1、丹参、黄芪、苦参对 CCl4 肝纤维化模型大鼠的影响及其交互作用的实验研究?38?山西中医 2005 年 12 月第 21 卷第 6 期SHANXIJOFTCMDec.2005Vo1.21No.6实验研究丹参,黄芪,苦参对 CCI4 肝纤维化模型大鼠的影响及其交互作用的实验研究李晶指导张剑宇摘要:目的:以 CC1 损伤肝纤维化大鼠作为模型,用正交设计方法,对文献报道有抗肝纤维化作用的中药丹参,黄芪及苦参进行多因素,多水平及交互作用的研究.方法:雄性 wistar 大鼠 48 只,随机分为 3组,正常对照组(一 8),模型组(一 8),实验组(=32),应用 CC1 溶液皮下注射及高脂玉米粉饲料
2、喂养 6 周,证实造模成功后,采用 3 因素 2 水平(取高,低剂量)正交设计,按 L.(2)正交表要求将实验组再次随机分为 8 组(n 一 4),各实验小组分别以不同实验药物灌胃,6 周后观察各组大鼠 HA,PP,LN,IVC 指标 ,测定肝组织羟脯氨酸(HYP),同时作肝脏病理切片检查.结果:(1)丹参和黄芪能使肝纤维化四项指标显着降低,使肝组织羟脯氨酸含量显着降低(P 均0.05).(2) 丹参和黄芪合用能降低 LN 和C,能降低肝组织羟脯氨酸含量(P 均0.05).(3)丹参,黄芪和苦参合用有交互作用 (P 均0.05).结论:(1)丹参和黄芪单味药有明显的抗肝纤维化作用.(2) 丹参
3、,黄芪和苦参合用有交互作用,三药合用效果最佳,最佳组方为第7 组,即丹参(高剂量), 黄芪(高剂量), 苦参(低剂量 ).关键词:肝纤维化;丹参;黄芪;苦参;实验研究中图分类号:R282.71 文献标识码:A 文章编号:10007156(2005)06003804ExperimentalResearchintotheEffectofSimpleRecipeandTheirInteractionofDan-shenRoot,MilkVetehandFlavescentSophoraontheRatModelofLiverFibrosisLIJing.(InstituteofTCMandShanx
4、iProvince,Taiyuan,030012,China)Abstract:Objective:RatmodelofliverfibrosiswasinducedbyCC14,andorthogonaldesignwasusedtoresearchtheeffectofdanshenroot,milkVetehandflavescentsophoraintreatingliverfibrosis.Thesimplerecipeandtheirinteractionwerebothstudied.Method:48femalewistarratswererandomlydividedinto
5、threegroups:thecontrolgroup(n 一 8),themodelgroup(n 一 8)andthetreatmentgroup(n 一 32).Ratsinthemodelgroupandthetreatmentgroupwerefedoncornpowderwithhighfat,andwereinjectedbyCC14subcutaneouslyfor6weeks.Whenthemodelhadbeenmade,orthogonaldesignof3factorsand2levels(highandlowdosage)wasusedtodividethetreat
6、mentgroupagaininto8groups(N=4).Eachgroupwasinfusedwithdifferentmedicine.HA,PP,LN,IVC,HYPandliverbiopsyofratsineachgroupwereobservedafter6weeks.Result:(1)SimplerecipeofdanshenrootandmilkvetehcouldsignificantlylowerHA,PP,IVCandHYP(P0.05).(2)CombineddanshenrootandmilkvetehcouldlowerLN.IVCandHYP(P0.05).
7、(3)Danshenroot,milkvetehandflavescentsophorahadinteractiveeffectintreatingliverfibrosis.Conclusion:(1)Simplerecipeofdanshenrootandmilkvetchhasevidenteffectonliverfibrosis.(2)Danshenroot,milkvetehandflavescentsophorahaveinteractiveeffect.Highdosageofdanshenroot,highdosageofmilkvetehandlowdosageofflav
8、escentsophorahavethebestelect.Keywords:liverfibrosis;danshenroot;milkveteh;flavescentsophora;interaction;experimentalresearch肝纤维化是许多慢性肝病的共同病理改变,阻止肝纤维化的形成和发展对防治肝硬化具有重要意义.笔者采用作者简介:李晶,女,1968 年 6 月生,主治医师,硕士,山西省中医药研究院(太原 030012).CC1 大鼠肝纤维化模型 ,正交实验方法,对三种常用抗纤维化中药进行多因素及部分一级交互作用的重复试验,以反映肝纤维化的多指标综合观察,同时比较作用突出
9、的单味药与优化复方的作用特点与优势,结果如下.山西中医 2005 年 l2 月第 2l 卷第 6 期 SHANXIJOFTCMDec.2005Vo1.21No.6?39?1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 实验药物:健康 3 月龄雄性 Wistar 大鼠( 清洁级 )48只,体重 15020g(由山西医科大学动物实验中心提供).1.1.2 实验药物及试剂:HA,PP,LN,C 放免试剂盒(上海海军医学上海研究所);四氯化碳(carbontetrachloride,CCI4)分析纯(上海长江化工厂);橄榄油,胆固醇化学纯(上海伯澳生物科技公司);羟脯氨酸标准品(hydroxyproline
10、,Hyp)( 中国科学院上海生物化学研究所);丹参煎剂(1.2g/mL),黄芪煎剂(1.2g/mL), 苦参煎剂(O.8g/mL)分别制备为高,低剂量组,以上药物由山西省中医药研究院制剂室制备.1.1.3 实验仪器:光学显微镜 X9281(梧州市光学仪器厂制造);离心机 LX26401(fib 京医疗仪器修理厂制造 )I7 放射免疫计数仪 GC300(中国科学技术大学科技实业总公司);OLYMPUSVANOx 纤维摄像仪(日本制造);LECIARM2135 切片机 (德国制造).1.2 实验方法1.2.1 动物模型制备:首次 CCI 溶液 5mL/kg 体重,以后4O%CCI 橄榄油溶液 3m
11、L/kg 体重皮下注射,每周 2 次,共6 周.饲以高脂玉米粉饲料(79.5 玉米粉+20.0 猪油+0.5 胆固醇).1.2.2 实验分组:48 只大鼠适应性喂养 1 周后,两次随机分组.第一次随机分组如下:模型组(一 8)注射 CCI;正常组(=8) 注射等量生理盐水;实验组(一 32)造模成功后再次随机分组,给不同剂量药物干预.第二次随机分组如下:32 只实验组大鼠,按表 1 正交设计再分为 8 组,每组 4 只(一 4),分组给药.因素水平设计:采用 3 因素(每味药为一个因素).其代号随机选定.水平(rg 高,低剂量 )正交设计.1 组 ABC:丹参 (低剂量),黄芪(低剂量),苦参
12、(低剂量);2 组 ABC:丹参(低剂量),黄芪(低剂量),苦参( 高剂量);3 组 ABC:丹参(低剂量),黄芪(高剂量),苦参( 低剂量);4 组 ABC:丹参(低剂量),黄芪(高剂量),苦参( 高剂量);5 组 ABC:丹参(高剂量),黄芪(低剂量),苦参( 低剂量);6 组 ABC:丹参(高剂量),黄芪(低剂量),苦参( 高剂量)I7 组 ABC:丹参(高剂量),黄芪(高剂量), 苦参(低剂量)I8 组 ABC:丹参(高剂量),黄芪(高剂量), 苦参(高剂量).表 1L.(2)正交表试号因素BABCACBCA1.2.3 给药及留取标本时点界定:造模第 6 周,病理检查证实肝纤维化形成,
13、开始用药,低剂量按成人用量的 2O 倍折算,高剂量为 4O 倍.灌胃给药 6 周.12 周末次给药禁食 12h 后,全部处死动物,心脏采血.1.3 检测指标1.3.1 血清学指标:肝纤维化指标测定:取 2m1 不抗凝血,常规分离血清,用放免法测 LN,HA,PC,C.1.3.2 肝组织羟脯氨酸(HYP)的测定:采用 Jamall 法.取200g 肝脏组织在 4mL,6mol/L 的盐水中匀浆,然后在 110C 水解 12h.取 5OmL 过滤后的水解液烘干,加氯胺 T 氧化,显色,在 558nm 波长读光密度值,根据标准曲线计算样品羟脯氨酸浓度(g/g 肝组织 ).1.3.3 病理学检查及图像
14、分析:取肝脏相同部位组织 o.5ams,用 1o 甲醛固定,石蜡包堙,切片,HE 染色,光镜下观察.1.4 统计学处理:实验数据用(土)表示,采用正交设计方差分析,全部实验数据采用 SAS8.2 软件进行统计处理.2 实验结果2.1 模型组与正常组肝纤维化指标观察:模型组大鼠较正常组大鼠精神萎靡,毛发蓬乱而无光泽.活动减少,体重增长缓慢 I 取材时.实验组大鼠肝脏色泽变淡,表面有细小颗粒 I 实验组大鼠喂药后,毛发光泽明显恢复,活动增加,喂药后实验组大鼠体重增加.模型组与正常组各项指标变化.见表 2.表 2 模型组与正常组肝纤维化指标(土 s)与正常大鼠比较,模型组 HYP,LN,HA,PC,
15、C 增高均非常显着,经 t 检验,各指标 P 值均O.05,组间差别有统计学意义,提示造模成功.2.2 实验组肝纤维化指标观察:见表 35.空一 1221211212211221121221211122221111221122.瞅.4O.山西中医 2005 年 12 月第 21 卷第 6 期SHANXIJOFTCMDec.2005Vo1.21No.6经重复正交实验方差分析,丹参和黄芪单味药的主效应可使肝纤维化四项指标显着降低.P 值均0.05,提示丹参和黄芪有明显的抗肝纤维化作用.对其交互作用的进一步分析,可知丹参和黄芪合用能降低 LN 和C,两者在抗肝纤维化时有协同作用.表 5 实验组肝组织
16、羟脯氨酸含量测定经重复正交实验方差分析,丹参单味药的主效应可使肝组织羟脯氨酸含量显着降低.P 值均0.05,提示丹参有明显的抗肝纤维化作用.对其交互作用的进一步分析,可知丹参和黄芪合用能降低肝组织羟脯氨酸含量,两者在抗肝纤维化时有协同作用.同时丹参,黄芪和苦参合用有交互作用,也就是三药合用效果最佳.最佳组方为第 7 组,即丹参(高剂量 ),黄芪(高剂量), 苦参(低剂量).2.2 光镜下大鼠肝脏组织形态学改变:光镜下正常肝细胞以中央静脉为中心放射状排列,细胞核及胞浆大小均等,无炎性细胞浸润,无胶原纤维增生,模型组大鼠肝小叶结构不清,肝索排列紊乱,大多数肝细胞肿胀,脂肪变性,坏死,肝细胞团块再生
17、,汇管区有大量成纤维细胞,纤维细胞和胶原纤维,并有假小叶形成.用药各组纤维增生程度较轻,肝细胞再生活跃.3 讨论肝纤维化是一切慢性肝病的共同病理学基础,这种病理改变贯穿于慢性肝病的发展过程中,是一切慢性肝病向肝硬化发展的必经阶段,也是最后可以逆转的阶段 L1.所以抗肝纤维化治疗非常重要.本实验以 CCI 肝纤维化大鼠作为疾病载体,实验中取丹参,黄芪,苦参三因素二水平(高低剂量)不同组合进行干预.通过正交实验观察各种药物不同剂量对肝纤维化指标HA,PC,C,LN 的影响 ,及对肝组织羟脯氨酸含量影响一.同时观察药物问交互作用.在临床反映肝纤维化的血清学指标中,透明质酸 HA 是唯一无核心的糖胺多
18、糖,其反映出肝纤维化程度一肝窦毛细血管化.目前认为 HA既是反映肝纤维化的敏感指标,也能反映肝功能损害的严重程度.层黏连蛋白 LN 指标口 1 反应肝窦毛细血管化和汇管区纤维化.实验组肝纤维化四项指标结果讨论:经重复正交实验方差分析,丹参和黄芪单味药的主效应使肝纤维化四项指标显着降低,提示丹参和黄芪有明显的抗肝纤维化作用.丹参为常用活血化瘀药,在 CCI 肝纤维化大鼠模型研究中显示,肝内微循环障碍得以改善,同时肝内病理性增生的纤维明显减少,说明丹参具有抑制肝内纤维增生的作用,亦有报道显示,丹参可抑制体外培养的成纤维细胞,并可以激活胶原酶,促进胶原蛋白降解,提示丹参可以通过多途径对抗肝纤维化.目
19、前,丹参已成为临床抗肝纤维化常用药物.黄芪为临床常用补气药,药性温和,已被证实有抗肝纤维化作用,黄芪可以减少总胶原及 I,V 型胶原在大鼠肝脏的病理沉积,使胶原两者在抗肝纤维化时有协同作用.C 及 LN 主要反映基底膜增生,尤其有器官纤维化趋向或纤维化时可升高.肝组织羟脯氨酸含量测定能客观地反映肝组织纤维化程度.羟脯氨酸含量测定是评价抗肝纤维化疗效的金指标.经重复正交实验方差分析,丹参和黄芪使肝组织羟脯氨酸含量显着降低.提示丹参和黄芪单药应用时有明显的抗肝纤维化作用.对其交互作用的分析,一4山西中医 2005 年 l2 月第 21 卷第 6 期 SHANXIJOFTCMDec.2005Vo1.
20、21No.6?41?可知丹参和黄芪合用能降低肝组织羟脯氨酸含量,两者在抗肝纤维化时有协同作用.同时丹参,黄芪和苦参合用有交互作用,也就是三药合用效果最佳.最佳组方为第 7 组,即丹参(高剂量 ),黄芪(高剂量), 苦参(低剂量).总之,目前中医药在抗肝纤维化的研究中已显示了明显的优势,本着中医辨证论治以及重视药物量效关系为其取效关键的特点,通过动物实验探讨不同剂量丹参,黄芪,苦参在抗肝纤维化中的疗效,为临床治疗提供实验依据.参考文献:1程明亮,杨长春 .肝纤维化的基础研究及临床 EM.北京: 人民卫生出版社,2002:9.2中国中西医结合活血化瘀研究学会.血瘀证及活血化瘀研究EM.北京 :学苑
21、出版社,1990;5-8.3刘平.扶正化瘀中药复方促进 CCI 大鼠肝纤维化逆转的配伍机理研究J.上海中医药大学,2002,16(1):3741.4张玲.联合检测血清 HA,LN,PC,C 型胶原对肝纤维化的诊断价值J.中华肝脏病杂志,2000,8(2O):117.5李文才.肝组织羟脯氨酸含量测定方法的优化J.上海医科大学,2000,27(4):295297.(收稿日期:200510-10)本文编辑:王福岗参附汤治疗厥证验案举隅范同心范颖颖关键词:厥证;参附汤;验案中图分类号:R289.3 文献标识码:B 文章编号:10007156(2005)06004101参附汤为竣补阳气的名方,主治阳虚暴
22、脱,上气喘气,汗出如珠,肢冷脉微者.凡大病虚极欲脱,产后或月经暴行崩注,或痈疡久溃,血脱亡阳等,均可用该方救治.笔者应用参附汤配合救治多脏器功能衰竭 2 例,介绍如下.1 厥证(多脏器衰竭合并肺炎)王某,男,86 岁,2004 年 1O 月 18 日初诊.素罹多种老年病.突然发作胸痹,心痛彻背,3 日后又咳嗽,高热,痰黄而稠.采用抗生素及扩冠药物治疗 2 周后,病情加重,遂请中医会诊.诊时患者昏迷不醒,体温 38C,贫血貌,周身浮肿,冷汗出,四肢不温,少尿,脉微欲绝.肺部有实变体征,心率加快,心律不齐,白细胞数 161O./L,N0.82,血红蛋白 72g/L,尿素氮升高,尿蛋白(+),BP1
23、1/6kPa.证属正衰邪炽,阳气虚脱.予参附汤加味.药用:红参,白术,防己各 20g,云苓 30g,附片 10g,全瓜蒌 12g,赤芍 15g.每日 1 剂,水煎取汁 100mL,分两次鼻饲.服药 5 剂,病情即有转机,冷汗止,血压升至正常.坚持继服上方 1 周,病情日渐改善.守上方继服 3 周后.病人食纳倍增,浮肿逐步消退,肺部感染逐渐吸收,心,肾功能逐渐恢复,体温,血象恢复正常.按:该案患者年老体衰,重病缠身,邪毒炽盛,正难胜邪,致患者正衰邪炽阳脱之势.用参附汤加味,药中病机,令正气胜而邪退,使患者诸证悉转平安.2 厥证(多脏器衰竭,感染性休克)张某,男,8O 岁,2004 年 11 月
24、9 日初诊.患者素有高血压,陈旧性心肌梗塞,心功能不全,肾功能不全,呼吸衰竭等多种疾病.近 4 天来出现发热,体温在作者简介:范同心,男,1954 年 4 月生,主治中医师,河南省正阳县人民医院(正阳 463600);范颖颖,单位同第一作者.38以上,双肺可闻及大量湿罗音.血象 WBC 为 141O./L,N 为 0.80,X 光检查示双肺纹理增粗,可见多发小片状阴影,考虑肺部感染.先后足量应用头孢他定,阿莫西林,舒巴坦治疗,体温未能控制.昨晚血压突然下降,冷汗出,四肢不温,尿少,心律不齐,BP9.5/5kPa,经静滴多巴胺仍难以维持.邀中医会诊时,患者处于昏迷状态,面色萎黄,呼吸快而稍显微弱
25、,手足不温,皮肤湿冷,脉细弱而不齐.病为厥证,证属热毒炽盛,元阳虚脱.法当清热解毒,益气回阳.拟方:红参 20g,熟附片 10g.每日 1 剂,水煎取汁 100mL,1 次鼻饲送下;生黄芪 30g,金银花,连翘,柴胡,黄芩 ,丹参,麦冬,石菖蒲各 15g,板蓝根 20g,知母 30g.每日 1 剂,水煎 2 次,去渣浓缩成 100mL,分两次鼻饲.服上药 5 剂,血压回升.升压药在 2 天前已可减量至原来的 1/3,而血压可维持在 17.5/10.5kPa,体温降到 36.8,四肢转温,尿量正常,脉细.停用升压药.再进 5 剂,体温正常,血压稳定,无早搏,尿量正常.按:老年肺部感染是临床常见的对老年人生命威胁较大的疾病,多属病情复杂,治疗棘手,特别是在多脏器病症基础上并发的肺部感染,选择抗生素常有多种顾虑,且往往效果不佳.中药及中西医结合治疗常能取得意想不到的效果.该案患者年龄大,病种多且危重,由于正气虚弱,招致外
