1、 南昌大学硕士学位论文滇重楼遗传多样性的ISSR分析姓名：何俊申请学位级别：硕士专业：植物学指导教师：杨柏云;陈少风20070626 不等 ，平 均 为 ， 疭 基 因 多 样 性 指 数 为 ， 痵 多 样性 指 数 为 。 揭 示 出 自 然 居 群 内 的 遗传多 样 性 的 不足 ，相 对 而言，滇重楼 在物 种水平 上 还 保存 有 较高 的 遗传多 样 性 。 滇 重楼 特殊 的 繁 育 方式，种子具有 的 形态和 生理后 熟 特性 ，以及人 们 对 其 长 期 掠夺式的 采挖所导致 的 自 然 居群 及生境 的 严 重片 段 化 ，可 能是致 使 其 居 群 遗传多 样 性 较低
2、的 主要 原因 。 不同地 方的 滇 重楼 居 群 在形态上 也表现 出 一定程度 的 多 样 化 ，滇 重楼 在物 种水平 上具有 较高 的 遗传多 样 性 可 能与 其 多 样 化 的 生境 有 关 。关 键词： 滇 重楼 ， ，遗传多 样 性 ，自 然 居 群 ，栽 培 居 群 ，片 段 化瑆 魄 琀 琣 琍 琀 兰竺兰兰竺兰兰竺三 鼙豪既兰生 本 学位 论 文 作者完全 了解第 一章绪 论生 物 多 样 性 是 地球 上生 命 经 过 几十 亿 年 发 展 进 化的 结果 ， 是 自然 界 赋予人类的 巨 大财富 ， 这 笔 自然 财富 对 维持 人类的 生 存 与 发 展 有 着 无
3、 可替 代 的 重要 意义。 然 而 ， 由 于 生 境 的 破坏 ， 人类对 生 物 资 源掠夺式 的 过 度 利 用 ， 加 上环境 污染 和外 来 种 入 侵的 影响等 ， 致 使地球 上的 生 物 多 样 性 不 断减少 ， 大量物 种 趋 于灭绝 ， 人类生 存 的 基础 正 在 逐 渐瓦 解， 越 来 越 多 的 生 态学家 和环境 科 学家 正 在第 一章绪 论指反映生物个 体 或 群 体 间 在 基 因性：第 一章绪 论 公 司 和 赑 和 成 功 扩增 的 关键，其 一般 由 与 人 工 接 头 互 补的 核 心 碱基序列 、 限 制性 内切酶识别 序列 和 说 难 窦 罨
4、槌 一般 不 超过 。 接 头 与 接 头 相 邻的 酶切片段的几个 碱基序列 为 引 物 的 结合位 点 。 一般 采用 两 个 限 制性 内切酶，一个 酶的切点 较 多，另 一个 酶切点 较 少，可 以 使酶切片段大 小匀 匀 。 同 时 双酶切可 以 对扩增 片段基因灵 活 调 节 ，通 过 少数 引 物 可 产生许 多不 同 的 引 物 组合，从而 产生 技 术 是 由 扔 杲 腎 且 訮 技 术 为 基 第 一章绪 论 怯 个 碱基组 成 的 串 联 重 复和 几 个 非 重 位 多态 性 ，也 可 能 具 有 等 位 多态 性 。 但 等 位 多态 性 的 情 况 较少见 ，通常
5、所 说 的 际 等 位 多态 性 。 鉴 定 闹 苯 臃 椒 峭 杓铺 匾 霵引 物 扩 增 某个 特定区 域的 危 庑 蚝鸵 糯 卣鞯谋冉希 慈 范 肈 片段 是 否 可 作 为 昙 恰 蠊 婺 腟 鉴 定则 要 通过 芯 片 技 术实现 。 芯 片 技术是 将 大 量探 针 分 子固 定于支持 物 上后 与 标 记 的 样 品分 子进 行 杂交 ，通过 检测 每术发 现 和 检测 生 物基因 组的 差 异 ； 遗 传多样 性 检测第 一章绪 论补 的 模板氖 俊 坏 闶 遣 煌 模蚨 淅 霾 的 大 小 、 数 目 也 不 同，亦即 扩 增 产物 表 现 出 多态 性，进一步通过 聚 类
6、分 析 等遗传分 析 手段 ，可 以 对 物 种间 的 亲缘 关 系 等进行 研究。特 别 是近 年 来，分 子标 记技术在 研究野生 植物 与 栽 培植物 的 相 互 关系 ，以 及栽 培植物 遗 传多样 性的 起 源与 演 化等问 题 上得到 了广 泛 应用 。张金 渝等 胝崦 鬍 蛄 砹 率 簟 仑购 嗟取 对 姜 黄 的 研 究 表 明 两者 。 蚐 难以从 交 治A礁鲋郑 楹 喜 狢 最 为 接 近 的 物种 是 上 欣 肦 昙茄芯 苛讼蛉 湛 构建 遗 传 连锁 图谱和 辅 助育 种 等 已 有 初步 研究 报道。韩延 闯 等 卅采用种 均有 各 自 特异的 肝 啤： 粤礁 霾 煌
7、 透 世 甤 品种 杂 交 得 到的 代 为 作图群体， 用 标记 构建第 二章 滇 重楼的 研 究现状第 二章 滇 重楼的 研 究现状畇 参 锪 粲 谘 恿 洳菘 ， 全 世界用在我 国有着悠 久 的 历史 ， 自古以来就 有许多 关 于 它 的 记 载。 根据神农 本草经 记 载：“蚤休， 味 苦 微 寒， 主惊痫 ， 摇 头 弄 舌 ， 热 气 在腹 中 ， 癫 痫 ， 痈 疮 ，阴蚀 ， 下 三 虫 ， 去蛇 毒 。 ”； 本草 纲 目 也提 到 “ 蚤休， 根气 味 苦 ， 微 寒， 有毒 。主治惊痫 ， 摇 头 弄 舌 ， 热 气 在腹 中 ， 癫 疾 ， 痈 疮 阴蚀 ， 下 三
8、 虫 ， 去蛇 毒 。 生 食一升 ， 利 水 。 治胎 风 手足 搐 ， 能 叶 泄 瘰 疬 。 去疾 寒热 。 ”； 在滇 南 本革 中 “重楼嶂 芈 ， 性微 寒。 是 疮 不是 疮 ， 先 用重楼解 毒 汤 。 此 乃 外 科 之 至 药 也。 主治一切无 名肿毒 。 攻各 种疮 毒 痈 疽 ， 发 背 痘 疗 等症最良 ， 利 小便 。 ”。 重搂 属植物 化 学 成 分 复 杂 ， 药 理活 性强， 临 床 应用范围 广 ， 具有抗 癌 、 清 热 解 毒 、 消肿止痛 、 止血 等作用， 治疗 跌 打 损 伤有独 特 疗 效 ， 是 “云 南 白 药 ”、 “季胜 德 蛇 药 片
9、 ”、征 把 重楼属划 分为三 个 独 立的 属： 、 蚄 甃 下 的 日 本 重楼组甂属蚤 休组瓻 第 二章 滇 重楼的 研 究现状的 蛄蟹 治觯 峁 諸 的 观 点 。 化学 成 分 及药 理 学作 用 ， 此外 他 们 还 新 发 现了 一种 呋 崩 烷型皂苷 从 滇 重楼根状茎的 水 提 取液 中 分 离 到了 两种 寡 糖 蚾 ， 并 发 现它 们 能刺激丝 氨 酸 的 外 露 ， 认为 是一种 能克 服 抗药 性 肝癌 细 胞 的 有 效 抗癌 成 分 。重楼皂苷 騃 作 为 一类较 强的 免 疫 调 节 剂， 能诱 导巨 噬细 胞 增殖和干扰 素 的产 生 ， 促 进人 体 外
10、周血 淋巴细 胞 有 丝分 裂【 】；重楼总 皂苷能干扰 核酸 代谢 ，第 二章 滇 重楼的 研 究现状 咨 穸 呙 第 二章 滇 重楼的 研 究现状第 三章 材 料与方 法 主要 试剂上 海 华 舜 生 物工 程 有 限 公 司中国医 药 上 海 化学 试剂 公 司生 工 生 物 工 程 虾 有 限 公 司重庆川 东 化工 有 限 公 司天 津 市风 船 化学 试剂 科 技 有 限 公 司杭 州长城化工 厂 然 上 海 试剂 一 厂天 津 化学 试剂 有 限 公 司 咖 确 寤 叶天 津 化学 试剂 有限 公 司青岛 美高 集团有 限 公 司生 工 生 物工 程 虾 有 限 公 司上 海 太
11、 仓 市 科 教 仪 器 厂梅特 勒 托利多 仪器 虾 有 限 公司 有 限 公司 供试 材 料 大 理 。 武 定 、 丽 江 和大 理 居 群 的 引 种 时 间 分 别 为 辍 年间 距 至少 米随 机采 样 个 个 以上 ， 分 别 编号 为 积译文 ， ， 主要 溶液 的配 制 碱， 姿 幔 ，加蒸馏水 定容至 。 缓 冲 液 缓 冲 液 溶液 ， 琾 然 后 将 离 心管 放在 嫦 渲 或室 温下 挂 掖 蓟 臃 蹹 干燥 ， 轻 轻 摇 匀。 蹹 的 纯 度测 定果 也 易受 到不 同 反应参数 的 影 响 ， 如 ， 模 板 琓 必 要对 反应过程 中 的 一 些 参数 进行 优 化 。 设置 反应体 系 为 热循环 参 錎 ： 高 质量的 模 板 荘 成 功 的 保 证 。 产物 的 分 子量基 本 上在 段 洌 宓 牡投 冉 到獠 换 嵊 跋 炖龅慕峁 绝 龅奶匾 煨 裕 鱿 址 翘匾 煨 岳觯 慌 裙 突 峤档 蚑 锏耐 嘶 鹞 露 龋阂 锏囊 桓 鲋匾 2问 侨劢 馕 露 。 手 作 为 相 对 分 子 量标 准 ， 置将作 好的 琹矩 阵分 别 利 用 以下软件 计 算有关 参数 。 指 数 却 琾 尤 褐 械 趇 个 等指 数 輆 谖 镏炙 降 幕 蚨 嘌 风， 途 尤 核 降 幕 蚨 嘌 绵力 ， 利 软件
