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类型人结节型皮肤基底细胞癌病变...胞株中视蛋白3的表达及功能_许佳.pdf

  • 上传人:学资料
  • 文档编号:21204195
  • 上传时间:2023-07-31
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    关 键  词:
    人结节型皮肤基底细胞癌病变..胞株中视蛋白3的表达及功能_许佳.pdf
    资源描述:

    1、 基 础 研 究 人 结 节 型 皮 肤 基 底 细 胞 癌 病 变 组 织 和 细 胞 株 中 视 蛋白 的 表 达 及 功 能许 佳,韩 宁,章 俊,兰 应 华,辜 阳 广,罗 欢 欢,杨 玉 麟,汪 宇,陆 洪 光(贵 州 医 科 大 学 临 床 医 学 院 皮 肤 病 与 性 病 学 教 研 室,贵 州 贵 阳;贵 州 医 科 大 学 附 属 医 院 皮 肤 科,贵 州 贵 阳)摘 要 目 的 探 讨 人 结 节 型 皮 肤 基 底 细 胞 癌()病 变 组 织 及 细 胞 株 中 视 蛋 白()的 表 达 及 功 能。方 法 选 取 例 结 节 型 患 者 病 灶 组 织 及 相 邻

    2、 癌 旁 正 常 组 织()分 别 作 为 病 灶 组 及 组,采 用 免疫 荧 光 染 色 法 检 测 的 表 达,及 实 时 荧 光 定 量()分 别 检 测 组 标 本 组 织 中 蛋 白 及 的 表 达;取 对 数 生 长 期 的 人 细 胞 株,分 为 对 照()组、空 白()组 及 实 验()组,并 设 计 针 对 人 的 小 干 扰 转 染 细 胞,采 用()检 测 下 调 后、及 组 及 组 的 细 胞 增 殖 活 性,采 用 迁 移 和 细 胞 划 痕 实验 检 测 下 调 后 组 细 胞 的 迁 移 能 力,采 用 流 式 细 胞 术 和 分 别 检 测 下 调 后 组 细

    3、 胞 凋 亡 数 量 及 钙 通 道 相 关 蛋 白 环 磷 腺 苷 效 应 元 件 结 合 蛋 白()、磷 酸 化()、钙 调 蛋 白 依赖 激 酶()、磷 酸 化()的 表 达。结 果 与 组 比 较,病 灶 组 组 织 中 表 达 增 高(.);下 调 后,组 细 胞 增 殖 活 性 较 组 下 降(.);下 调 后,与 组 相 比,组 细 胞 迁 移 能 力 降 低(.),细 胞 凋 亡细 胞 数 量 增 加(.),细 胞 钙 通 道 相 关 蛋 白 和 表 达 下 降(.)。结 论 在 人 结 节 型 组 织 中 高 表 达,可 调 控 人 系 细 胞 的 增 殖、迁 移 及 凋 亡

    4、,其 机 制 可 能 与钙 依 赖 蛋 白 偶 联 受 体()信 号 通 路 有 关。关 键 词 细 胞 增 殖;细 胞 凋 亡;视 蛋 白;蛋 白 偶 联 受 体;人 结 节 型 基 底 细 胞 癌;迁 移 中 图 分 类 号 文 献 标 识 码 文 章 编 号():,(,;,)()()(),第 卷 第 期 年 月 贵 州 医 科 大 学 学 报 基 金 项 目 国 家 自 然 科 学 基 金(,)贵 州 医 科 大 学 级 硕 士 研 究 生 通 信 作 者:引 用 本 文:许 佳,韩 宁,章 俊,等 人 结 节 型 皮 肤 基 底 细 胞 癌 病 变 组 织 和 细 胞 株 中 视 蛋

    5、白 的 表 达 及 功 能 贵 州 医 科 大 学 学 报,():,(),()();,;,(),();,(.),(),(),;皮 肤 基 底 细 胞 癌(,)是 一 种 以 局 部 侵 袭 为 主 的 皮 肤 恶 性 肿瘤。可 分 为 结 节 型()、浅 表型()、硬 化 型()、纤 维上 皮 型()、浸 润 型()、色 素 型(),以 及 具 有 不 同 临床 病 理 特 征 的 其 他 亚 型。的 发 病 危 险 因素 包 括 慢 性 日 光 暴 露、年 龄、免 疫 功 能 低 下、电 离 辐射、使 用 光 敏 药 物 等,其 中 慢 性 日 光 暴 露 是 最 重 要的 环 境 因 素,

    6、。黑 素 皮 质 素 受 体(,)作 为 一 种 参 与 黑 色 素 生成 的 膜 偶 联 蛋 白,早 被 证 明 与 的 发 生 具 有显 著 相 关 性。视 蛋 白(,)是 一 种 膜 蛋白,属 于 蛋 白 偶 联 受 体(,)超 家 族。是 超 家 族 中 的一 员,在 人 体 肝 脏、肺、心 脏、肾 脏 及 骨 骼 肌 等 多 种组 织 中 广 泛 分 布。近 年 来 有 研 究 发 现 在 多 种 癌 症 中 高 表 达,在 某 些 癌 症 的 发 生、发 展 中起 一 定 的 调 控 作 用。有 研 究 表 明,与 可 见 光引 起 的 色 素 沉 着 有 关,其 的 信 号 转

    7、导 时 可 作为 黑 色 素 生 成 的 负 调 节 因 子。然 而,在 基 底 细 胞 癌 中 的 潜 在 作 用 目 前 尚 不 清 楚。本 研究 探 讨 了 的 表 达 水 平 在 人 结 节 型 病 变组 织 及 癌 旁 正 常 组 织 是 否 存 在 不 同,它 对 人 系 细 胞 的 增 殖、迁 移 及 侵 袭 是 否 具 有 调 节作 用,以 及 相 关 的 调 节 机 制。材 料 与 方 法.实 验 材 料.细 胞 和 组 织 细 胞 系 从 细胞 库(货 号)购 买;选 取 本 院 例 结 节型 基 底 细 胞 癌 患 者 的 癌 组 织 及 距 病 灶 的 癌旁 正 常 组

    8、 织(,)标 本 分 别 为 病 灶 组 与 组,储 存 于 冰 箱,研 究 已 获 医 院 临 床 研 究 伦 理 委 员 会批 准()及 患 者 知 情 同 意。.主 要 试 剂 与 仪 器 胎 牛 血 清(,;美 国),二 脒 基 苯 基吲 哚(,)、抗 荧光 淬 灭 封 片 剂(上 海 碧 云 天),高 糖 培 养 基(,)、减 血 清培 养 基(,;美 国),引 物(上 海 生 工),.结 晶 紫染 色 液、实 时 荧 光 定 量(期 许 佳 等 人 结 节 型 皮 肤 基 底 细 胞 癌 病 变 组 织 和 细 胞 株 中 视 蛋 白 的 表 达 及 功 能,)试 剂 盒、高 效放

    9、 射 免 疫 沉 淀 法(,)组 织 细 胞 裂 解 液(北 京),(美 国 赛 默 飞),兔 抗 人 抗 体、兔 抗 人 抗 体、兔 抗 人 抗 体、兔 抗 人 抗 体、兔 抗 人 抗 体、环 磷 腺 苷 效 应 元 件结 合 蛋 白(,)单 克 隆 抗 体、磷 酸 化()单 克隆 抗 体、钙 调 蛋 白 依 赖 激 酶(,)单 克 隆 抗 体、磷 酸 化()单 克 隆 抗 体、羊 抗 兔二 抗、羊 抗 鼠 二 抗(中 国 公 司),()检 测 试 剂 盒(日 本),小 室(美 国),双染 法 细 胞 凋 亡 检 测 试 剂 盒(上 海 七 海 复 泰);多聚 甲 醛(国 药 集 团 化 学

    10、 试 剂),流 式 细 胞 仪(美 国),酶 标 仪 和 曝光 仪 成 像 系 统(美 国),蛋 白垂 直 电 泳 仪(美 国),扩 增 仪(美国)。.实 验 方 法.标 本 处 理 将 组 与 病 灶 组 患 者 标本 分 别 置 于 研 钵,加 液 氮,反 复 多 次 用 研 磨 器 将 其研 磨 呈 粉 状,收 集 于 管 中。.组 织 免 疫 荧 光 取“.”项 下 组 标 本固 定 于 甲 醛,石 蜡 包 埋,石 蜡 切 片 脱 蜡 至 水,置于 抗 原 修 复 液 中 微 波 修 复 抗 原,血 清 封 闭,加 一 抗(抗 体),覆 盖 切 片 上 的 组 织,过 夜,加 相 应

    11、种 属 荧 光 二 抗(山 羊 抗 兔)于 孵 育,加 染液 室 温 避 光 染 色,加 抗 荧 光 淬 灭 剂,盖 玻 片 封片,荧 光 显 微 镜 下 观 察,蓝 色 为,绿 色为。.细 胞 培 养 取 人 细 胞 系 于 含 和 双 抗 的 培 养 液,的 培 养 箱 培 养;隔 天 换 液,培 养 细 胞 数 量 增 殖 到培 养 瓶 底 部 面 积 的,含.胰 蛋 白 酶 的 胰 酶 消 化 液 消 化 细 胞,待 细 胞 从 壁 上 脱离,终 止 消 化。.实 验 采 用 试 剂 提 取“.”项 下 组 标 本 和“.”项 下 细胞 中 的 总,再 逆 转 录 为 互 补(,)。设

    12、 置 熔 解 曲 线 反 应 程 序,采 用熔 解 曲 线 分 析 引 物 特 异 性 及 与 该 反 应 体 系 的 适 宜条 件,内 参 为 甘 油 醛 磷 酸 脱 氢 酶(,),根 据 课 题 组前 期 研 究 设 计 引 物 序 列,的 表 达 水平 按 值 取 对 数 值 后 进 行 分 析;反 应 条 件 为 孵 育(变 性),孵 育(退 火)、孵 育(延 伸)、退 火 与 延 伸 重 复 个 循环。.蛋 白 印 迹 法()实 验 取“.”项 下 组 标 本 和“.”项 下 细胞 置 于 冰 上,组 织 细 胞 裂 解 液(,):苯 甲 基 磺 酰 氟(,)按 的 配 比 比 例

    13、配 置适 量 裂 解 液 进 行 蛋 白 裂 解,利 用 聚丙 烯 酰 氨 凝 胶 电 泳(,)将 目标 蛋 白 分 离,再 转 移 至 聚 二 偏 氟 乙 烯(,)膜 上,封 闭 液 封 闭,兔 抗 人的 一 抗 工 作 液 孵 育 过 夜,鼠 抗 兔 的 二 抗 工 作 液室 温 孵 育;化 学 发 光 试 剂(,)下 进 行 拍 照、曝 光。采 用 测量 条 带 灰 度 值。.靶 向 沉 默 细 胞 中 的 待“.”项下 细 胞 生 长 至 培 养 板 板 底 面 积 融 合 时 备 用。将 细 胞 密 度 调 至 个,分 为 对 照()组、空 白()组 及 实 验()组,于 孔 板 中

    14、 分 别 加 及 培 养 基,采 用 使 小 干 扰 转 染 细 胞,其 中实 验 组 小 干 扰 浓 度 为,继 续 培 养,消 化 处 理 细 胞。.实 验 取“.”项 下 细 胞 以 个 孔 的 密 度 均 匀 地 接 种 于 孔 培 养 板 中,待细 胞 贴 壁 后,用 工 作 液转 染 细 胞,分 别 在、及 加 试 剂,放 回 细 胞 培 养 箱 培 养,处 检 测 吸光 度 值;每 组 设 置 个 复 孔,以 保 证 实 验 精 确 性。.迁 移 实 验 取“.”项 下 细 胞用 无 血 清 培 养 基 重 悬,使 细 胞 浓 度 为 个,在 孔 板 内 每 孔 加 入 含 的

    15、培 养 基,将 小 室 放 入孔 板 内,消 化 处 理 细 胞,无 血 清 培 养 基 重 悬,使 细 胞 浓 度 为 个,每 个 小 室 内 加 入 细 胞 悬 液,培 养 以 上,取 出 小 室,棉 签 擦拭 上 室 细 胞,多 聚 甲 醛 固 定,.结 晶 紫 染 色,拍 照。贵 州 医 科 大 学 学 报 卷.细 胞 划 痕 实 验 取“.”项 下 细 胞 以 孔 的 密 度 均 匀 地 接 种 在 孔 板 上,加 培 养 基 培 养,待 细 胞 长 满 整 个 孔 板 时,枪 头 垂 直 孔 板 划 线,吸 弃 培 养 基,磷 酸 缓 冲盐 溶 液(,)冲 洗 划 下 的 细胞,放

    16、 培 养 箱 中 培 养;显 微 镜 下 拍 照,分 别 检 测 于 划痕 后、及 观 察 细 胞 的 划 痕 宽 度。每 组 设置 个 复 孔 以 上。.流 式 双 染 法 细 胞 凋 亡 检 测 用 流 式 离 心 管 收 集“.”项 下 转 染 细 胞 的 上 清 液,利 用.的 胰 酶 消 化 细 胞,收 集 消 化 好 的 细 胞 加 入 上 清 液 离 心,重 悬细 胞,再 用 重 悬 细 胞,再加 入 并 用 移 液 器 吹 匀,在 室温 下 避 光 孵 育,加 染 色 液 混 匀,冰浴 避 光 放 置,内 用 流 式 细 胞 仪 检 测。显 示 的 是 绿 色 荧 光,代 表

    17、凋 亡 的细 胞。.统 计 学 分 析数 据 处 理 和 分 析 使 用.软件。所 有 实 验 均 重 复 次 以 上;数 据 以 均 数 标 准差()表 示,用 检 验 统 计 分 析;.为 差异 有 统 计 学 意 义。结 果.组 织 中 的 表 达免 疫 荧 光 检 测 结 果 显 示,在 组 与病 灶 组 中 均 有 表 达;和 结 果显 示,与 组 比 较,病 灶 组 患 者 病 灶 组织 中 蛋 白 和 表 达 增 高(.)。见 图。注:为 免 疫 荧 光 检 测 结 果(),绿 色 为,蓝 色 为;、分 别 为 蛋 白 的 检 测 结 果 和 定 量 结 果;为 表 达 量,()

    18、与 组 比 较,.。图 病 灶 组 和 组 组 织 中 的 表 达.细 胞 中 的 表 达采 用 与 分 别 检 测 人 细 胞 系 中 的 蛋 白 与 水 平,结 果表 明,与、及 比 较,细 胞 系 中 的 蛋 白 和 水 平 最 高(.)。见 图。期 许 佳 等 人 结 节 型 皮 肤 基 底 细 胞 癌 病 变 组 织 和 细 胞 株 中 视 蛋 白 的 表 达 及 功 能注:、分 别 为 蛋 白 的 检 测 结 果 和 相 对 定 量 结 果,为 相 对 表 达 量;()与 比 较,.;()与 比 较,.;()与 比 较,.;()与 比 较,.。图 人 细 胞 株 中 蛋 白 和 的

    19、 表 达.下 调 后 细 胞 中 的 表 达小 干 扰 沉 默 人 细 胞 系 中 的 后,和 实 验 结 果 显 示,与 组、组 比 较,组 细 胞 中 的 蛋 白 和 表 达 下 降(.)。见 图。注:、分 别 为 蛋 白 的 表 达 和 定 量 结 果,为 表 达 量;()与 组 比 较,.,()与 组 相 比,.。图 下 调 后 各 组 人 细 胞 株 中 蛋 白 和 的 表 达.细 胞 增 殖 活 力 实 验 结 果 表 明,与 组 比 较,下调 后 时 细 胞 组 增殖 水 平 出 现 下 降(.)。见 图。.细 胞 迁 移 能 力细 胞 划 痕 实 验 结 果 显 示,与 组 相

    20、 比,下 调 后 组 细 胞 迁 移能 力 下 降(.);迁 移 实 验 结 果 显 示,与 组 相 比,干 预 后 时 组 细 胞 迁 移 数 量 减 少(.)。见 图。.细 胞 的 凋 亡下 调 后 流 式 细 胞 仪 检 测 细 胞 凋 亡 情 况,结 果 显 示,与 组 比 较,下 调 后 组 中 凋 亡 细 胞 数 量 增 加(.)。见 图。注:()与 组 比 较,.。图 下 调 后 各 组 人 细 胞 株 细 胞增 殖 水 平 的 变 化 贵 州 医 科 大 学 学 报 卷 注:、分 别 为 细 胞 划 痕 实 验 检 测 结 果 及 定 量 结 果,、分 别 为 迁 移 实 验

    21、检 测 结 果 和 定 量 结 果;()与 组 比 较,.。图 下 调 后 各 组 人 细 胞 株 的 细 胞 迁 移 和 划 痕 实 验(结 晶 紫 染 色,)(,)注:、分 别 为 流 式 细 胞 术 的 检 测 结 果 和 定 量 结 果;()与 组 比 较,.。图 下 调 后 各 组 人 细 胞 株 的 细 胞 凋 亡.钙 依 赖 信 号 通 路 相 关 蛋 白 的 变 化 通 过 实 验 检 测 钙 通 路 的 相 关 蛋 白、及 的 表 达,结果 表 明,下 调 后,与 组 相 比,组 人 细 胞 株 中 和 蛋 白 表 达 下 降(.)。见 图。期 许 佳 等 人 结 节 型 皮

    22、 肤 基 底 细 胞 癌 病 变 组 织 和 细 胞 株 中 视 蛋 白 的 表 达 及 功 能注:、分 别 为 钙 通 路 相 关 蛋 白 的 检 测 结 果 和 定 量 结 果;()与 组 比 较,.。图 下 调 后 各 组 细 胞 株 中 钙 通 路 相 关 蛋 白 的 表 达 讨 论 包 括、及,是 一 类 光 感 受 器,属 于 超 家 族,广 泛参 与 细 胞 的 增 殖、分 化、迁 移。既 往 研 究 中 被 证 实 在 多 种 癌 症 中 起 到 调 控 作 用,等 研 究 表 明 在 介 导 雌 激 素 和 他 莫 昔 芬诱 导 的 子 宫 内 膜 癌 细 胞 的 增 殖 和

    23、 侵 袭 中 起 到 了 一定 作 用;张 瑞 华 等 研 究 认 为 基 因 表 达对 皮 肤 鳞 状 细 胞 癌(,)蛋 白 激 酶(,)信 号 通 路 及 细胞 侵 袭 能 力 具 有 一 定 的 影 响。作 为 家 族 中 的 一 员,在 肝 癌、肺癌 及 结 肠 癌 等 多 种 癌 症 中 发 挥 重 要 作 用。有 研 究认 为,能 通 过 调 节 细 胞 凋 亡 通 路,从 而 使 肝癌 细 胞 对 氟 尿 嘧 啶 治 疗 敏 感,主 要 机 制 是 过 表达 后 使 磷 酸 化 蛋 白 激 酶(,)和 细 胞 淋 巴 瘤 蛋 白 相 关 蛋 白(,)比 值 抗 凋 亡 途 径

    24、失 活;等 研 究 显 示,可 以 促 进 肺 腺 癌(,)中 的 上 皮 间 充 质 转 化(,)和 肿 瘤 转 移;已 有 研 究 提示,作 为 光 受 体,可 能 是 临 床 上 结 肠 癌 的 一个 重 要 治 疗 靶 点,它 首 先 证 实 了 在 结 节 型 病 灶 组 的 表 达 高 于 组,为 进 一 步 探 索 表 达 变 化 对 的 影 响,接 下 来 利 用 小 干 扰 靶 向 沉 默 人 细 胞 中 的,细 胞 增 殖活 性、迁 移 能 力、凋 亡 细 胞 数 量 都 发 生 了 明 显 变化。这 些 结 果 均 表 明 可 能 在 的 发 生中 起 到 了 推 动 作

    25、 用。关 于 调 控 细 胞 的 增 殖、迁 移 及 凋 亡 能 力的 机 制,已 有 研 究 显 示,的 发 生 与 遗 传 存 在 一定 相 关 性,其 中 基 因 多 态 性 与 基 底 细 胞 癌 的风 险 之 间 存 在 一 定 遗 传 联 系,且 往 往 与 皮 肤 颜 色 较深 的 人 群 相 关 性 更 大。基 因 编 码 的 蛋 白 是 一 种 参 与 黑 色 素 生 成 的 蛋 白 耦 合受 体,基 因 变 异 可 见 于 非 黑 色 素 瘤 皮 肤 癌(,)、日 光 性 角 化 病及 明 显 的 弹 力 纤 维 增 生 症 患 者。此 外,发生 的 高 风 险 还 与 涉

    26、 及 刺 鼠 信 号 蛋 白 基 因(,)和 酪 氨 酸 酶 相 关(,)基 因 的 单 核 苷 酸 多 态 性 有关,这 些 基 因 都 与 黑 色 素 激 素 调 节 有 关。既往 研 究 显 示,在 调 节 的 信 号 转 导 时 可作 为 黑 色 素 生 成 的 负 调 节 因 子。另 外 有 研 究 表明,可 在 黑 素 细 胞 内 储 存 中 驱 动 钙 动 员 并 参与 下 游 信 号 级 联 反 应,且 是 钙 通 道 中 的 关键 酶,的 激 活 会 导 致 的 磷 酸 化,在 介 导 环 磷 酸 腺 苷(,)下 游 的 活 化 中 发 挥 了 一 定 贵 州 医 科 大 学

    27、 学 报 卷 作 用,并 且 是 的 主 要 下 游 靶标,。还 有 研 究 显 示,紫 外 线 诱 导 的 活 性 氧(,)主 要 通 过 丝 裂 原 活化 蛋 白 激 酶 激 活 蛋 白(,)信 号 通 路上 调 基 质 金 属 蛋 白 酶(,)的 表 达。本 课 题 组 前 期 结 果 也 表 明,钙依 赖 性 信 号 通 路 暴 露 于 紫 外 线(,)后,是 负 责 上 调 正 常 人 真 皮 成 纤 维细 胞(,)、及 的 关 键 传 感 器。因 此 可 以 推 测,是 否 也 是 通 过 钙 通 道 进 而 调控 基 底 细 胞 癌 细 胞 的 增 殖、迁 移 及 凋 亡 能 力

    28、。因此,本 研 究 采 用 检 测 了 钙 通 道 相 关 蛋白、及,结 果 表明,下 调 后 和 表 达 下 降。这 表 明 可 能 正 是 通 过 钙 依 赖 信 号 转 导 通 路影 响 了 下 游 和 的 磷 酸 化,从 而 影 响细 胞 的 迁 移、增 殖 以 及 凋 亡。综 上,本 研 究 主 要 探 讨 了 在 中 的表 达 及 其 功 能,结 果 表 明 在 人 结 节 型 病 灶 中 高 表 达,可 能 通 过 钙 依 赖 信 号 通 路 实现 调 控 人 细 胞 的 增 殖、迁 移 及 凋 亡。但 因 本研 究 组 织 样 本 量 较 小,可 能 致 使 研 究 有 一 定

    29、 的 偏倚。此 外,究 竟 是 如 何 通 过 钙 通 道 参 与 调 控 细 胞 增 殖、迁 移 及 凋 亡 的 具 体 机 制 目 前 尚 不清 楚,有 待 进 一 步 的 研 究。参 考 文 献,:,():,():,:,():,:,():,:,():,():,:,():,():,:,:,():,():,():,():,():,():,:期 许 佳 等 人 结 节 型 皮 肤 基 底 细 胞 癌 病 变 组 织 和 细 胞 株 中 视 蛋 白 的 表 达 及 功 能,():,():,():,():,():张 瑞 华,杨 海 平,刘 彬 沉 默 基 因 表 达 对 皮 肤 鳞状 细 胞 癌

    30、细 胞 系 信 号 通 路 活 化 及 细 胞 侵 袭的 影 响 中 华 细 胞 与 干 细 胞 杂 志,():,():,():,:,():,:,():,():(收 稿,修 回)中 文 编 辑 严 征 英 文 编 辑 赵 毅(上 接 第 页)滕 卫 平,单 忠 艳 根 据 年 美 国 糖 尿 病 学 会 标 准 诊断 中 国 糖 尿 病 的 患 病 率:全 国 横 断 面 研 究 英 国 医学 杂 志 中 文 版,():李 琪,李 英 卓 糖 尿 病 性 白 内 障 患 者 血 清 微 量 元 素 的变 化 医 学 信 息,():孙 威 东 北 地 区 老 年 人 血 清 微 量 元 素 水

    31、平 与 型 糖 尿病 及 其 慢 性 并 发 症 相 关 性 研 究 长 春:吉 林 大学,潘 春 燕,张 频,宋 寅 生,等 电 感 耦 合 等 离 子 体 质 谱 法测 定 血 浆 和 血 清 中 种 微 量 元 素 理 化 检 验 化学 分 册,():孙 传 强,王 景 艳,龚 子 珊,等 直 接 稀 释 进 样 石 墨 炉原 子 吸 收 光 谱 法 测 定 人 血 清 中 七 种 微 量 元 素 理化 检 验 化 学 分 册,():潘 清 容,邓 毛 子 微 量 元 素 在 糖 尿 病 治 疗 方 面 的 研 究进 展 湖 北 科 技 学 院 学 报(医 学 版),():,():景 长 英 型 糖 尿 病 与 微 量 元 素 锌 和 铜 的 关 系 研 究 河 北 医 药,():,():赵 世 杰,王 文 荣 锌 缺 乏 与 糖 尿 病 肾 病 的 研 究 进 展 临 床 与 病 理 杂 志,():(收 稿,修 回)中 文 编 辑 严 征 英 文 编 辑 乐 萍 贵 州 医 科 大 学 学 报 卷

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