1、第1O期(总第368期) 农产品加工(学刊) 2014年10月 Academic Periodical of Farm Products Processing No1O 0ct 文章编号：16719646(2014)10b一006702 食品中柑橘红2号与罗丹明B及 苏丹红llV的高效液相色谱检验方法 吴 坤 夭 (陕西省产品质量监督检验研究院，陕西西安710048) 摘要：建立高效液相色谱同时测定食品中多种脂溶性染料的含量测定，脂溶性着色剂用正己烷提取后经中性氧化铝 固相萃取柱净化，用反相色谱柱分离，高效液相色谱仪测定，外标法定量。样品前处理简单快捷，分离度高，灵敏 度高且结果准确可靠，大大
2、提高了实验室的工作效率。 关键词：高效液相色谱；染料；脂溶性 中图分类号：TS2075 文献标志码：A doi：103969jissn16719646(X)201410050 High Performance Liquid Chromatography(HPLC)Testing Method of Citrus Red 2，Rhodamine B，Sudan Red Iin Food WU Kun (Shaanxi Province Product Quality Supervision and Inspection Institute，Xian，Shaanxi 710048，China) A
3、bstract：High performance liquid chromatography(HPLC)is established at the same time the determination of food in a variety of content determination of fat soluble dyesfat soluble colorant extracted with nhexane after purification by neutral alumina solidphase extraction column，using reversed phase c
4、hromatographic column separation，highperformance liquid chromatograph，external standard methodSample preparation is simple and fast，high degree of separation，high sensitivity and accurate and reliable，greatly improving the efficiency of the laboratory Key words：high performance liquid chromatography
5、(HPLC)；dye；fat soluble 0引言 料都具有脂溶性，所以可以利用一种方法对其检验。 柑橘红2号染料为橘红色粉末，不溶于水，溶 于芳烃类溶剂，作为染色剂增加某些食品尤其是甜 橙果实的红色，提高食品的市场竞争力。但由于其 可能的致癌性，柑橘红2号色素被欧盟和日本等国 家和地区所禁用。罗丹明B(Rhodamine B)又称玫 瑰红B，蕊香红B，若丹明或碱性玫瑰精，俗称花粉 红，是一种具有鲜桃红色的人工合成染料，属于非 食品原料。曾经用作食品添加剂，但后来试验证明 罗丹明B会致癌，现在已不允许用作食品染色。 “苏丹红”并非食品添加剂，而是一种化学染色剂。 它的化学成分中含有一种叫萘的
6、化合物，该物质具 有偶氮结构，由于这种化学结构的性质决定了它具 有致癌性，对人体的肝肾器官具有明显的毒性作用。 苏丹红属于化工染色剂，主要是用于石油、机油和 其他的一些工业溶剂中，目的是使其增色，也用于 鞋、地板等的增光，又名“苏丹”。由于以上几种染 1材料与方法 11试剂与材料 甲醇、乙腈、丙酮、正己烷，均为色谱纯；无 水硫酸钠：650 cIC灼烧4 h，贮于密封容器中备用； 层析柱管(内径高)：1 cm5 cm的注射器管；层 析用氧化铝(中性100200目)：105干燥2 h， 于干燥器中冷至室温；微孔滤膜：045 m有机系。 氧化铝层析柱：在层析柱管底部塞人一薄层脱 脂棉，干法装入处理过
7、的氧化铝至3 cm高，轻轻敲 实后加一薄层脱脂棉，用10 mL正己烷预淋洗，洗 净柱中杂质后，备用。 12标准溶液的配制 罗丹明B标准储备液：准确称取适量罗丹明B标 准品，用甲醇配制成质量浓度为100gmL的标准储 备液。此溶液在04避光保存，有效期l2个月。 柑橘红2号标准储备液：准确称取适量柑橘红 收稿日期：20140625 作者简介：吴坤(1985一)，女，本科，研究方向为食品农副产品的检验。 68 农产品加工(学刊) 2014年第l0期 2号标准品，用甲醇配制成质量浓度为100 IgmL的 标准储备液。此溶液在一18避光保存，有效期 12个月。 苏丹红I，号标准储备液：分别称 取适量苏
8、丹红I，苏丹红，苏丹红及苏丹红 标准品，用5 mL三氯甲烷溶解，用正己烷配制成质 量浓度10 mgmL的标准储备液。此溶液在04 避光保存，有效期12个月。 基质标准系列溶液：分别取上述标准溶液，用 空白基质溶液稀释成质量浓度为025，05，1，2， 5，10gmL的标准系列溶液。 13仪器与设备 高效液相色谱仪(配有二极管检测器)；超声清 洗器，上海江宁机械厂产品；漩涡混匀器，海门市 其林贝尔仪器制造有限公司产品；超纯水机，成都 超纯科技有限公司产品；离心机(06 000 rmin)， 北京医用离心机厂产品；天平(分度值为001 g和 01 mg)，赛多利斯科学仪器有限公司产品。 1-4样品
9、处理 将液体、浆状样品混合均匀，固体样品需磨细。 称取试样10 g(精确到001 g)于150 mL三角烧瓶 中，加入5 g无水硫酸钠脱水，再加入50 mL正己 烷，涡旋振荡3 min，超声波水浴中超声提取15 min。 用5 mL正己烷活化中性氧化铝柱，将上述提取液 10 mL转移至中性氧化铝柱中，加入15 mL丙酮淋 洗，抽干，立即用10 mL甲醇一水(体积比98：2) 洗脱，洗脱液过O45 tzm有机滤膜，待上机。 15色谱分析条件 色谱柱：Hypersil ODS 250 mm46 mm，粒径 5 Ixm；柱温：35 oC；流速：10 mLmin；检测波长： 500 nm；进样量：20
10、 L；流动相：甲醇与水体积比 98：2 2结果与讨论 21线性关系 精密吸取上述基质标准系列溶液各20 进样 分析，记录各待测组分色谱峰面积，以质量浓度为 横坐标 )、峰面积为纵坐标(y)，进行回归分析。 结果表明，柑橘红2号，罗丹明B，苏丹红I， ，在015gmL线性关系良好。 回归方程和线性系数见表1。 22检测限 测定低浓度加样回收率溶液的信噪比，以信噪 比3：l计算方法检出限。柑橘红2号的检测限为 01 mg&g，罗丹明B的检测限为0005 mgI【g，苏丹 红I，的检出限为001 mg，kg 2-3精密度试验 取质量浓度为1 IxgmL的基质标准溶液，连续 表1 回归方程和线性系数
11、名称 线性范围IxgmL 回归方程 相关系数 进样6次，记录峰面积，结果表明柑橘红2号，罗丹 明B，苏丹红I，IV 6次进样峰面积的RSD 值为0823，在允许范围之内，精密度良好。 24加标回收率试验 取样品5 g，分别加入不同质量分数水平的标准 品适量，照样品处理项下方法依法操作，计算回收 率及相应RSD值，结果表明本方法回收率试验结果 良好。 回收率试验见表2。 表2回收率试验(n=6) 食品禁用着 色剂 低质量分数 中间质量分数 高质量分数 01 mgCkg 02mgkg 05mgkg 平均，RSD平均RSD平均RSD 柑橘红2号 罗丹明B 苏丹红I号 苏丹红号 苏丹红号 苏丹红号 2
12、-3 8O9 1-8 14 902 19 2O 891 22 15 905 21 l-2 916 1-4 17 903 16 3结论 本方法通过优化样品预处理条件，利用高效液 相色谱对多种脂溶性染色剂同时完成分离，能够满 足试验的要求，并节省了分析时间和溶剂，提高了 实验室的工作效率。 参考文献： 1】 杨慧芬，李明元，沈文食品卫生理化检验标准手 册M】北京：中国标准出版社，1997：146148 2】 国家质量监督检验检疫总局SNT 3540-2013出口食 品中多种禁用着色剂的测定液相色谱一质谱顺谱法S】 北京：中国质检出版社，2013 3 国家粮食质量监督检验中心GBT 19681-2005食品中 苏丹红染料的检测方法高效液相色谱法S北京：中 国标准出版社，2005 4 王春艳食品中苏丹红染料检测方法的研究J中国卫 生检验杂志，2005，15(11)：1 3131 315 5】 唐静，苗延霞液相色谱仪最小检测浓度测量结果不确 定度评定J中国计量，2010(10)：100101 66 林清荷，陈鑫，吴忠兴辣椒粉中罗丹明B液相色谱检 测方法的研究【J】农产品加工(学刊)，2012(11)： 】57-】64 6 8 0 1 2 6 粥 O 6 7 9 9 5 ， 1 1 2 6 4 6 1 2 l 5 2 2 3 4 8 9 9 9 9 9
