1、 3国家杰出青年基金资助项目nullnullnullnullnullnullnullnullnull号null青岛市科委资助项目nullnullnull2null2null2null2null号nullnullnull2null2null2null号null山东省博士基金资助项目nullnullnullnullnullnullnullnull号阙华勇null男null出生于nullnullnullnull年null月null博士null研究员null2nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnul
2、lnullnullnullnull收稿日期nullnullnullnullnull2nullnull2nullnull null收修改稿日期nullnullnullnullnull2nullnull2nullnull雄性四倍体与雌性二倍体杂交培育全三倍体长牡蛎( )的研究3阙华勇 张国范 刘 晓 郭希明张福绥null中国科学院海洋研究所 青岛 nullnullnullnullnullnullnullnull美国新泽西州立大学海洋与海岸科学研究所nullnullnullnullnullnull贝类研究实验室nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull
3、nullnullnullnullnullnullnull null nullnullnull提要 将美国雄性四倍体长牡蛎与中国北方海区雌性二倍体长牡蛎杂交null进行全三倍体长牡蛎培育研究结果表明null四倍体与二倍体杂交的受精率为nullnull nullnullnull nullnull nullnullnull null平均为nullnull nullnullnull null来自同样雌贝的二倍体对照组的受精率平均为nullnull nullnullnull 杂交组和对照组面盘幼虫的平均孵化率分别为nullnull nullnullnull和nullnull nullnullnull n
4、ull受精卵发育至稚贝的存活率null杂交组和对照组分别为nullnullnullnull和nullnullnullnull 杂交组累计培育出眼点幼虫nullnullnullnullnull亿null稚贝nullnullnullnullnull亿杂交组幼虫的生长略快于对照组null但无显著差异经流式细胞仪分析null杂交组的幼虫!稚贝!幼贝等均为nullnullnull null三倍体中国北方海区的长牡蛎可以与美国的雄性四倍体长牡蛎实现良好的杂交null产生nullnullnull null三倍体利用长牡蛎四倍体培育三倍体null方法简便高效null显示出四倍体在贝类三倍体商业生产中的巨大应用
5、价值关键词 长牡蛎null四倍体null三倍体null杂交null流式细胞术中图分类号 nullnullnull nullnull长牡蛎null nullnullnullnullnullnullnullnull通常称为太平洋牡蛎null是我国海水贝类养殖中重要的经济贝类长牡蛎三倍体的生物学性状具有一定的优势null是一种优良的贝类养殖对象null周一兵等nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnu
6、llnullnullnull nullnullnullnullnullnull 近年来null我国利用null2二甲基氨基嘌呤null简称null2nullnullnull等诱导剂null开展了长牡蛎等经济贝类的三倍体规模化生产技术研究和中试null取得了长足的进步null张国范等nullnullnullnullnull null王如才等nullnullnullnullnullnull 美国在成功培育出长牡蛎四倍体后null利用四倍体与二倍体杂交null获得了nullnullnull null三倍体这样null除了从二倍体直接诱发三倍体外null又建立了一种全新的三倍体培育技术nullnull
7、null nullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnull虽然我国已开展贝类四倍体研究nullnullnullnull nullnullnullnullnull null常亚青等nullnullnullnullnullnull null但是尚未获得四倍体成体由于四倍体种贝不易获得null对于利用四倍体生产三倍体的技术null国内尚未尝试作者通过与美国的null公司合作null在nullnullnullnull年实验基础上null于nullnullnul
8、lnull年和nullnullnullnull年两次引进该公司的四倍体长牡蛎亲贝null开展了四倍体与二倍体杂交培育三倍体的规模实验null旨在阐明美国的长牡蛎四倍体是否可与中国北方海区的长牡蛎杂交生产三倍体null探索四倍体第nullnull卷 第null期海 洋 与 湖 沼nullnull1nullnull nullnullnull1nullnullnullnullnull年nullnull月nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nulln
9、ull1 nullnullnullnullnull 与二倍体杂交生产三倍体的技术工艺null进一步考察杂交三倍体长牡蛎在我国养殖生态环境下的生物学性状及潜在的优势1 材料与方法111 牡蛎亲贝二倍体长牡蛎null nullnullnullnullnullnullnull亲贝为null龄贝nullnullnullnullnull年的二倍体亲贝分别取自山东青岛!辽宁大连海区的养殖群体nullnullnullnullnull年的二倍体亲贝来自荣成海区的养殖群体在美国四倍体到达前null周null把二倍体亲贝从海上移入室内null投喂单胞藻nullnullnull 下培育四倍体长牡蛎雄贝nullnul
10、lnullnullnull年为null null龄贝nullnullnullnullnull年为null null龄贝null均购自美国null公司null在低温条件下空运至青岛null运输干露时间nullnull四倍体雄贝到达后null转入null nullnull 的海水中培育112 配子获取采用解剖法获取配子开启二倍体贝壳null取性腺组织经海水稀释后逐个镜检鉴定性别选择雌性个体null解剖卵巢组织null剥离的卵子悬浮液经nullnullnull筛绢过滤null去除组织碎片等解剖四倍体精巢null获取精子悬液null经nullnullnull的筛绢过滤同样的方法制备二倍体的精液实验用相
11、同数量的二倍体雄贝与四倍体雄贝不同个体的卵子或精子null分别置于单独的容器中113 杂交授精镜检选用未发生意外受精的卵子null混合后分成null组null即杂交组nullnull和二倍体对照组nullnullnull分别与四倍体!二倍体的精子受精此外null留置一小部分卵子null作为null组null不加精子null继续观察nullnullnullnullnullnull检查是否发生受精取适量精子null加入卵子悬浮液中镜检每个卵子的周围附上null nullnullnullnullnull左右的精子为宜通过搅拌使卵子保持悬浮状态镜下观察到nullnull null以上的卵子出现第二极体
12、后null将受精卵悬浮液稀释null倍统计受精卵数量及受精率根据受精卵数量null选用nullnullnullnull或nullnullnullnull水体培育胚胎和幼虫114 幼虫培育孵化和幼虫培育的温度为nullnull null盐度为nullnull 孵化密度为nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull幼虫培育的密度为nullnullnullnullnullnullnullnull受精后null天null将孵化的形面盘幼虫用nullnullnull的筛绢滤出null重新悬浮在新鲜砂滤海水中以后null每天换水一半null每null天全换水n
13、ull次前期幼虫投喂以等鞭金藻 nullnullnullnullnull投喂量为nullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnull#nullnullnull后期幼虫添加适量扁藻 nullnullnull每天取样null检查幼虫的存活和生长情况当眼点幼虫比例达到nullnull null时null投放成串的扇贝壳采苗null出池的牡蛎苗暂养null天后null进行夹苗浮筏养殖115 倍性检测利用流式细胞仪nullnullnullnullnullnullnullnull进行倍性检测nullnullnullnullnullnull nullnullnulln
14、ullnullnull 检测二倍体和四倍体亲贝!杂交组和对照组不同发育时期的样本以二倍体个体的鳃组织或相同发育时期的二倍体对照组样本标定长牡蛎nullnull峰的位置2 结果211 杂交组的受精率!孵化率和各个发育阶段的存活率在未加入精子的null组中null未观察到卵子发生受精现象 组的受精卵释放第一极null期阙华勇等null雄性四倍体与雌性二倍体杂交培育全三倍体长牡蛎null null的研究nullnullnull 体和第二极体null进入卵裂null发育速度基本上与二倍体对照组同步 组的受精率为nullnull nullnullnull nullnull nullnullnull nu
15、ll平均为nullnull nullnullnull null组的平均受精率则为nullnull nullnullnull null杂交组的受精率显著低于二倍体对照组nullnullnullnullnullnullnull 受精后null天null组和组的形面盘幼虫平均孵化率分图null null批杂交组nullnull及其二倍体对照组nullnull幼虫的生长比较nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnu
16、llnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 组null 组别为nullnull nullnullnull和nullnull
17、 nullnullnull null组和组无显著差异(nullnullnullnullnull 组受精卵发育到眼点幼虫!稚贝的平均存活率分别为nullnullnullnull和nullnullnullnull null组至眼点幼虫和稚贝的存活率分别为nullnullnullnull和nullnullnullnull 组和组在这null个阶段的存活率差异不显著null nullnullnullnullnull 表null列出了各个组别的受精和孵化率212 杂交幼虫的生长组幼虫的孵化比组晚null nullnullnull前者形幼虫的壳长平均为nullnullnullnull稍大于后者null平均
18、为nullnullnullnull 在整个幼虫期null组幼虫的规格略大于同期的组幼虫null图nullnullnull但组和组的幼虫生长无显著差异nullnullnullnullnullnull 表1 长牡蛎杂交的亲贝个体数!总卵量!受精率和存活率nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnu
19、llnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 组别nullnull雌个体数nullnull雄个体数总卵量null nullnullnullnull受精率nullnullnull存活率nullnullnull形幼虫眼点幼虫稚贝null nullnullnull null nullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnu
20、llnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull null nullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull null null
21、nullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull null nullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnul
22、lnullnullnullnullnullnull nullnullnull null nullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull null nullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nulln
23、ullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull null null nullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull平均nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull平均nulln
24、ull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull注null为杂交组null为二倍体对照组nullnullnull 海 洋 与 湖 沼nullnull卷213 杂交后代的倍性组成对所用的四倍体亲贝逐个倍性分析null证实均是四倍体从检测结果可以看出四倍体产生的精子为二倍体null图nullnullnull 依次对二倍体与四倍体杂交受精后null天的形面盘幼虫!nullnull天的眼点幼虫!nullnull天的稚贝!nullnullnull天的幼贝取样其倍性组成均为单一的三倍体这表明利用四倍体与二倍体杂交null获得了倍化率达nullnull
25、null null的三倍体null表nullnull图nullnullnull 图null 流式细胞术检测长牡蛎样本倍性结果nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull . nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull为二倍体亲贝null峰null为nullnull鳃细胞null峰null为nullnull期鳃细胞nul
26、lnullnull为四倍体亲贝null峰null为残留在鳃组织表面的nullnull精细胞null峰null为nullnull鳃细胞null峰null为nullnull期鳃细胞nullnullnull为组幼贝null峰null为nullnull细胞null峰null为nullnull期细胞nullnullnull为组幼贝null峰null为nullnull细胞null峰null为nullnull期细胞null表2 长牡蛎二倍体与四倍体杂交组nullnull及其二倍体对照组nullnull幼虫!稚贝和幼贝的倍性组成nullnullnullnull nullnullnullnullnullnull
27、nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull , nul
28、lnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull组别样本样本数个体规格倍性组成null比例nullnull ) null形面盘幼虫nullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnull null眼点幼虫nullnullnullnull ) nullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull
29、 null nullnull null稚贝nullnull null nullnullnullnull nullnullnullnullnullnull null nullnull null幼贝nullnull nullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnull null nullnull null各期样本与上述相应nullnullnullnullnullnull null nullnull期阙华勇等null雄性四倍体与雌性二倍体杂交培育全三倍体长牡蛎null null的研究nullnullnull 3 讨论与结论311 四倍体与二倍体杂交的可
30、行性产自美国和中国的长牡蛎null存在地理上的差异null可能导致两个种群存在一定程度的生殖隔离本研究中采用的二倍体种贝null分别来自大连!荣成!青岛等中国北方牡蛎养殖的典型海区null两年的实验结果表明null利用四倍体产生的精子均可以完成大批量二倍体卵子的受精其杂交后代的受精率!幼虫生长和变态等各项主要技术指标null接近对照的二倍体幼虫尤其重要的是null杂交后代从幼虫直至变态后的稚贝!幼贝null均为nullnullnull null的三倍体这说明中国北方海区的长牡蛎可以与来自美国的长牡蛎四倍体实现良好的杂交null生产nullnullnull null的三倍体312 杂交培育三倍体
31、的关键技术首先是防止来自二倍体的精子对杂交组造成的污染相对于四倍体产生的精子而言null普通精子的活力较高!量较大一旦有普通精子混入杂交组中null轻者造成三倍体比例的显著下降null重者导致三倍体培育的失败本研究中配子的获取采用了人工解剖法null较好地避免了催产法可能发生的精子污染问题从亲贝的性别鉴定开始null每步操作均采取了严格的消毒隔离措施null并摒弃雌雄同体的二倍体或任何存在疑问的个体此外null该方法可以在短时间内nullnullnull nullnullnullnullnullnullnull获得大量的卵子null平均每批的总卵量达到nullnull nullnull亿在此基
32、础上null将杂交授精的二倍体雌贝数与四倍体雄贝数的平均比例提高到nullnullnullnull大大提高了四倍体精子的利用效率null降低了引进四倍体雄贝所占的生产成本但是null采用高密度的卵子进行杂交授精的一个负面影响是导致杂交组受精率低于二倍体对照组以往的研究中曾发现四倍体产生的精子在授精能力上略逊于二倍体产生的精子nullnullnull nullnullnullnullnull null null nullnullnullnullnullnull null但在正常授精条件下null二倍体四倍体nullnull的平均受精率与二倍体对照组并无显著差异nullnullnull nulln
33、ullnullnullnullnull 因此null本研究中杂交组受精率的降低主要是由于卵子的密度较高对培育具有潜在生物学优势的三倍体来说null稍低于二倍体育苗的平均水平的受精率是可以接受的其次是幼虫培育中防止普通幼虫的交叉污染以及预防病害有几批幼虫在培育过程中发现null null次较大量死亡null主要症状是幼虫面盘脱落!不摄食null而后逐渐下沉死亡这种病症在二倍体与三倍体幼虫中均有发现null疾病的发生可能与水质因素!种贝质量等有关在近几年的牡蛎和扇贝育苗中null屡次发现该问题null有待于进一步深入探讨其原因三倍体幼虫在抗病力方面不存在优势null因此在培育三倍体中null应高度
34、重视幼虫的病害预防再次是三倍体幼虫和成贝的培育和管理目前在牡蛎养殖中普遍采用投放附着基采苗!夹苗浮筏养殖等技术null这种操作增加了丢失三倍体或二倍体混入的概率如果吊养海区存在大量自然孵育的二倍体牡蛎苗null则会导致三倍体比例的下降本研究中null null批次的三倍体稚贝转移到海上养成后null很难检测到三倍体null可能就是在夹苗环节或海上养殖中出现了问题作者认为null解决稚贝培养问题的一个理想途径是培育三倍体单体牡蛎如果配合采用上升流等稚贝培育技术null可以从很大程度上减少人为操作造成的失误null并克服自然海区二倍体牡蛎苗对三倍体造成的冲击null保证培养三倍体牡蛎的安全null
35、进一步提高三倍体的生产效率此外null由于单体牡蛎的生长均匀!壳型好null有利于展示三倍体牡蛎的优良生物学性状培育三倍体单体牡蛎是发展三倍体牡蛎养殖值得引起重视的一个方向nullnullnull 海 洋 与 湖 沼nullnull卷3null3 结论本研究中null个批次的规模杂交实验证明null利用雄性四倍体长牡蛎与雌性二倍体杂交培育三倍体的技术null具有操作简便!效率高的显著特点与其它人工诱导贝类三倍体技术相比null避免了繁琐的人工处理操作程序以及理化诱导手段可能对受精卵造成的伤害null提高了三倍体的孵化率null在三倍体牡蛎的商业生产上具有良好的应用前景致谢 美国null公司的n
36、ullnull nullnullnullnullnull先生为引进四倍体雄性亲贝提供了大量帮助null中国科学院海洋研究所的何义朝研究员!马江虎研究员参与了大量的实验工作null青岛高科园贝类养殖技术开发中心的张明珠!李子云null山东寻山水产公司集团的刘光穆!刘光磊对本实验的开展给予了大力协助null谨致谢忱参考文献王如才null王昭萍null田传远等nullnullnullnullnull null我国太平洋牡蛎null null三倍体育苗与养殖技术研究进展null青岛海洋大学学报nullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnull张
37、国范null常亚青null宋 坚等nullnullnullnullnull null不同方法制备的三倍体长牡蛎养殖效果的比较null水产学报nullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnull常亚青null相建海null王子臣等nullnullnullnullnull null药物诱导虾夷扇贝四倍体的初步研究null海洋与湖沼nullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnull周一兵null李晓艳null屈英等nullnullnullnullnull null太平洋牡蛎三倍体与二倍体
38、特殊动力代谢的比较null海洋与湖沼nullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull
39、nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull2nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnulln
40、ullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull2nullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnul
41、lnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull/ nullnullnullnullnullnull0 nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnulln
42、ullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 2 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull
43、 nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull2nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull/ nullnullnullnullnullnullnullnull0 nullnullnullnullnullnullnullnulln
44、ullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnulln
45、ullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnul
46、lnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnulln
47、ullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull2nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull( nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull
