三聚氰胺检测试剂盒.doc

1、上海卓康生物科技有限公司地址：上海黄兴路 1999 弄 3 号楼 1 楼 F 座电话/传真：02155660344 网址：http:/三 聚 氰 胺 检 测 试 剂 盒使 用 前 请 仔 细 阅 读 说 明 书产 地 :美 国 abraxis应 用本 试 剂 盒 适 用 于 污 染 样 品 中 三 聚 氰 胺 的 定 量 分 析 。检 测 原 理本 试 剂 盒 的 原 理 为 竞 争 ELISA。 利 用 萃 取 液 通 过 均 质 及 振 荡 的 方 式 提 取 样 品 中 的 三 聚 氰 胺 进 行 免 疫 测 定 。 将 三 聚氰 胺 HRP 标 记 物 、 标 样 及 样 品 提 取

2、液 加 入 包 被 三 聚 氰 胺 抗 体 的 试 验 孔 中 孵 育 。 在 30 分 钟 的 孵 育 过 程 中 ， 样 品 中 的 三聚 氰 胺 与 HRP 标 记 物 竞 争 结 合 三 聚 氰 胺 抗 体 。 孵 育 完 后 ， 倾 去 孔 内 液 体 ， 洗 涤 除 去 未 结 合 的 三 聚 氰 胺 和 HRP 标 记 物 。每 孔 加 入 清 澈 的 底 物 溶 液 ， 结 合 的 酶 标 记 物 将 无 色 的 底 物 转 化 为 蓝 色 的 物 质 。 孵 育 20 分 钟 后 终 止 反 应 ， 读 取 各 孔OD 值 。 比 较 未 知 样 品 的 OD 值 与 标 样

3、 的 OD 值 ， 就 可 计 算 出 样 品 中 的 三 聚 氰 胺 浓 度 。提 供 的 试 剂 及 材 料试 剂 盒 在 2-8C 贮 存 ， 于 盒 上 标 注 日 期 前 用 完 。1 用 铝 箔 袋 真 空 包 装 的 96 孔 板 （ 128 条 ） ， 内 含 指 示 干 燥 剂 。2 浓 度 分 别 为 0, 20, 50, 100 和 500 g/L (ppb) 的 4 瓶 三 聚 氰 胺 标 准 液 。3 1 瓶 7 mL 三 聚 氰 胺 HRP 酶 标 记 物 .4 1 瓶 14 mL 底 物 .5 1 瓶 14 mL 停 止 液 . (注 意 ! 1N 盐 酸 . 勿

4、 接 触 皮 肤 .)注 意 事 项1 最 好 配 套 使 用 所 提 供 的 试 剂 ， 不 要 同 其 它 公 司 的 产 品 混 用 ， 不 要 将 不 同 批 次 的 产 品 混 用 。2 不 按 试 验 步 骤 稀 释 试 剂 或 样 品 将 导 致 不 准 确 的 结 果 。3 不 要 使 用 过 期 的 产 品 。4 使 用 之 前 将 所 有 试 剂 恢 复 至 室 温 20-280C， 但 不 要 放 置 超 过 24 小 时 。5 三 聚 氰 胺 是 有 毒 化 学 物 质 ， 请 小 心 处 理 。6 终 止 液 是 1N 盐 酸 ， 避 免 接 触 皮 肤 和 黏 膜

5、。 万 一 溅 在 皮 肤 上 ， 立 即 用 大 量 的 水 冲 洗 。7 与 其 它 分 析 技 术 一 样 （ GC、 HPLC） ， 阳 性 结 果 应 用 另 一 种 替 代 方 法 确 认 。试 剂 盒 未 提 供 的 材 料1. 蒸 馏 水 或 去 离 子 水2. 可 吸 取 50ul 的 移 液 器 及 吸 头3. 可 吸 取 50ul 和 100ul 的 八 道 移 液 器 及 吸 头4. 吸 水 纸 或 相 当 的 吸 水 材 料5. 带 450nm 滤 光 片 的 酶 标 仪6. 计 时 器7. 洗 瓶8. 20mM PBS： 0.62g NaH2PO4-2H2O+5.7

6、3gNa2HPO4-12H2O+9gNaCl 蒸 馏 水 定 容 至 1000ml试 验 准 备I） 潮 饲 料 /湿 猫 粮 的 提 取 方 法 ： 稀 释 系 数 ： 1001） 用 搅 拌 机 均 质 样 品 直 至 呈 糊 状 。2） 用 10 mL 60% MeOH/水 萃 取 2 g 样 品 并 剧 烈 涡 旋 振 荡 。3） 超 声 裂 解 样 品 1min。4） 再 次 涡 旋 振 荡 样 品 1min。 静 置 5min 使 其 分 层 。5） 10 000rpm 离 心 10min。6） 用 G6 玻 璃 滤 纸 过 滤 清 澈 的 上 层 相 ， 然 后 用 干 净 的

7、瓶 子 储 存 提 取 液 。上海卓康生物科技有限公司地址：上海黄兴路 1999 弄 3 号楼 1 楼 F 座电话/传真：02155660344 网址：http:/7） 用 样 品 稀 释 液 将 清 澈 的 提 取 液 稀 释 20 倍 （ 0.1mL+1.9 mL 10%MeOH/20mM PBS）8） 此 稀 释 的 样 品 可 直 接 用 于 试 验 。回 收 率 介 于 75-117%。II） 干 饲 料 /猫 粮 的 提 取 方 法 ： 稀 释 系 数 ： 2001） 用 搅 拌 机 均 质 干 猫 粮 样 品 。2） 称 取 1 g 均 质 样 品 ， 加 10 mL 60% 甲

8、 醇 /水 。3） 剧 烈 涡 旋 振 荡 后 超 声 裂 解 样 品 1min。 再 次 振 荡 1min 后 静 置 5min。4） 10 000rpm 离 心 10min。5） 用 G6 玻 璃 滤 纸 过 滤 清 澈 的 上 层 相 ， 然 后 用 干 净 的 瓶 子 储 存 提 取 液 。6） 用 样 品 稀 释 液 将 清 澈 的 提 取 液 稀 释 20 倍 （ 0.1mL+1.9 mL 10%MeOH/20mM PBS）7） 此 稀 释 的 样 品 可 直 接 用 于 试 验 。检 测 步 骤 (注 意 : 标 准 及 样 品 最 好 做 平 行 试 验 以 增 加 准 确 度

9、 .)1. 将 所 有 试 剂 及 样 品 置 于 室 温 下 ， 用 实 验 室 级 的 水 充 满 洗 瓶 。2. 从 铝 箔 袋 中 取 出 相 应 数 量 的 微 孔 条 ， 放 入 干 燥 剂 并 重 新 封 好 袋 子 以 免 微 孔 条 受 潮 。3. 吸 取 100ul 标 样 或 稀 释 的 样 品 提 取 液 到 相 应 的 微 孔 。 每 个 样 品 使 用 一 个 新 的 吸 头 。 每 孔 加 50ul 三 聚 氰 胺 HRP 酶标 记 物 。4. 轻 轻 混 合 30 秒 ， 孵 育 30 分 钟 。5. 孵 育 完 后 ， 将 微 孔 中 的 溶 液 倒 入 水

10、槽 中 ， 用 洗 液 完 全 充 满 微 孔 ， 震 荡 后 倒 掉 ， 重 复 三 次 ， 总 共 洗 板 四 次 。6. 在 吸 水 纸 上 拍 打 ， 尽 可 能 将 水 拍 干 。7. 每 孔 加 入 100ul 底 物 溶 液 。8. 孵 育 20 分 钟 。9. 每 孔 加 入 100ul 终 止 液 。10. 用 酶 标 仪 读 取 450nm 下 的 吸 光 值 。结 果 分 析1. 半 定 量 的 结 果 可 通 过 样 品 吸 光 值 与 标 样 吸 光 值 的 简 单 对 比 而 获 得 :样 品 的 颜 色 比 标 样 的 颜 色 浅 则 三 聚 氰 胺 的 浓 度

11、比标 样 的 浓 度 高 , 样 品 的 颜 色 比 标 样 的 颜 色 深 则 三 聚 氰 胺 的 浓 度 比 标 样 的 浓 度 低 。2. 定 量 分 析 需 要 绘 制 以 标 样 吸 光 值 为 X 轴 ,以 标 样 的 浓 度 的 log 值 为 Y 轴 的 曲 线 图 。 画 一 条 穿 过 标 样 点 的 直 线 ， 样 品的 吸 光 值 位 于 该 直 线 上 。 样 品 的 吸 光 值 在 Y 轴 上 的 对 应 点 为 样 品 的 浓 度 。 如 果 样 品 吸 光 值 大 于 最 小 标 样 的 吸 光 值 ，则 样 品 的 浓 度 20 ppb； 如 果 样 品 吸

12、光 值 小 于 最 大 标 样 的 吸 光 值 ， 则 样 品 的 浓 度 500 ppb。检 测 极 限预 计 本 试 剂 盒 的 最 小 检 测 极 限 为 10ppb。特 异 性三 聚 氰 胺 检 测 试 剂 盒 与 三 嗪 类 似 物 的 交 叉 反 应 可 用 最 低 检 测 剂 量 （ LLD， 约 为 90%B/Bo） 或 用 抑 制 50%的 吸 光值 所 需 的 剂 量 （ 50%B/Bo） 表 示 。化 合 物 LLD（ ppb） 50%B/Bo (ppb)三 聚 氰 胺 10 400三 聚 氰 酸 40 10,000三 嗪 10,000 10,000三 嗪 二 铵 0.1 2代 理 ： 上 海 市 卓 康 生 物 技 术 有 限 公 司