1、对乙酰氨基酚对发热大鼠下丘脑中前列腺素 E2 受体的影响中华中西医学杂志 ChinaandforeignMedicalJournal2006 年第 4 卷第 9 期症状明显缓解,心绞痛发作次数减少,程度减轻及持续时间缩短,心电图段有显着恢复,从而较大程度地缓解了心绞痛症状,且无明显不良反应,安全可靠,具有临床应用价值.故对冠心病(CHD)伴高粘滞血症患者除一般抗心绞痛处理外,应同时加用黄芪注射液与复方丹参注射液抗血小板聚集药物,从而抑制血栓形成,改善临床症状,提高疗效.参考文献1.国际心脏病学会和协会及 WHO 命名标准化联合专题会 .缺血性心?5?脏病的命名及诊断标准.中华新血管病杂志,19
2、81,9(1):75.2.董振行,关淑敏等.丹参防制动脉硬化的机制.心肺血管病杂志,1993,(12):1213.辜志强,增旭初,易春涛等,丹参对冠心病患者血清脂质过氧化物及超氧化物岐化酶的影响.1996,16(5):287.4.包铭.复方丹参对冠心病患者血液流变学影 n 向.实用中西医结合杂志,1992,5(1):145.唐章全,傅荣周,张梅林等.临床实用中药手册,2003,(3):541.(收稿日期:20o6 一 O518 责任审校:高贤亮)对乙酰氨基酚对发热大鼠下丘脑中前列腺素 E2 受体的影响何惠刘华钢庞辉朱丹【摘要】目的观察对乙酰氨基酚对发热大鼠下丘脑中前列腺素 E2 受体EP.,E
3、P4mRNA 表达的影响 ,进一步探讨对乙酰氨基酚的新作用靶点和解热机制.方法健康成年雄性 sD 大鼠 24 只,随机分为3 组:正常组;发热组;对乙酰氨基酚组,8 只/组.发热组与对乙酰氨基酚组大鼠皮下注射 20%酵母混悬液(10ml/kg)造发热模型;造模 1h 后,对乙酰氨基酚组按0.6g/kg 灌肠给药,发热组则灌肠给予等量生理盐水 ;给药后 4h 取大鼠下丘脑组织备用.用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组大鼠下丘脑中 EP,EP4 受体 mRNA 表达的相对差异 .结果: 与发热组比,对乙酰氨基酚组的 EP,皿受体 mRNA 相对表达量减少(P0.05 或 P0.01).结论对乙酰氨基
4、酚能抑制发热组大鼠下丘脑中前列腺素 E 受体,EP4mRNA 的表达.关键词对乙酰氨基酚前列腺素 E 受体发热【文献标识码】A【文章编号172s 一 3ass(2oo6)o900503EffectsofacetaminophenonprostaglandinE2receptorsinthefebrilerathypothalanlusHeHuiLiuHuagangPangHuiZhuDan【AbstractMMToinvestigatetheeffectsofaeetaminophenontheexpressionofprostaglandinE2receptorsEP1andEP4mRNAi
5、nthefebrilerathypothalamusMethodsTheexperimentwasconductedattheCentralLaboratoryofGuangxlMedicalUniversityfromSeptember2005toMarch2006.Totally24HealthymaleWistarrats,weredividedrandomlyinto3groups:normalcontrolgroup(n=8),fevergroup(n=8),acetaminophengroup(n=8).Exceptthecontrolgroup,allratswereinject
6、ed20%suspensionofyeasthypodermically(10ml/kg).Onehourlater,thecoloclysisingdm 铲wereadministeredrespectively.Takenoutthehypothalamustissueoftheratat4hoursafteradministeredandstoredat 一80oC.ExaminedtheexpressionofprostaglandinEP1andEP4receptorsmRNAbytherealtimefluorescencequantitativepolymerasechainre
7、action.ResultsInfevergroup,therelativequantificationofEP1andEP4receptorsmRNAexpressionwere0.880.18and2.220.27,andthatwere0.330.05and1.450.21inaeetam/nophengroup.Comparedwiththefevergroup,theexpressionofprostaglandinEPland 矾receptorsmRNAintheacetaminophengroupweremarkedlylower(P0.05.ConclusionAcetami
8、nopheninhibittheexpressionofEP1andEP4mRNAinfebrileratshypothalamus.对乙酰氨基酚是常用的解热镇痛药之一,属非甾体类抗试剂盒(美国 MB1);SYBRGreenqPCR 试剂盒(美国 DyNAmo);炎药物,这类药物公认的作用机制主要是通过抑制前列腺素对乙酰氨基酚灌肠液(长沙市泰宝制药). 仪器:PTC20 多通(PGs)合成酶一环氧酶(COX)的活性,减少 PGs 的合成而发挥道 PCR 扩增仪(美国);icycleriQ 型实时荧光定量 PCR 扩解热作用的,前列腺素 E2 则是引起发热的最重要的前列腺增仪 (美国 BioRa
9、d).素之一 l1】.非甾体类抗炎药物除此之外的其它作用靶点和 2 方法解热机制少有报道.1 材料1.1 实验动物:实验于 200603130 在广西医科大学中心实验室完成.动物:健康成年雄性 sD 大鼠(由广西医科大学实验动物中心提供,动物合格证:SCXK 桂 20030003)24 只,体质量 350400g,清洁级.1.2 仪器和试剂:RNA 抽提试剂盒(上海华舜);cDNA 合成作者单位:530021 广西医科大学生理学教研室作者单位:530021 广西医科大学药理教研室何惠,女,(1970 一), 硕士,讲师.刘华钢,(1956 一), 教授,博士生导师,研究方向:新制剂与新剂型.2
10、.1 实验分组:将 24 只 sD 大鼠随机分为 3 组:正常组;发热组;对乙酰氨基酚组,8 只/组.2.2 造模及给药:发热组与对乙酰氨基酚组大鼠皮下注射20%酵母混悬液(10ml/kg)造发热模型.造模 1h 后,对乙酰氨基酚组按 0,6g/kg 灌肠给药,发热组则灌肠给予等量生理盐水.2.3 取材:各组大鼠于灌肠给药后 4h 被处死,以灰结节和视?6?中华亘学杂志 ChinaandforeignMedicalJournal2006 年第 4 卷第 9 期交叉的中心点为标志取下丘脑组织,置液氮速冻后一 80保存.2.4eDNA 合成 :按 RNA 抽提试剂盒说明提取下丘脑组织总RNA,用紫
11、外分光光度计测定 A260am 及 A280am 值来检测RNA 浓度及纯度.取 RNA3vg 按试剂盒说明进行 eDNA 合成.2.5 实时荧光定量聚合酶链反应_J:引物设计:根据GeneBank 中发表的前列腺素 E(PGE)的受体 EP,EP4 及内标B 一肌动蛋白基因的全序列,按荧光定量 PCR 引物设计的基本原则,用 PrimerPrimer2.0 软件设计引物,序列如下:B 一肌动蛋白上游 5一 AACACCCCACCCATCTACG 一 3,下游5一 GACGACCATAACCACCACAACC 一 3,产物长 295bp;EPI 受体上游 5一 GAGAACGCAGGTCCCG
12、ATG 一 3,下游 5一 GACGACCATAACCACCACAACC 一 3,产物长 232bp;EP4 受体上游 5一 GCCTCAGTGACTTICGCCG 一 3,下游 5一 GTCTCTGCCAAGTCGTGTCG 一 3,产物长 216bp.反应条件:95预变性 2min;95变性 10s 一 62 退火15s 一 72延伸 15s,共 40 个循环,72延伸 5min.按 SYBRGreenqPCR 试剂盒的要求,在配好的混合液(含改良的 TbrDNApolymerase,SYBRGreenI,PCRbuffer,5mMMgC12 及含有dUTP 的 dNTP 混合物)中加入
13、eDNA 模板及引物,进行目的基因和内参基因的同步扩增,在 72延伸期读板,扩增结束后做熔解曲线分析以确定特异性.2.6 实验结果计算:用 2 一 AACT 方法进行目的基因表达的相对定量】,即发热组及对乙酰氨基酚组相对于正常组mRNA 表达的倍数可用下列公式计算:amountoftarget=2 一AACI;式中的一CT= 一(ACT.qACT.eb), 而ACT.q=(CT.qCT.r),ACT.cb=(CT.cbCT.r);CT.q 一一指各处理组中目标基因分子扩增达阈值时的循环数;CT.cb 一一指正常组中目标基因分子扩增达阈值时的循环数;Cq.r 一一指各组内标基因分子扩增达阈值时的
14、循环数.将实时荧光定量 PCR 扩增仪检测到的 C 丁值代入上式,计算出发热组及对乙酰氨基酚组 rnRNA 的相对表达含量.2.7 统计分析:由第一作者采用 SPSS10.0 软件包进行方差分析,数据以s 表示,组间比较用 q 检验,P0.05 表示差异有显着意义.3 结果对乙酰氨基酚对发热大鼠下丘脑中 EP,EP4 受体 mRNA表达的影响见表 1与发热组比较,*P0.05,*P0.014 讨论发热是指机体在致热原的作用下,体温调节中枢的调定点上移而引起的调节性体温升高,并伴有功能和代谢改变的一种病理过程.致热原能刺激细胞因子的产生,这些细胞因子作用于靠近视前区下丘脑前部(PO/AH)的下丘
15、脑终板血管区(0VLT)时,能使该区毛细血管外的巨噬细胞,小胶质神经胶质细胞等产生 PcE2,然后 PGE2 透过室管膜细胞层进入 PO/AH 的脑组织,直接或间接作用于 PO/AH 的温度敏感神经元,与相应的受体结合,改变其放电频率,提高体温调定点,使体温升高.因此,抑制 PcE2 合成和释放的物质则能抑制发热反应,对乙酰氨基酚的解热作用机制主要就是抑制从一 PcE2 级联反应中最重要的 PG 合成酶一环氧酶 (COX)的活性,阻止花生四烯酸(从)转化为 PGs 而发挥解热作用的.有研究表明(8), 发热引起 PcE2 升高的同时,其相关受体的 mRNA 表达电出现相应的升高,那么对乙酰氨基
16、酚在减少 PGE2 的同时,极有可能会影响到其相应受体 mRNA 的表达.从本实验结果看,发热组大鼠下丘脑中 EP1 受体及 EP4受体 mRNA 的相对表达量明显较高,说明在发热期间 ,EP,受体及 E 受体的 mRNA 表达增多,而对乙酰氨基酚能抑制这种增多,这提示对乙酰氨基酚可能存在着新的作用靶点.有研究认为 J,前列腺素 E 受体的表达受一些炎症因子的调控,而 PcE2 本身又是一种炎症因子,因此,对乙酰氨基酚是直接作用于前列腺素 E 受体基因表达调控环节,还是间接通过影响炎症因子的合成来影响前列腺素 E 受体基因的表达 ,都还有待证实.本实验所表现的对乙酰氨基酚抑制发热组大鼠下丘脑中
17、前列腺素 E 受体 EP,EP4mRNA 的表达,进一步提示了对乙酰氨基酚有可能通过减少受体的合成,使 PGE2与受体结合后所引起的产热效应减弱,从而达到解热的作用,这可能也构成了对乙酰氨基酚解热机制的一部分.综上所述,对乙酰氨基酚能有效地抑制发热组大鼠下丘脑中前列腺素 E 受体 EP.,EmRNA 的表达,提示对乙酰氨基酚存在有与解热作用有关的新的作用靶点,这为非甾体类抗炎药的解热机制提供了新的补充,并为临床更好地运用这类药物提供了一定的理论根据.参考文献1.VaneJR,BootingRM.Mechanismofactionofnonsterio.talantiinflamnmtorydr
18、ugs.AmJMed,1998,104(3A):22.LiS,GoorhaS,BallouLR,eta1.1ntracerebroventricularinterleukin 一 6,maerophageinflammatoryproteinland1L 一 18:pyrogenicandPG 磁一mediatedBrainRes,2003,1992(1):76843.SehraittgenTD,ZakmjsekBA,MillsAG,eta1.QuantitativerevemetranscriptionpolymerasechainreactiontostudyrrlRNAdecay:com
19、parisonofendpointandrealtimemethods.AnalBiochem.2000.10,15;285(2):1942044.张蓓,沈立松.实时荧光定量 PCR 的研究进展及其应用.国外医学临床生物化学与检验学分册,2003,24(6):327 3295.利用实时定量 PCR 技术通过 2 一Cr 方法分析相对基因表达差异.东胜创新技术通讯.实时荧光定量 PCR 专辑,2004.4:496.SehmittgenTD,JiangJ,LiuQ,eta1.Ahi 曲一 throughputmethodtomonitortheexpressionofmicmRNAprecurso
20、rs.NucleicAcidsRes.2004,2,25.32(4):1437.DinarelloCA,CannonJG,WolffSM.eta1.Newconceptsontle中华中西医学杂志 ChinaandforeignMedicalJournal2006 年第 4 卷第 9 期pathosenesisoffever.RevInt“Dis,1998,10:1688.OkaT,OkaK,ScammellTE.RelationshipofEP(14)prostaglandinreceptorswithrathypothalamiccellgroupsinvolvedinlipopolysa
21、ccharidefeverresponses.JCompNeuro1.2OOO,428(1):20329.Arakawa,T.,0.Laneuville,C.A.Miller,eta1.Prostanoidreceptorsof?1?marineNIH3T3andRAW264.7cells:structureandexpressionofthemarinepmstaglandinEP4receptorgene.J.Bio1.Chem.1996.271:2956929575(收稿日期:20060627 责任审校:赵小庆)低剂量激素替代治疗对绝经后妇女血清同型半胱氨酸及丙二醛水平的影响吴海燕余进进
22、【摘要】目的观察低剂量激素替代治疗(HRT)对绝经后妇女血清同型半胱氨酸(Hcy)及丙二醛(MI)A)的影响,进一步探讨其对绝经后妇女心血管系统的影响.方法选取本院围绝经期门诊 62 例绝经后妇女作为研究对象.其中 30 例已接受HRT 作为长期治疗组,另 32 例从未接受 HRT 的绝经后妇女作为对照组.治疗组,对照组抽取肘静脉血,测定空腹血清 Hcv 水平及 MI)A 水平,接受 HRT6 个月后,空白对照组 6 个月后再各抽取肘静脉血一次,测定空腹血清 Hcy 及 MDA.结果接受HRT6 个月前后,治疗组 Hcy 水平分别为(10.12.2),(9.82.3)pmol/L,对照组 Hc
23、y水平分别为(11.82.5),(11.62.6)/unol/L,治疗组前后比较,差异显着(P0.05),对照组前后比较无显着性差异(P0.05).治疗组 MDA 水平分别为(5.0181.9),(4.1131.4)nmol/L,对照组 MDA 水平分别为(5.1362.0),(5.0772.1)nmol/L,治疗组前后比较,差异显着(P0.05),对照组前后比较无显着性差异(P0.05).结论应用 HRT 可降低绝经后妇女 Hcy及 MI)A 水平关键词激素替代治疗绝经后妇女同型半胱氨酸丙二醛【文献标识码】B【文章编号17283655(2006)0900702Theeffectoflower
24、doseshormonereplacementtherapyonserulllhomocysteineinpostmenopausalwomen耽舶 iyanYuJinjin【AbstractObjectiveToobservetheeffectofhormonereplacementtherapy(HRT)onfastingtotalhomocysteinelevelandMDAlevelinposlmenopausalwomenandexploretheinfluenceoncardiovascularsysterm.Methods62poslmenopausalwomenwererecr
25、uited.30womenwhohavetakenHRTfor6yearsservedastreatmentgroup,andanother32womenwhohavenevertakenHRTservedasthecontrolledgroup.FastingtotalseruinhomocysteineandMDAwasdeterminedintrealmentgroupandcomtrolgroup.Measurementoffastingtotalserulnhomocysteinewasperformedafter6monthsintreatmentgroupandcontrolgr
26、oup.ResultsBeforeandafter6month,womenoftreatmentgrouphadseruinhomocysteine【10.12.2)tmaol/L,(9.82.3)tmaol/LrespectivelyandcontrolgrouphadselMlnhomocysteine(11.82.5),(11.62.6)tanol/Lrespectively.Fastingtotalsehomocysteinehadsignificantalterationcomparedwithnotreatment(P0.051.Butinregardtocontrolgroup,
27、thereisnosignificantalteration(P0.05).ThelevelofMDAintrealmentgroupis(5.0181.9),(4.1131.4)nmol/Lrespectivelyandincontrolgroupis(5.1362.0),(5.0772.1)nmol/Lrespectively.FastingtotalserumMDAhadsignificantalterationcomparedwithnotreatment(P0.05).Butinregardtocontrolgroup,thereisnosignificantalteration(P
28、0.05).ConclusionSixmonthslowerdosesHRThasnoeffectonserumhomocysteineandMDAinposmaenopausalwonlen.KeywordsHRTPosUnenopausalwomenHomoeysteine流行病学资料显示,绝经前妇女冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病 )的发病率低于男性,绝经后冠心病的发病率逐渐上升到与男性相同的水平.近年来,随着人们对同型半胱氨酸(Hcy)代谢及其作用的认识越来越深入 ,认为高 Hcv血症是导致心血管疾病的一个独立危险因素_2,同型半胱氨酸代谢伴随氧化还原当量的转换,高 Hcy 血症可致氧
29、化应激状态,而氧化应激也是导致心血管疾病的危险因素.本文通过观察低剂量激素替代治疗前后血清同型半胱氨酸及丙二醛水平的变化,进一步了解低剂量激素替代治疗对绝经后妇女心血管系统的影响.1 资料与方法1.1 研究对象作者单位:苏州大学附属第四医院作者简介:吴海燕,主治医师(江苏省无锡市第四人民医院 )作者简介:余进进,主任医师,教授(苏州大学附属第四医院妇产科 )在本院围绝经期门诊就诊和治疗,并能定期随访的健康绝经后妇女 62 例,其中 30 例接受规范激素替代治疗 6 个月构成治疗组,另 32 例一直未用激素替代治疗为对照组.所有研究对象近三月内未服用含维生素 B6,维生素 B12,叶酸类药物等,并且元烟酒等嗜好,无心脑疾患及内分泌代谢疾患,无恶性肿瘤病史及乳房癌家族史.肝肾功能正常,双侧乳房红外线扫描正常,自然绝经者盆腔 B 超示子宫内膜5mm,血清雌二醇30pg/ml,促卵泡生成素40IU/ml.1.2 方法自然绝经者采用天然结合雌激素制剂倍美力(CEE 苏州立达制药厂生产)0.3mg/dx22 天/月,后 7 天加安宫黄体酮(MPA)4mg/d;手术绝经组单给倍美力 0.3mg/dx25 天/月.
