1、 蛋白印迹膜再生 液 S t r i p p i n g S t r i p p i n g S t r i p p i n g S t r i p p i n g B u f f e r B u f f e r B u f f e r B u f f e r 目录号 P P 0 7 P P 0 7 P P 0 7 P P 0 7 使用手册 实验室使用 ， 仅用于体外- 1 - 产品组成、储存、稳定性： 产品组成 保存 6 6 6 6 次 1 2 1 2 1 2 1 2 次 4 0 4 0 4 0 4 0 次 S t r o n g S t r o n g S t r o n g S t r
2、o n g B u f f e r B u f f e r B u f f e r B u f f e r 室温 6 0 m l 6 0 m l 6 0 m l 6 0 m l 1 2 0 m l 1 2 0 m l 1 2 0 m l 1 2 0 m l 4 0 0 m l 4 0 0 m l 4 0 0 m l 4 0 0 m l M i l d M i l d M i l d M i l d B u f f e r B u f f e r B u f f e r B u f f e r 室温 6 0 m l 6 0 m l 6 0 m l 6 0 m l 1 2 0 m l 1 2 0
3、m l 1 2 0 m l 1 2 0 m l 4 0 0 m l 4 0 0 m l 4 0 0 m l 4 0 0 m l 本产品收到后按照上面指示温度存放， 1 2 个月内有效。 产品介绍： 蛋白印迹膜再生液 ， 用于 W e s t e r n b l o t 中转移了蛋白的膜的重复利用 。 在 W e s t e r n b l o t 中 完 成 了 一 抗 二 抗 结 合 和 后 续 的 化 学 发 光 检 测 后 ， 有 时 还 需 要 检 测 、 A c t i n 、 T u b u l i n 等表达量相对稳定的蛋白作为参照， 或检测其它蛋白进行比较。 通过使用蛋白 印
4、迹膜 再生 液中 特殊 成份 解离 一抗 二抗 和印 迹膜 上抗 原的 结合 从而 去除 一抗 二抗 ，即 可非常方便地重新利用同一张膜检测其它蛋白。与重新跑一个 S D S - P A G E 胶，不仅省 时省力，而且可以消除重新上样而带来的误差，使可比性更强。 产品特点： 1 . 理 想 的 再 生 液 应 该 是 洗 脱 一 抗 二 抗 的 同 时 ， 不 洗 脱 膜 上 结 合 的 蛋 白 （ 抗 原 ） ， 或 者改变抗原的结合性质，但是目前没有一种再生液可以做到只洗脱一抗二抗， 而 完全不洗脱膜上结合的抗原。 也没有一种再生液可以适用于所有不同亲和度的抗 原抗体复合物，太强， 则抗
5、原也容易被洗脱；太弱 ， 则一抗二抗残留太高 。 本试 剂 盒 配 备 了 两 种 适 用 不 同 亲 和 力 抗 原 抗 体 复 合 物 的 配 方 （ S t r o n g b u f f e r 和 M i l d b u f f e r ） ，用户可以根据自己抗原抗体结合强度选用。 2 . 传统分子克隆上介绍的方法对抗原洗脱强度过大，常常会导致蛋白信号的减弱。- 2 - 但是， 本再生液为本公司独有的配方 ， 效力强， 但是对蛋白作用温和 ， 经过多个 抗体的检测试验，通常可以重复利用膜 5 次或者更多。 3 . 不 含有 常用 的 - 巯 基乙 醇， 没有 异味 ，操 作简 单快
6、速， 室温 进行 ，最 快 1 5 - 2 0 钟 就可以完成全过程。 注意事项： 1 . 本 试 剂 盒 里 面 包 括 两 种 配 方 的 再 生 液 （ s t r o n g b u f f e r 和 m i l d b u f f e r ） ， 大 家 可 以 根 据 自 己 使 用 抗 体 和 抗 原 的 亲 和 度 选 用 ， 但 是 两 种 再 生 液 不 可 以 混 合 在 一 起 使 用。 2 . 再 生液 使用 后应 该立 刻盖 紧盖 子， 避免 长时 间和 空间 接触 导致 p H 和 质量 改变 ， 影响使用效果。 3 . S t r o n g S t r o
7、n g S t r o n g S t r o n g b u f f e r b u f f e r b u f f e r b u f f e r 有 轻度 腐蚀 性 ， 为 了您 的安 全 ， 请 带乳 胶手 套操 作 ， 如 果不 小心 溅 入眼睛，请用大量清水冲洗 。 4 . 为了达到最佳效果， 推荐使用 P V D F 膜 ， 尤其 s t r o n g b u f f e r 对 P V D F 膜效果更好。 5 . 适用于 E C L 和类似的化学发光试剂进行的 W e s t e r n 检测。不适用于非化学发光 试剂进行的 W e s t e r n 检测，例如 D A
8、B ， N B T / B C I P 。 6 . 需要再生的膜如果干了， 则洗脱效率非常低 ，因此如果决定要做膜再生 ， 应该 做 完底物化学发光后 ， 立刻将湿润状态的膜放 入 P B P B P B P B S S S S 中 4 4 4 4 保存直到开始再生过程 。 7 . 在 实 践 应 用 中 ， 我 们 发 现 有 时 候 部 分 亲 和 力 很 弱 的 抗 原 抗 体 ， 用 s t r o n g b u f f e r 效 果反而比 m i l d b u f f e r 差，有时候亲和力很强的抗体，用 m i l d b u f f e r 效果却更好 。 因此 ，实 际
9、过 程中 ，亲 和力 强的 抗体 ，即 使 s t r o n g b u f f e r 效果 不好 ，也 一定 要试 试 m i l d b u f f e r 是否效果更好。- 3 - 操作步骤： （实验前请先阅读注意事项） 1 . M i l d B u f f e r （温和再生液）操作步骤 1 ) 在合适大小的容器内将膜完全浸入 2 0 m l 的 M i l d B u f f e r 中， 室温孵育一个小时 ( 或 者换液一次，2 3 0 分钟 ) 。 对 于低 亲和 力的 抗原 抗体 复合 物 ， 半 小时 就够 了 ； 对 于高 亲和 力 ， 可 适当 延长 时 间或者提高
10、孵育温度或者在摇床上轻摇，最佳条件应该实验中调整优化。 2 ) 用 P B S 漂洗 2 5 分钟。 3 ) 重新封闭后便可以进行 W e s t e r n b l o t 的后续操作。 大 多 数 情 况 并 不 需 要 重 新 封 闭 ， 您 可 以 自 己 选 择 是 否 冒 一 些 风 险 省 略 封 闭 的 步 骤。 2 . S t r o n g B u f f e r ( 强力再生液) 操作步骤 1 ) 将膜在蒸馏水中漂洗浸泡 5 分钟。 2 ) 弃蒸馏水，将膜完全浸入 2 0 m l 的 S t r o n g B u f f e r 中，摇床上轻摇 5 分钟。 对 于很 强的 抗原 抗体 复合 物 ， 应 该适 当延 长时 间或 者提 高孵 育温 度 ， 最 佳条 件应 该实验中调整优化。 3 ) 弃 S t r o n g B u f f e r ，漂洗后浸泡入蒸馏水中，摇床上轻摇 5 分钟。 4 ) 膜可以进行封闭和后续的 W e s t e r n b l o t 操作了。
