1、中草药远志对实验性小鼠雄性生殖细胞遗传物质损伤的保护作用一258 一第 29 卷第 3 期吉林大学(医学版)Vo1.29No.32003 年 JournalofJilinUniversity(MedicineEdition)2003文章编号1671587x(2003)03025803中草药远志对实验性小鼠雄性生殖细胞遗传物质损伤的保护作用朱玉琢,庞慧民,高久春,邢沈阳.,胥耘荆(1.吉林大学基础医学院医学遗传学教研室,吉林长春 130021;2.吉林大学基础医学院细胞生物学教研室;3.吉林大学护理学院生物教研室 )摘要目的:观察中草药远志对小鼠雄性生殖细胞遗传物质损伤的保护作用.方法:采用小鼠
2、精原细胞姐妹染色单体互换实验.结果:铅能诱发小鼠精原细胞姐妹染色单体互换 ,而在腹腔注射铅的同时给予远志,可使铅诱发的小鼠精原细胞姐妹染色单体互换频率明显降低.结论:远志对雄性生殖细胞遗传物质具有保护作用,即抗诱变作用.关键词 远志 /药理学; 醋酸铅;精原细胞;姐妹染色单体交换/ 遗传学;抗诱变药/ 药理学中图分类号Q343;R282文献标识码A环境中存在的诱变致畸因子随时可能影响男性的生殖细胞,此过程可以持续全部生殖期;突变致畸的潜在危害,男性比女性大十几倍.众所周知,环境中大多数诱变物很难简单地予以去除,尚有一些诱变剂目前仍有重要的使用价值,职业接触在所难免.为此,应用一些常用中草药对职
3、业化学毒物损伤雄性生殖细胞防护作用的探讨,并将所取得的研究成果应用于职业人群的劳动保护,将是一项有实际意义的工作.本文作者采用小鼠精原细胞姐妹染色单体互换(SCE)试验,研究了中草药远志对醋酸铅Pb(CH.COO)引起的雄性生殖细胞遗传损伤的防护作用.1 材料与方法1.1 实验动物本校实验动物部提供的昆明种雄性小鼠,体重 2530g.1.2 实验药品远志(polygalatenuifoliawilld)水提取物:称取远志 8g(吉林大药房提供并鉴定),双蒸水 300ml 浸泡 1h,常规反复煎煮 3 次,混合 3 次滤液,浓缩成所需浓度,4保存;5 一碘脱氧尿嘧啶核苷(IUdR):SigmaC
4、hemicalCompany.U.S;Pb(H.C00):天津市化学试剂三厂;丝裂霉素 C(MMC):协和发酵工业株式会社,日本.1.3 实验分组和给药实验动物随机分为阴性对照组(N.S),阳性对照组(MMC1.0mg?kg),Pb(CH3CO0)2 诱变实验组(1O,20和 40mg?kg 分别相当于 1/12,1/6 和 1/3LD.),远志诱变实验组(O.5,1.0,2.0,和 4.0g.kg),远志抗诱变实验组Pb(CH.COO)40mg?kg 加远志各剂量组,二者同时给药,每组 5 只动物,一次性腹腔注射给药.1.4 实验方法取 45mgIUdR 和等量蔗糖混匀后压成小药片,埋于小鼠
5、腹部皮下,仔细缝合.于埋植 IUdR 药片 28h 腹腔注射待测物,注药后30h(即埋植 IUdR58h)处死小鼠 ,取出睾丸.于处死动物前 6h 腹腔注射秋水仙索(40rag?kg). 精原细胞染色体制备和姐妹染色单体差别染色按常规方法进行.SCE 分析时,选择掺人 IUdR 后经过 2 个复制周期,色差鲜明,含有二倍体数的中期分裂相观察计数.计数标准:凡在染色体端部出现的互换计为一次 SCE,在染色中间出现的互换计为 2 次 SCE.每只动物计数 2O 个中期分裂相,然后算出每个细胞中 SCE 平均值 .统计学处理采用 t 检验.收稿日期20020608基金项目 吉林省科研发展计划项目(2
6、0010529)作者简介 朱玉琢 (1958 一), 男,吉林省长春市人,副教授,医学硕士,主要从事医学遗传学研究.朱玉琢等中草药远志对实验性小鼠雄性生殖细胞遗传物质损伤的保护作用一2592 结果2.1Pb(CH.C0O)对小鼠精原细胞 SCE 频率的影响 Pb(CH.CO0)可使小鼠精原细胞 SCE频率明显升高(PO.01),并有剂量一效应关系,见表 1.2.2 远志对小鼠精原细胞 SCE 频率的影响远志各剂量组诱发的小鼠精原细胞 SCE 频率与阴性对照组比较差异无显着性(PO.05),见表 2.Tab.1SCEfrequenciesinducedbyPb(CH3CO0)zinspermat
7、ogoniaofmice*PO.05.*P0.01tJN.ScontroITab.2SCEfrequenciesinducedbyPolygalatenuifoliawilldinspermatogoniaofmice*P0.O1“05N.ScontroI2.3 远志对 Pb(CH.C00)诱发的小鼠精原细胞 SCE 的抑制作用由实验结果得知,远志与Pb(CH.COO)同时给药,当远志达到1.0mg?kg 时即对 Pb(CH.COO)诱发的小鼠精原细胞 SCE 有明显的抑制作用,随着远志浓度的增加,其抑制作用亦增强,当达到一定浓度后,其抑制作用不再增强,见表 3.3 讨论SCE 为细胞有丝分裂
8、的二联体中染色单体对称点或片段之间的交换现象,某些作用于 DNA 的致突变剂或致癌物在极低的浓度下即可诱发大量的SCE,故可用以鉴定化学物质是否有致突变性和致癌性,是一种检测环境污染和筛选化学物质的有效方法.SCE 形成的机理仍不清楚,但它与 DNA 复制有关,提示 SCE 的形成是 DNA 复制水平不规则所致.即 SCE 代表细胞对 DNA 损伤的一种反应,并可涉及到 DNA 修复过程.可诱发 SCE 频率增高的因素很多,除 SCE 形成率的差异外,主要受诱变剂的种类,浓度及其细胞的 DNA 修复能力的影响1.增加 DNA 分子的损伤或削弱其修复能力均可增加SCE 频率.Tab.3Inhib
9、itoryeffectofPolygalatenuifoliawilldonSCEfrequenciesinducedbyPb(CH3COO)zinspermatogoniaofmice*P0.05,*P0.01tJPb(CH3COO)2controI远志是我国传统医学中常用的中草药,可用于颅脑肿瘤,肺癌,甲状腺癌,乳腺癌,子宫肌瘤和输卵管肿瘤的治疗2. 本实验结果表明,Pb(CH.Coo).可诱发小鼠精原细胞 SCE,而远志可使Pb(CH.Coo).诱发的小鼠精原细胞 SCE 频率明显降低,说明远志对小鼠雄性生殖细胞遗传物质具有保护作用,即抗诱变作用.远志抗诱变作用的机理尚不清楚,但在实验中
10、本文作者发现远志在体内可以诱生 II 一 23,提高机体的免疫功能 ,从而增强了机体的防御能力.另外,本文作者推测远志在诱生 II 一 2的同时,可能也诱生出其它保护性因子或启动了DNA 修复酶的活性,从而减少了 Pb(CH.COO).对DNA 的损伤作用或使 DNA 损伤得以更快地修复.有关远志抗诱变作用的确切机理,尚待进一步研究.参考文献1SognierMA,HittlemanN.LossofrepairabilityofDNAinterstandcrosslinksinfanconisanemiacellswithcultureageJ.MutatRes,1983,108:383393.
11、23 张庆明 .抗肿瘤中草药的临床应用 EM3.北京:人民卫生出版社,I998.135138.33 温得中 .中草药改善模型鼠诱变生成及免疫功能D.硕士学位论文.吉林大学,2002.2324.吉林省高等法院吉林大学(医学版)2003 年第 29 卷第 3 期InfluenceofPolygalaTenuifoliaWilldontheExperimentalDamageofGeneticMaterialsinMaleMouseGenitalCellsZHUYuzhuo.PANGHui-min,GAOJiu-chun,XINGShen-yang.,XUYun-jing(1.Dept.ofMedi
12、calGenetics,SchoolofBasicMedicalSciences,JilinUniversity,Changchan130021,China;2.Dept.ofCellBiology,SchoolofBasicMedicalSciences,JilinUniversity;3.Dept.ofBiology,CollogeofNursing,JilinUniversity)-Abstract-Objective:ToobservethepreventiveeffectofPolygalatenuifoliawilldongeneticdamageingenitalcellsofm
13、alemouse.Methods:Thesisterchromatidexchange(SCE)testinmousespermatogoniawasused.Results:Pb(CH3COO)2couldinduceSCEinmousespermatogonia,butthefrequenciesofSCEinducedbyPb(CH3CO0)2inmousespermatogoniawerereducedsignificantlyifPolygalatenuifoliawilldandPb(CH3COO)2weregivenipsimultaneously.Conclusion:Poly
14、galatenuifoliawilldshowsaprotectiveeffect,namelyantimutagenesis,ongeneticmaterialinmalegenitalcells.-Keywords-Polygalatenuifolia/pharmacology;Pb(CH3CO0)2;Spermatogonia;Sisterchr?omatidexchange/genetics;Antimutagenicagents/pharmacology角膜炎的中西医结合治疗辽宁省大连市体检中心眼科刘智新辽宁省大连市中医医院眼科吕燕然l 临床资料中医治疗:根据中医异病同治的原则,对角
15、膜炎采用辨证分型治疗.a.风热毒邪型:多见于角膜炎的初期.症状:羞明流泪,睛珠刺痛,轻度睫状充血,角膜呈星点状灰白色混浊 .恶寒发热,头痛鼻塞,舌红苔薄黄.脉浮数.辨证:卫气不固,风热外侵,上扰清窍.治则:疏风清热,解毒散邪 .方药: 银翘散合桑菊饮加减.双花,连翘,黄芩,板兰根,大青叶,防风,蝉蜕,甘草.b.肝热内蕴型:多见于角膜化脓性炎症.症状 :羞明流泪,睛珠刺痛难忍,睫状体充血明显,黑睛之翳融汇溃烂.口苦舌干,口渴喜冷饮,便干溺黄,舌红苔黄,脉弦数.辨证:肝胆火炽,热毒内蕴,上功于目.治则:清肝泻火,解毒明目.方药:石决明散合龙胆泻肝汤加减.石决明,草决明,龙胆草,青葙子,黄芩,柴胡,
16、土茯苓,公英,红花,赤勺,甘草.C.湿热蕴积型:多见于角膜慢性炎症,缠绵难愈.症状:羞明有眵,热泪胶粘 ,黑睛翳色灰白或如虫蚀.胸闷不适,口粘而腻.舌苔黄腻,脉儒数.辨证:湿热蕴结,上蒙清窍.治则:清热除湿,解毒明目.方药:三仁汤加减.薏苡仁,草豆蔻,草解,土茯苓,石决明,厚朴,公英,红花,海螺蛸,甘草.d.气阴两虚型:多见于角膜炎的后期 ,或久病不愈,或反复发作.症状: 羞明流泪,经久不愈,星翳疏散或凝脂溃陷不敛.倦怠乏力,五心烦热,口干不欲饮,或便溏,舌红少苔,脉细数.辨证:正虚邪留,虚实挟杂.治则:益气养阴,清除余热.方药:四君子汤合露饮加减.黄芪,白术,茯苓,生地 ,赤勺,麦冬,土茯苓
17、,青葙子,蝉蜕,海螺蛸,甘草.e. 肝郁气滞型 :多见于角膜炎后期,翳障遮睛.症状:黑睛翳障,久不消退 ,视物昏蒙.治则; 疏肝退翳明目.方药:逍遥散加减.柴胡,当归,赤白芍,茯苓,白术,木贼,白蒺藜,蝉蜕,菊花,甘草.西药治疗:根据角膜炎的性质选用抗生素,抗病毒或激素类药物滴眼或结膜下注射.引起虹膜睫状体炎者,以 1%阿托品散瞳.典型病例: 患者,男,2O 岁.1990年 3 月 26 日就诊.病人右眼羞明流泪,反复发作半年,尤感冒时加重,曾单纯用西药治疗无效.检查见右眼轻度睫状体充血,角膜散在点状灰白色侵润,前房清.倦怠乏力,口干不欲饮,便溏,舌红苔薄,脉细数.四诊合参病属气阴两虚之聚星障
18、.治以益气养阴,清除余热.方用四君子汤合甘露饮加减.黄芪 30g,白术 15g,茯苓 25g,生地 15g,山萸肉 30g,麦冬 10g,土茯苓 25g,青葙子 10g,海螺蛸 25g,甘草 10g.吗啉呱眼药水每日 3 次滴眼,红霉素眼膏日 1 次涂眼.服上方 12 剂后,诸症悉减,时有羞明.检查见角膜点状混浊,红汞着色().拟益气养阴 ,清肝退翳明目.黄芪 30g,当归 15g,柴胡 10g,赤勺 10g,菊花 10g,蝉蜕 10g,甘草 10g.又服 1O 剂.后以菊花,防风,蝉蜕各等分,每日 1 剂泡水当茶饮.随访 1 年,未见复发.2 讨论角膜炎在中医属黑睛疾病,按病邪侵犯黑睛的部位
19、,形态分为聚星障,混睛障,花翳白陷,凝脂翳.其致病机理主要是内有蕴热或素体气虚,阴虚而有角膜损伤,导致腠理不固,风热毒邪乘虚而人,郁而化热,上功于目所致.目前临床上该病的两大难点是病程迁延,极易复发.本文作者采用中医辨证分型中药治疗为主的中西医结合法治疗角膜炎,收到了较满意的疗效.所有方药中龙胆草,黄芪,柴胡清肝泻火;当归 ,红花,赤勺活血化瘀,可解除由角膜炎所引起的局部傲循环障碍,调整新陈代谢,促进组织修复;双花,连翘,大青叶,板兰根具有清热解毒 ,抗病毒之效.根据现代医学研究,该病病因之一是免疫功能低下.所以方中加用黄芪,防风,白术以增强人体抵抗力.当炎症稳定时应及早加人退翳明目之品,如蝉蜕,木贼,青葙子等,可进一步增强角膜活性,促进角膜溃疡愈合再生,达到减少瘢痕形成,提高视力的目的.
