1、化学比色法测定血清碳酸氢根的研究44 现代检验医学杂志 2006 年 7 月第 21 卷第 4 期JModLabMed,July2006,Vo1.21,No.4化学比色法测定血清碳酸氢根的研究刘瑞锁,张本文,王克强,郝学梅,赵辉.,晁储璋(1.山东省泰山医学院附属医院,271000;2.山东省泰安市第一人民医院 ;3.山东省新泰市人民医院)摘要:目的建立一种新的血清碳酸氢根(HC0)测定方法.方法应用自配试剂建立两步终点测定法,可满足金自动和手工半自动测定,并对该方法进行方法学评价.结果该法比色液吸收峰556558am,线性范围 1 50mmol/L,批内CV2.56,批问 CV3.55,回收
2、率 96103,与血气分析仪(X)相关良好,y=0.48+0.989X,r一 0.982(=40),脂血,溶血,黄痘标本对结果无影响,健康人静脉 HCO-浓度 i 土=25.76 土 2.26mmol/L.结论该法操作简便,结果准确,试荆稳定,成本低廉,适合各级医院常规和急诊使用.关键词:化学比色法;碳酸氢根;二氧化碳分压中图分类号:R446.11+2 文献标识码 :A 文章编号:16717414(2006)0404403DeterminationofSerumHCOC0ncentrati0nbyChemicalColorimetricAnalysisLIURuiSUO,ZHANGBengwe
3、n,WANGKeqiang,HAOXuemei,ZHAOHui.,CHAOChuzhang(1.TheAffiliatedHospitalofTaishanMedicalCollege,ShandongTaian271000,China;2.TheFirstHospitalofan,Shandongan271000,China;3.ThePeopleHospitalofXintai,ShandongXintai271200,China)Abstract:ObjectiveToestablishanewmethodforthedetermination.ofserumHCO7concentrat
4、ion.MethodsUsingselfmadereagentstoestablishatestmethodoftwo-stepterminalpoint,whichwasmethodotogicallyevaluated.ResultsThepeakabsorptionwasat556558nm,thelinearitywasfroml50mmol/L,theintralotCVwas2.56,theinterlotCVwas3.55%,andtherecoveryratewas96103%.Theseresultewereingoodcorrelationwiththoseobtained
5、bybloodgasometry(X):y=0.48+0.989X,r=0.982(=40).Hyperlipoidemia,hemolysisandseriousjaundicesampleshadnoinfluenceontheresult.thedensityofHCO7invenousbloodofheathypersonys 一 25.76土 2.26mmol/L.ConclusionThismethodisasimple.accurateandreliable.Thereagentsarestableandcheap.Itissuitablefortheroutineandemer
6、gencydeterminationofserumHCO-concentrationforvarioushospitals.Keywords.chemicalcolorimetricanalysis;HCO-concentration;CO2partialpressure血清碳酸氢根(HCO-)是血浆重要的缓冲体此时 HCO 浓度与 pH 值完全成正比,采用酚红显系,也是判断体内酸碱失衡的主要指标,对呼吸性色其吸光度在 558nm 处与血清HCO;呈直线关酸中毒和慢性呼吸性碱中毒的诊断和治疗起着重系,与同样处理的标准液进行比色,即可求出要的作用.测定方法虽较多,但大都存在着一定的 HCO-的含
7、量.不足.目前使用的电极法,酶法和滴定法所用试剂 1.2 仪器岛津 CL 一 750 型分光光度计,康宁.168和血液标本都要求避免与空气接触,这一点在临床血气分析仪,Beckman700 生化分析仪,日立 7060实际工作中很难做到,故直接影响了测定结果的准自动生化分析仪,721 型分类光度计,37水浴箱.确性.另外酶法,电极法所用仪器和试剂成本高,难 1.3 试剂试剂 I:主要由磷酸盐,氯化钠,盐酸,以普及,滴定法因试剂不稳定造成准确性和重复性表面活性剂组成;试剂 I:主要由酚红,CO 吸附欠佳,且不适合批量测定.化学比色法是根据酚红剂,防腐剂组成.标准液:25mmol/L标准液由碳的显色
8、特点,CO2 的理化特性和血气分析仪测定酸氢钠及缓冲碱 ,缓冲酸组成.浙江奥的特生物技HCO 的原理建立的一种新方法,经过多年的临床术有限公司可提供检测试剂盒(包括 RI,R2 和标应用和改进,结果满意,报道如下.准液),批号:20050826.1 材料与方法 1.4 方法1.1 原理血清 pH 值取决-HCO-/-Pco的浓 1.4.1 技术参数:波长 558llm(生化仪可用 546度比,当血清与 I 试剂混合,经搅拌(或振荡),孵育 nm),副波长 700nm,温度 37,吸光度范围 O后,逸出部分 COz,I 试剂中 COz 的吸附剂,使血 1.O0,比色杯光径 0.51.0cm,反应
9、方式两步清中剩余的 CO 降至 0.44kPa 左右,与空气中的终点法 ,反应时间 600S.COz 分压保持相对平衡,而稳定在一个低水平上,1.4.2 操作: 取血清(标准液)25l, 加试剂 I250作者简介 t 刘瑞锁(1953 一),男,天津市人,副主任技师,科主任,主要从事临床检验工作.现代检验医学杂志 2006 年 7 月第 21 卷第 4 期JModLabMed,July2006,Vol?21,No?445l 混匀,37水浴 300s,用蒸馏水调零,读取吸光度,再加入试剂 I250l 混匀,37水浴 300S,读取吸光度.计算:血清 HCO;(mmol/L)一(2 一 1/2)/
10、标准25.0.2 结果2.1 吸收光谱曲线取低,高两种浓度血清样本(无黄疽,无脂血,无溶血) 和标准应用液,按本方法操作,用岛津 CL 一 750 型分光光度计做吸收光谱曲线,样本的浓度分别为 13.5,25.0,38.2mmol/L,其吸光度分别为 0.190,0.353,0.540,吸收峰分别为 556.0,556.2,557.8nm.试剂空白(黄色)以 525595nm 吸光度为零,吸收峰为 430.2nm,见图1.330350400450500550600nm图 1 化学比色法测定血清 HCO7 吸收光谱曲线2.2 线性测定取浓度分别为 5.0,12.5,25.0,37.5,50.0m
11、mol/L 的 NaHCO3 标准液和含 10.0,29.5,40.5mmol/LHCOF 的血清标本(经血气分析仪测定)按本法测定,吸光度分别为 0.049,0.124,0.251,0.337,0.503 和 0.103,0.298,0.409.结果在 50mol/L 内线性关系良好,.一0.9961,见图 2.5101520253040455055HCO;mmol/L图 2 化学比色法测定 HCO7 线性曲线2.3 精密度测定取 1 份血清标本批内重复测定20 次,结果s 一 22.030.57mmol/L,CV 一2.56.用自配的标准液每天测 1 次,连测 20d,结果s 一 25.0
12、20.93mmol/L,CV=3.55.2.4 回收率测定于 3 份 HCO;原浓度为 29.2,27.3,20.5mmol/L 的血清标本中,各加入 25mmol/LNaHCOs 标准淮,复测其结果,回收率分别为 103.1,97.7,96.8,平均 99.2.2.5 显色稳定性实验用 1 份血清和标准应用液各做 10 管,经本法显色,放 37水浴,分别在 5,10,20,30,60,120,180,360,420rain 和次日各测 1次吸光度,结果 1020min 内色泽无明显变化,在这期间比色不影响结果,20min 后标本管和标准管逐渐缓慢同步加深,420min 后色泽不再变化,见图
13、3.O.5O.4O.30.2O.1(rain)图 3 比色时间与吸光度的关系2.6 试剂稳定性本法所配试剂,在正常包装中,在室温存在 1Y,4冰箱保存 2Y,均未出现变质,与新配制试剂测 10 份标本结果基本一致.2.7 干扰实验在已知血清 HCOF 含量的标本中加入不同浓度的胆红素标准液;同份已知血清用机械方式造成严重溶血;同份血清中混入少量红细胞,然后按本法操作;脂血标本.采用双试剂,全自动测定时能够自动消除各种干扰物的影响,结果与原血清标本一致.2.8PCO.测定试验取新鲜血清 5 份,标准液 3份,按本法操作.用血气分析仪测 PCO.结果血清一 0.429kPa,标准一 0.438kP
14、a.2.9 对照试验 40 份 HCO;分布范围广泛的血清标本(其中包括脂血,黄疸及溶血标本),用本法和血气分析仪同时测定,本法(y)与血气分析仪()的直线回归方程 y 一 0.48+0.989X,相关系数,.一 0.982,见图 4.HcOmmol/L图 4 血气分析仪与化学比色法测定对照及回归线2.10 正常参考值取 150 名健康查体者静脉血,用本法 3h 内测定完毕,结果血清 HCOFs 一25.762.26mmol/L.3 讨论3.1 方法建立的根据:大气中的 PCO.很低,海平面的 PCO2 只有 0.4kPa(0.3mmHg).正常人静脉加如加 m546 现代检验医学杂志 200
15、6 年 7 月第 21 卷第 4 期JModLabMed,July2006,Vo1.21,No.4血 PCO2 为 6.12kPa(46mmHg),常规条件下采血1h 后分离出的血清,PCO.可降至 4kPa(30mmHg)左右,与大气中 CO.存在着明显的分压差.血清标本和标准液与 I 试剂混合经搅拌,孵育后使部分 CO.逸出,再加入 1 试剂吸附剩余的部分 CO2,使两者的 PCO2 都可降至 0.439kPa(3.3mmHg)左右,此时再测出溶液 pH 就可计算出HCO-的含量 .血气分析仪是测得血液 pH 及PCO.后根据 HH 方程求出 HCO7,本法与其相似,结果也较吻合.本法所用
16、指示剂酚红是弱有机酸,酸性分子(HIn)呈黄色, 碱型离子(In 一)呈红色,HH 方程式为 pH=P“+logIn/Hin.它表明在给定的温度,离子种类和离子强度等条件下P“值恒定,碱型离子与酸性分子之比值及其相应的颜色,取决于所在介质的 pH.酚红的 pH 大于PK+3.0(11.O)或小于 PK 一 3.0(4.6)的介质中,分别全部变成碱型或酸型.碱型吸收峰在 558nm,酸型吸收峰在 430nm,558nm 几乎无吸收,558nm 测得的吸光度仅代表 In 的浓度,在 pH6.87.8 的比色中,吸收峰不转移.当 HIn 浓度一定时,In 一的浓度与吸光度呈直线关系.3.2 本法是根
17、据血液中 CO.的物理和化学特性设计的方法,标准液 CO.分压和 pH 与常规使用的血清标本(不需密封,抽血后放置 12h)基本相同,故用本法测得的结果比较客观.各试剂厂的标准液和质控血清,加入的各种化学成分,不同程度地影响了 CO.分压和 pH,故与常规使用的血清标本不一致,用本法测定,结果会有差异,故不适合本法使用.3.3 本法与其它方法比较有以下特点:血液采集后不需隔绝空气,这既为临床实际工作提供了方便,又保证了结果的准确性.试剂稳定,保存方便,本法试剂可在常温下存放 1Y,打开后仍可长期使用,保证了测定结果的稳定性,减少了浪费.本法测定原理与血气分析仪测量原理相似,故两者结果高度相关,
18、批内 CV 平均 2.56.操作简便,成本低廉,所用波长能在各种光度计,半自动生化分析仪,全自动生化分析仪使用,故适合各级医院常规和急诊使用.参考文献:13 湖南医学院.生理学M.第 1 版.北京:人民卫生出版社,1981:176.2北京医学院.生物化学M. 第 1 版.北京:人民卫生出版社,1981:395397.3吉林医科大学.医用基础化学M.第 1 版.北京:人民卫生出版社,1980:157166.4上海医学化验所.临床生化检验M,上册.上海:上海科学技术出版社,1979:2227.5李学骥.医用化学实验技术M.西安:陕西科学技术出版社,1986:213229.6刘瑞锁,刘汉棠 ,郝学梅
19、,等.单一试剂比色法测定血清碳酸氢根的研究J.泰山医学院,1994,15(2):141144.收穑日期.2006 03 一 i5KX 一 21 血细胞分析仪空白错误的故障排除高传祥(安徽省舒城县人民医院,安徽舒城 231300)中图分类号:R446.9 文献标识码:B 文章编号:16717414(2006)0404601KX 一 21 三分类血细胞分析仪具有简便,快速,准确性以上工作做完后,再进行测试,故障仍不能排除,考虑高等特点,我科于 2000 年使用以来,工作性能良好,各项指可能是机械故障.切断电源,打开机前面的罩子,经仔细检标正常.由于时间的延长,出现故障在所难免,现将近期发查发现白细
20、胞检测部溶血素加样管有渗液现象,靠近在一生的空白错误故障的排除作一介绍,供同行们商榷.起旁边有一根绝缘电线有老化现象.可能受腐蚀的影响,电1 工作现象当开机在预稀释模式下,空白计数各实验参线老化部分外面包裹着一层类似铝化物的物质.数均在本底可控制范围内,可以开始正常工作,当测定一至 3 故障排除更换白细胞检测部溶血素加样管;KX 一 21两个标本后,再测下一个标本,仪器开始报警,出现空白错配套绝缘电线.故障得以排除.误信号,且 WBC,Hb 测得值前有*,WL,AG 等不同的报由于溶血素管有渗液现象,当 WBC 检测器中的被稀警信号.通过去污,自动清洗后,上述故障不能排除,Hb 大释,溶血后的
21、试样中,约1ml 被移送到 HGB 检测器时,可于本底 12g/L 不等.以吸取少量气泡而导致 Hb 测定值偏高 ;由于本机使用的2 原因查找根据随机的说明书提示,可能引起空白错误是 DC 测定法,电线老化,能够产生电磁效应,能对此测定的影响因素有:稀释液的污染,更换稀释液.SRV 的污方法电脉冲产生干扰,致使白细胞测量结果不准.血细胞分染,清洗旋转阀.WBC 检测部的污染,清洗液清洗检测析仪不但要严格遵守维护 ,保养制度,而且还要对仪器的性部,刷子清洗,烧灼测定小孔.比色池污染,取出比色池中能,工作流程,计数原理,主要部件的功能有所了解,只有这的石英圆形玻璃,用清洗液浸泡,稀释液冲洗.压力异常,样,才能保证检验结果的准确性,工作中的故障得以顺利排重新调整 250mmHg 压力.除.收稿日期:20060116
