1、华 南 师 范 大 学 实 验 报 告学生姓名 叶洁丽 学 号 20070004006 专 业 综合理科二班 年级、班级 2007 级 课程名称生物化学 实验项目 维生素 C 的定量测定（2,6- 二氯酚靛酚滴定法）实验类型 验证 设计 综合 实验时间 2008 年 11 月 3 日实验指导老师 陈文利 徐杰 实验评分 一、目的1学习并掌握定量测定维生素 C 的原理和方法。2掌握微量滴定法的基本操作技术。二、原理维生素 C 是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic acid） 。它对物质代谢的调节具有重要的作用。近年来，发现它有增强机体对肿瘤的
2、抵抗力，并具有对化学致癌物的阻断作用。维生素 C 是具有 L 系糖构型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等） 、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量更为丰富。维生素 C（抗坏血酸）具有很强的还原性，能将染料 2，6 一二氯酚靛酚还原成无色，而抗坏血酸本身被氧化成脱氢抗坏血酸。 CCCHOHOOH OO2 NOHClCl+CCCOHOOH OO2 NOHClClO+ OH ()2626()OH+(NClClO氧化型 2，6 一二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色，当用此染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，在抗坏血
3、酸未全部氧化前，则滴下染料立即被还原成无色，一旦溶淀中的抗坏血酸全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉红色，此时为滴定终点，即表示溶液中的抗坏血酸刚刚被氧化完全，从滴定时 2，6 一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中抗坏血酸的含量。三、材料、试剂与器具（一）材料 花椰菜（二）试剂 1、标准抗坏血酸溶液 2、2%草酸溶液3、1%草酸溶液 4、0.01% 2,6 一二氯酚靛溶液（三）器具 1、锥形瓶若干 2、移液管若干3、容量瓶一个（100 毫升）4、微量滴定管（3 毫升）5、漏斗一个 6 、研钵四、实验内容（一）提取称取 1.8 克花椰菜，剪碎加 2%的草酸几毫升，置研钵中研成浆
4、，倒入 100 毫升的容量瓶内，用 2%草酸洗涤数次，最后定容至刻度，充分混匀后过滤。（二）滴定1、标定 2，6 一二氯酚靛酚溶液的浓度：量取标准维生素 C 溶液 1ml,加 9ml 1%草酸加入 50ml 锥形瓶中，同时量取 10ml 草酸加入另一个 50ml 锥形瓶中作空白对照，用已标定的 2，6 一二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15 秒不退色。记录所用的毫升数，计算每毫升 2，6 一二氯酚靛酚所能氧给维生素 C 的毫克数（K） 。锥形瓶号 1（标准） 2（空白对照）标准维生素 C 溶液（ml）11%草酸（ml） 9 10操作 用已标定的 2，6 一二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15 秒不退色
5、记录（所用的毫升数ml）3.15 0.37计算：K=0.1mg/ （V 标V 空） =0.1mg/(3.150.37)ml=0.03597mg/ml2、样品的测定：取 50ml 锥形瓶 2 个，分别加入滤液 10ml，用已标定的 2，6 一二氯酚靛酚溶液滴定至终点，以微红色能保持 15 秒不退色为止，整个滴定过程宜迅速，不宜超过 2min，空白滴定方法同前，记录两次滴定所得的结果，求平均值 V1。锥形瓶号 1（滤液） 2（滤液） 3（空白）滤液（ml） 10 101%草酸（ml） 10操作 用已标定的 2，6 一二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15 秒不退色记录（所用的毫升数 1.45 1.44
6、0.32ml）平均值（ml） 1.445 （V 1） 0.32分析：两次滴定的结果分别为 4.45ml 和 4.44ml，比较接近，只相差了 0.01，说明滴定结果还是比较准确的，这就要求每一步操作都要很正确且准确。此次空白滴定和前面在标定 2，6 一二氯酚靛酚溶液的浓度时的空白滴定分别为 0.37ml 和 0.32ml，相差了 0.05ml，误差相对比较大。根据分析可能是 1.滴定终点时溶液变红程度所选取的标准不够一致，有少许不同；2.滴定过程中溶液溅到了锥形瓶壁而没有弄回溶液中；影响了实验结果。（三）结果计算根据实验数据计算出每 100g 样品的维生素 C 含量：维生素 C（mg/100g
7、 样品）= 100123()VKW式中：V 1 为滴定样品液所用去染料体积（ ml）;V2 为滴定空白所用去染料体积（ ml）;V3 为样品测定时所用滤液体积（ 10ml）;为样品提取液的总体积；K 为 1 毫升染料能氧化维生素 C 的量（mg ）;W 为称取样品重量(g )。计算：维生素 C（mg/100g 样品） = 100=（4.4450.32）123()VKW0.03597100100/1.810=82.43mg/100g根据查得值 85100 mg/100g（数据来源http:/ 此结果是比较接近的，但还是偏少了。通过分析，偏少的原因可能是1. 在标定 2，6 一二氯酚靛酚溶液的浓度
8、时，滴定标准维生素 C 溶液过程中，变红程度较深时才停止滴定，所用 2，6 一二氯酚靛酚溶液增多，导致最终算出的 K 值偏小；2. 在标定 2，6 一二氯酚靛酚溶液的浓度时，滴定标准维生素 C 溶液过程中，有少许2，6 一二氯酚靛酚溶液滴到锥形瓶壁了，所用 2，6 一二氯酚靛酚溶液增多，导致最终算出的 K 值偏小；所以这两个原因共同导致了最终的实验结果比查得值偏小。不过同时也还有可能是数据本身，因为我查的的数据是温州花椰菜的维生素含量，而实验室的花椰菜不一定是产自温州，地域、季节都会影响到其中维生素的含量。五、注意事项1滴定时速度要尽可能快，因样品内一般都含有一些能特将 2，6 一二氯酚靛酚还
9、原的其它物质，尽管它们还原比染料的能力一般较维生素 C 弱。2滴定所用染料要在 14ml 之间，否则须增减样品量或将提取液适当稀释。3.抗坏血酸易溶于水，也极易被氯化，故提取抗坏血酸时，须抑制组织中氧化酶活性。2%草酸可抑制该酶，1%草酸则不能，三氯醋酸、偏磷酸、盐酸有同样功效。 Fe2+能还原二氯酚靛酚，如用醋酸（8%即可）则 Fe2+不会很快与染料起作用。4.样品提取液应避免日光直射，否则会加速抗坏血酸的氧化。5.在生物组织内和组织提取物内，抗坏血酸还能以脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的形式存在。它们同样地具有维生素 C 的生理作用，但不能将 2，6 一二氯酚靛酚还原脱色。6.本实验必须在酸性
10、条件下进行。在此条件下，干扰物反应进行得很慢。7.样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚，但反应速度均较抗坏血酸慢，因而滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一点一点地加入，并要不断地摇动锥形瓶直至呈粉红色，于 15s 内不消退为终点。 【1】六、实验讨论思考题：（一） 、为了测得准确的维生素 C 含量，实验过程中都应注意哪些操作步骤？答：1.量取液体时一定要精确，注意读数时视线一定要与液体凹液面最低处相持平；2.滴定时一定要控制好滴定速度，不要一下子滴下太多 2，6 一二氯酚靛酚溶液，导致滴定过量，若发生此种情况要重新做一次，不能取巧；3.滴定过程要注意观察锥形瓶中溶液的颜色，准确判断滴定终点，
11、即以微红色能保持 15 秒不退色为止，而且每次滴定终点的微红色都要采取同样的标准，即变红程度要一样。（二） 、试简述维生素 C 的生理意义。答： 1、合成 Collagen（胶原蛋白）-以形成软骨、骨质、牙釉质及血管上皮重要基质。 2、促进脯胺酸转变为氢脯胺酸之反应，而氢脯胺酸为构成胶原重要成分之一，因此维生素 C 可促进胶原之生成。 3、维持结缔组织之正常-因为胶原是构成结缔组织之细胞间质。 4、参加体内氧化还原反应-维生素 C 可参加酪胺酸及某些物质的氧化反应。 5、制造肾上腺类固醇激素。 6、增进伤口愈合及增加对受伤及感染等压力的感受力。 7、在受感染、发热时，此维生素之损失亦随之增加，故其对刺激之反应扮演重要角色。 8、解毒作用； 9、改善心肌功能，减低毛细血管脆性，增加机体抵抗力； 10、对抗游离基，有助于防癌，降低胆固醇，防止坏血病。 【2】现在我们做生物化学实验的时候，主要都是两人一组搭配合作，当中就涉及到怎样分工、怎样合作，所以两人要默契配合，这样有利于实验顺利进行，也可以提高效率。此次实验我们就是采取分工合作的，就像在做滴定操作的时候，就要一人控制活塞，另一人振荡锥形瓶观察颜色的变化，所以好的分工合作不仅可以保证实验顺利进行，同时也能保证实验的质量；此次实验还有比较多的主要事项，实验过程当中要牢记这些注意事项，以保证结果的准确性。七、参考文献【1】http:/
