichrospherC 分析柱 .5 岬.200mm46mmID(淮阴汉邦科技有限公司);流动相:乙收稿 Et 期 2001082.通讯作者 Tel:0253379673腈 0.01mol/L 硫酸钠(5:95,用 0.1mol/L 硫酸调节 pH 值至 3.40),流速:1.0rra/roin; 检测波长:254rim;进样量 10 山;色谱图见图 1.02468101nFiglHPLCehrotogramo
4、fspl=lVitaminB6(h 一 3.00rain)2.N【c.cjam1de(h 一 486rain)2.2 干扰试验称取处方量的辅料,按“制剂含量测定项下测定,辅料几乎无色谱峰出现(见图 2).A02468lOdrainFIB2I-IPLC0fexciplentA 一vent2.3 线性试验取烟酰胺和维生索 Be 对照品适量,精密称定.加水制成每毫升中约含烟酰胺和维生索 Be 分别为0.2mg 和 2mg 的溶液作为贮备液.吸取贮备液 0.5,1.0,1.5,2.0,2.5.3.0m1 分别置于 25ml 容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀.在上述色谱条件下,l62 中国药科大学分别进样
5、 10jal,按对照品峰面积(y) 对浓度(x)进行回归,结果如下:烟酰胺的回归方程为:y 一 8.1l410aX 一941,相关系数:r=0.9999(一 6).结果表明,烟酰胺在 4.324.4g 范围线性关系良好维生索 B 的回归方程为:Y 一 6.499103X4-641,r 一 0.9998(=6).表明维生素 B 在 40.3240.1 范围内线性关系良好.2.4 稳定性考察取一样品溶液,按“含量测定 “方法项下测定,在室温条件下.分别放置 0,3,6,24,30h 后测定含量,结果表明样品溶液中的烟酰胺在 30h 内稳定,样品溶液中的维生素氐在 3h 内稳定.2.5 重复性试验同
6、一样品溶液,取 l0l 注入色谱仪,连续进样Tab1RecoveryofnJco.iltamideandvitaminB66 次,测得烟酰胺和维生素 B 按含量计算 R.SD 均小于 1,表明重复性良好2.6 中间精密度取同一批号 6 份样品,由不同实验者在不同时间及不同仪器按“含量测定 “方法项下分别测定烟酰胺和维生素 B 的含量,烟酰胺和维生素 Be 的D 分别为 0.3 和 0.4.2.7 回收率试验按烟酰胺及维生素 B 处方量的 80,100和 l20 分别精密称取对照品适量,加入处方量的空白溶液,配成模拟样品溶液,按“含量测定“ 项下方法进行测定,结果见下表2.8 样品含量测定精密吸
7、取注射液适量,用水稀释成含烟酰胺l0g/ml 的溶液作为供试品溶液 l.再精密吸取注射液适量用水稀释成含维生索 Bel00g/ml 的溶液作为供试品溶液 2.精密称取经干燥至恒重的烟酰胺对照品及维生素 Be 对照品各 l0rag,配制成含烟酰胺 10g/ml 和含维生素 BelO0g/ml 的对照品溶液,取对照品溶液及供试品溶液各 10l 注入色谱仪,记录色谱图.按外标法以峰面积分别计算烟酰胺和维生素 Be 的含量,即得.结果见下表.Tab2Rult0fsamplealysisContent.()N0.NicotinamideVitaminB3 结论与讨论3.1 流动相 pH 的影响由于 pH
8、 值可抑制烟酰胺和维生素风的解离,使其分配系数增加,流动相 pH 对保留时间和峰型等色谱行为影响较大,分别用 0.1mol/L 氢氧化钠和 0.1mol/L 硫酸调节流动相 pH3.05.00,pH小于 3.00 时,维生素 Be 的“值小于 2min,与前面的杂质峰重叠.当 pH 大于 5.00 时,烟酰胺的“值大于 9,峰拖尾严重,最终流动相最佳 pH 为 3.40.3.2 流动相中硫酸钠浓度的影响在流动相中加入电懈质 NaSO 可同时分析样品中的水溶性维生素,并可改善峰型的拖尾.由于样品色谱峰拖尾现象较为严重,而且随着硫酸钠浓度的减小有明显的改善,经分别采用不同浓度Na2SO4 多次梯度
9、试验,当流动相中硫酸钠为 0.0lmol/L 时,样品两组成的拖尾因子为 1.051.10,结果较好.2 期郑朝华等:复方维生索 B 注射液的 HPLC 分析 l6312j参考文献3李发美(FM)主编医药高垃 l 艟相色谱技术M北京: 人民卫生出版社.1992250263.43RMe 着现代实用高教液相色谱分析法:M陕西:天则出版社,199l6878陆帼蓉(LuOR). 王桂珍(wan8oz).RPHPLC 法测定复台维生衰 B 片中维生紊 B】.B2.和烟酰胺的古量 Is中国药科上学荦报 Ucbniv).1995.2B(3);177179毛舜元(MaosY) 杨观兆(Yansoz).高技禳相
10、色谱法测定多种维生索音量 Is,药物分析南志(mmJP 柚啡),1995.15(2).2529.DeterminationofNicotinamideandVitaminB6inCompoundVitaminBInjectionbyHPLCZHENGZhaoHua,JIYiBing,CHENYuYingDepartmea/ofCherawalAnalys,ChiaaPharrnacecalUniversdy,:v-anhag210038,ChinaABSTRACTAIMARPHPLCmethodwasdevelopedforthedeterminationofnicotinamideandvi
11、taminBincompoundvitaminBinjection.METHODSThesamplewasanalysedonC1 日column.ThemobilephaseisacetonitrJle 一 0.O】mol/LNazSOdsolution(595)adjustedatpH3.4bysulfateacidandthedetectivewavelengthis254nm.RESULTSAgoodlinearitycanbefoundintherangeof4.2624.36pg/mland40.26240.1pg/m1.Therecoveryofnicotinamideandvi
12、taminBewas97.53,97.87respectivelyandtheRsD()wasnotmorethan】.0.C0NCUJS10NThemethodwasfoundtobesimple.rapMandreproduciblefordeterminationofnicotinamideandvitaminB6incompoundvitaminBinjection.KEYW0RDSNicotinamideVitaminB6HPDC;CompoundvitaminB;Determinationofcontent我校 2002 年工商管理(医药方向)第二学士学位继续招生中国药科大学是我国
13、最早独立设置的药学高等学府,是我国药学教育领域中专业最齐全的多科性重点大学,是国家“211 工程“重点建设的大学之一,现隶属国家教育部 .学校位于六朝古都南京,玄武门校区坐落在风景如画的玄武湖畔,燕子矾校区则北临长江岸边的燕子矶,园.学校经国家教育部批准,从一九九六年开始举办面向社会招生的第二学士学位教育.为适应医药事业和社会发展的需要,2002 年我校继续面向全国招收工商管理(医药方向)专业第二学士学位生 50 人.咨询,联未电话:025327l319中国药科大学网址:http:/ 传真:0253302827中国药科大学学生工作处:电话:0253271422 中国药科大学教务处:电话:0253271517中国药科大学国际医药商学院:电话:O255391038539l186中国药科大学招生办公室:电话:02532713l9
