1、 1 GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS30005.2 v.A GENMED蛋白质西方杂交印迹（DAB 显色）试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 GENMED 蛋白质西方杂交印迹（显色）试剂是一种旨在将复杂的蛋白混合物经 SDS-PAGE 分离后，转移 到固相膜上（如 NC、PVDF）等，经过非特异结合位点的封闭处理， 进行辣根过氧化酶（HRP）标记的抗 体与膜上的蛋白直接（标记一抗）和间接（标记二抗）反应，然后由二氨基联苯胺（diaminobenzidine， DAB） 作用显示为棕色（过氧化酶活性） ，以记录其免疫印迹的权威而经典的技术方法。该技术由大师级
2、科学家精 心研制、成功实验证明的。其适用于目标蛋白的免疫学检测。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，检测 敏感，显色清晰，重复性好。 技术背景 西方杂交印迹技术 （Western Blot） 用于检测固定在固相免疫印迹膜上的 20pg以上蛋白。 辣根过氧化酶 （HRP） 是最常见的酶促显色的交联酶，其比活性高、特异性强、分子量小、稳定。HRP的生色底物显色利用底物 在 HRP和过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化和积累。二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB） 和 HRP作用形成棕褐色不溶性产物，灵敏度高，特异性好。 产品内容 GENMED转印液（Reagent A） 毫升
3、GENMED封阻液（Reagent B） 毫升 GENMED清理液（Reagent C） 毫升 GENMED显色液 A（Reagent D） 毫升 GENMED显色液 B（Reagent E)） 毫升 产品说明书 1 份 保存方式 保存 GENMED 显色液 A（Reagent D）在20冰箱里；保存 GENMED封阻液（Reagent B）和 GENMED 显色液 B（Reagent E）在 4冰箱里, 其余的保存在室温下；GENMED显色液 A（Reagent D） ，避免光照， 有效保证 6月 用户自备 甲醇：用于转印 无离子水：用于配制工作液 PVDF固相膜：用于电泳后的蛋白转移的载体
4、 一抗和辣根过氧化酶（HRP）标记的二抗：用于免疫结合反应 50毫升锥形离心管：用于溶液混匀的容器 塑料袋（盒） ：用于清洗、封阻、结合等的耗材 三角烧瓶：用于配制工作液的容器 2 转印仪：用于蛋白印迹转移的仪器 平式震荡仪：用于孵育和混匀反应 实验步骤 实验开始前，准备好 SDS-PAGE 蛋白电泳。然后进行下列操作。 一、 转印 1 移出 毫升GENMED转印液（Reagent A）到250毫升三角烧瓶里 2 加入50毫升用户自备的甲醇 3 加入175毫升用户自备的无离子水，充分混匀后，标记为GENMED转印工作液（总共250毫升） 4 放进4冰箱里预冷 5 拆除电泳装置，取出电泳玻璃板块
5、 6 分离玻璃板快，切除堆积胶体部分（STACKING GEL） 7 将分离胶体（RESOLVING GEL）浸泡在预冷的 毫升GENMED转印工作液 8 剪下5 cm X 8 cm PVDF转印膜 9 用用户自备的100甲醇浸湿 PVDF转印膜 10取出 PVDF膜，放进 毫升GENMED转印工作液 11用剩下的 毫升GENMED转印工作液使过滤纸湿润 12组成三明治结构进行湿润转印（WET TRANSFER） 13或在4温度下进行电转印过夜运行：电压 50伏，电流 150-200毫安或运行 3至 4小时：电压 50伏， 电流 400毫安 二、 封阻 14移出 毫升 GENMED 封阻液（R
6、eagent B）到 100 毫升三角烧瓶里（注意：使用前，室温预热，并 摇匀GENMED封阻液（Reagent B） ） 15加入80毫升用户自备的无离子水，充分混匀后，标记为GENMED封阻工作液 16移出 毫升GENMED清理液（Reagent C）到500毫升三角烧瓶里 17加入450毫升用户自备的无离子水，充分混匀后，标记为GENMED清理工作液 18将5cm X 8 cm的 PVDF固相膜放进塑料盒里 19加入 毫升GENMED封阻工作液 20置于平式震荡仪上，在室温下孵育45分钟 21小心倒掉GENMED封阻工作液 22加入 毫升GENMED清理工作液 23置于平式震荡仪上，在室
7、温下孵育5分钟 24小心倒掉GENMED清理工作液 25重复实验步骤22至24一次 三、 结合 26将固相膜放进塑料袋里 27加入 毫升含有一抗的GENMED封阻工作液（注意：一抗浓度通常为每毫升1微克） 3 28将塑料袋封口 29确保液体铺满整个固相膜表面 30置于平式震荡仪上，在室温下孵育60分钟 31取出固相膜，放进塑料盒 32加入 毫升GENMED清理工作液 33置于平式震荡仪上，在室温下孵育5分钟 34移去GENMED清理工作液 35重复实验步骤32至34三次 36将固相膜放进新的塑料袋里 37加入 毫升含有二抗的GENMED封阻工作液（注意：二抗浓度为1：10000） 38将塑料袋
8、封口 39确保液体铺满整个固相膜表面 40置于平式震荡仪上，在室温下孵育60分钟 41取出固相膜，放进塑料盒 42加入 毫升GENMED清理工作液 43置于平式震荡仪上，在室温下孵育5分钟 44移去GENMED清理工作液 45重复实验步骤42至44三次 四、 显色 显色实验开始前，将20冰箱里的试剂盒中的GENMED显色液A（Reagent D）和 4冰箱里 GENMED显色 液B（Reagent E）置于室温下，然后分别移出1毫升 A液和 9毫升 B液到50毫升锥形离心管，混匀后标 记为GENMED显色混合液，避免光照。GENMED显色液A（Reagent D）即刻放回20冰箱里。 46加入
9、 毫升室温预热的GENMED显色混合液，铺满整个固相膜表面 47置于平式震荡仪上，在室温下孵育2至 5 分钟，或直至棕褐色沉淀出现 48用镊子夹起固相膜，放进用户自备的无离子水里清洗 49空气中晾干 50数码相机拍照记录 注意事项 1 本产品为5次操作 2 操作时，须戴手套 3 如果使用半干式电转印，则转运运行 1小时，电压为 15 至 20伏 4 GENMED转印工作液建议在4冰箱里预冷 5 显色时间需根据情况调整，不能过长，否则造成过度显色 6 显色液具有毒性或刺激性，注意操作安全 7 GENMED显色液 A（Reagent D）避免反复冻融 8 固相膜显色后数小时将会褪色，不能永久存在
10、9 本产品的 GENMED显色液只能用于辣根过氧化酶（HRP）标记的杂交 10本公司提供化学发光和其它系列蛋白分析试剂产品 质量标准 4 1 本产品经鉴定性能稳定 2 本产品经鉴定显色清晰 使用承诺 杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货 后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定， 保证说明书所述的使用效果。在货到后10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报 告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误 操作所致，本公司不承
11、担由此造成的损失。 友情提醒 IF IT DOESNT WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。 订购信息 编号 名称 规格 GMS30005.2 GENMED蛋白质西方杂交印迹（DAB显色）试剂盒 5次 GMS30005.2A GENMED转印液（Reagent A） 5 0 0 毫 升 GMS30005.2B GENMED封阻液（Reagent B） 5 0 0 毫 升 GMS30005.2C GENMED清理液（Reagent C） 5 0 0 毫 升 GMS30005.2D GENMED显色液 A（Reagent
12、D） 1 0 0 毫 升 GMS30005.2E GENMED显色液 B（Reagent E） 5 0 0 毫 升 GMS30005.1 GENMED蛋白质西方杂交印迹（ECL化学发光）试剂盒 5次 GMS30006 GENMED西方杂交印迹消除试剂盒 2 0 次 产品编号 名称 规格 GMS30005.1 蛋白质西方杂交免疫印迹 ECL化学发光检测试剂盒 5次 GMS30005.2 蛋白质西方杂交免疫印迹 DAB显色检测试剂盒 5次 GMS30006.1 蛋白质西方杂交免疫印迹消除试剂盒 20次 GMS30006.2 化学发光免疫印迹消除试剂盒 20次 GMS30011.1 琼脂糖凝胶法蛋白
13、质西方杂交免疫印迹 ECL化学发光检测试剂盒 5次 GMS30011.2 琼脂糖凝胶法蛋白质西方杂交免疫印迹 DAB显色检测试剂盒 5次 GMS12044 蛋白质西方杂交 10倍印迹膜转移缓冲液 500毫升 GMS12045.1 通用型 ECL免疫印迹化学发光溶液 A液：50毫升 B液：50毫升 1000cm 2 GMS12045.2 高质型 ECL免疫印迹化学发光溶液 A液：100毫升 B液：500微升 1000cm 2 GMS12045.3 持久型 ECL免疫印迹化学发光溶液 A液：50毫升 5 B液：50毫升 1000cm 2 GMS12045.4 超敏型 ECL免疫印迹化学发光溶液 A
14、液：100毫升 B液：500微升 1000cm 2 GMS12048.1 通用型 DAB显色溶液 A液：10毫升 B液：90毫升 GMS12048.2 增强型 DAB显色溶液 A液：10毫升 B液：90毫升 C液：1毫升 GMS12076 蛋白免疫杂交封闭溶液 100毫升 GMS30026.1 通用型 ECL化学发光显影试剂盒 10次 GMS30026.2 高质型 ECL化学发光显影试剂盒 10次 GMS30026.3 持久型 ECL化学发光显影试剂盒 10次 GMS30026.4 超敏型 ECL化学发光显影试剂盒 10次 GMS30027.1 通用型 HRPDAB底物显色试剂盒 10次 GM
15、S30027.2 增强型 HRPDAB底物显色试剂盒 10次 GMS30028 APBCIP/NBT 底物显色试剂盒 10次 GMS30037 蛋白质转印印迹膜萘酚蓝黑（NBB）染色试剂盒 20次 GMS30081 蛋白质转印印迹膜丽春红（Ponceau S）染色试剂盒 20次 GMS12202 丽春红（Ponceau S）溶液 30毫升 GMS30051 HRPTMB底物显色试剂盒 10次 GMS30052.1 通用型 HRPAEC底物显色试剂盒 10次 GMS30052.2 增强型 HRPAEC底物显色试剂盒 10次 联系我们 关于订购详情或技术支持，欢迎来电、来函、传真或电邮 GENME
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