1、用SEP-PAK C18柱作为氨基酸样品预处理柱的实验研究周成贵孙玮王一健赵志斌崔应瑞李才安（第三军医大学中心实验室，重庆，630038）生物样品（蛋白质水解液、血浆中色素）及微量元素锌(Zn)对氨基酸分析均有不同程度的影响。Ito和Wunderly等人先后的研究结果证实了活性炭对氨基酸具有吸附性1,2，故不能用于氨基酸样品的预处理。为了适应蛋白质氨基酸研究的需要，本文用Sep-PakC1柱作为蛋白质水解液脱色及生物样品中Zn的吸附试验，观察Sep-PakC18柱对蛋白质水解液的脱色效果、对氨基酸含量的影响、以及对发Zn元素的吸附效果3实验部分（一）实验分为两个组1.A组：比较采用Sep-Pa
2、kC18柱过柱前后氨基酸含量的变化。分为实验组和对照组（实验组为过柱后氨基酸变化，对照组为未过柱的氨基酸含量）。2.B组：比较采用Sep-PakC18柱过柱前后头发中Zn含量变化，分为实验和对照两组（表略）。（二）材料1.Sep-PakC18柱系Millipore公司产品，此柱经甲醇活化处理后可重复使用。2.氨基酸标准液系上海生物制品研究所产品，其浓度配成2.5mol/ml。（三）仪器及条件1采用美国贝克曼公司(Backman 121MB)型氨基酸分析仪按照体液方法测定氨基酸含量。2采用美国实验仪器公司IL-951型原子吸收光度计测定发Zn含量。（四）试剂1茚三酮配方按Beckman配方进行配
3、制。2缓冲液采用Beckman公司生产pH2.83缓冲液，按5倍稀释后用于氨基酸洗脱剂。（五）样品收集与处理1生物样品的处理：取血浆1.80ml+1.20ml 10磺基水杨酸。以15000rpm/min，离心15null20min（沉淀蛋白质）。取上清液经Sep-PakC18柱过滤后上机分析。2生物样品发Zn的收集与处理：收集小儿发样100mg人，用剪刀剪至2mm，放于50ml烧杯中，用(AR)级丙酮20ml洗发样，加去离子水适量，重复3次。按照发样消化处理方法，将发样制成待测液后，再经Sep-PakC18柱过滤，取上清液上机分析。表1过滤前后氨基酸分析测定含量比较(n=10)结果和讨论实验结
4、果如表1所示经Sep-PakC18柱过滤前后比较，十种氨基酸含量均无明显变化(P0.05)。除天门冬氨酸回收率94.20外。苏氨酸、丝氯酸、谷氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、瓜氨酸、缬氨酸等9种氨基酸的回收率均在97.00以上。经Sep-PakC18柱过滤前后发Zn含量比较，过C18柱前后的差异非常显著(P0.01)，对照组、实验组均值(n=34)分别为175.4332.806mg/g、26.1340.764mg/）。过柱后Zn的吸附率在85.5以上。（一）有关活性炭和草酸对氨基酸吸附以及对蛋白水解液中脱色方面的研究，近年来已有这方面的报道4,5。以上两方法对蛋白水解液脱色效果不太理想
5、，而且对氨基酸、特别是一些芳香族氨基酸有不同程度的吸附，影响了氨基酸的正常含量。我们用Sep-PakC18柱作为蛋白质水解液脱色并观察Sep-PakC18柱对氨基酸含量变化（目前尚未见这方面的报道），结果表明：脱色十分明显，经过Sep-PakC8 柱后所有水解液为无色透明的液体。观察Sep-PakC18柱对氨基酸吸附，实验组与对照组比较无明显差异(P0.05)。说明Sep-PakC8 柱作为蛋白质水解液脱色的方法是准确可靠的。（二）生物样品（发样、血浆）中都含有微量元素Zn。Zn元素可与氨基酸分析仪的离子交换树脂结合后形成络合物6，从而污染和损害离子交换树脂，使氨基酸分离柱寿命缩短。我们通过近
6、两年来采用Sep-PakC18柱过滤血浆样品，使血浆样品中的元素Zn和样品中的杂质被Sep-PakC18柱所吸附，从而保护了离子交换柱，延长了其寿命（延长近一倍）。观察了Sep-PakC8 柱对小儿发Zn含量的吸附，结果表明：实验组与对照组比较差异非常明显(Pnull001)再次说明了Sep-PakC18柱不但具有较好的脱色效果，而且对微量元素Zn有较强的吸附能力。综上结果表明：Sep-PakC18柱用于生物样品（蛋白质水解液、发样、血样）的预处理，是目前较为理想的一种方法。参考文献1T1to,BullAgrChemSoc.Japan,12,204(1936).2KWunderly,HelvC
7、him Acta,17,523(1984).3 周成贵等，四川省第五次原子吸收学术报告会论文集，四川江油，447,1990.4 邹学满等，氨基酸杂志,(2).21(1985).5 吴祖道等，氨基酸杂志，(1),28(1986).6 周立东主编，大型精密仪器讲义氨基酸分析仪器及方法，广东省科委条件处印，152页，1983.（收稿日期：1990年10月14日）Application of Sep-Pak C18 Cofn as Pre-Columnin Amino Acid Analysis Zhou Chenggui,Sun Wei,WangYijian,Zhao Zhbn,Cui Yingru
8、i and Li Caa,CentralLatoratory,Third Milary Medical College,Chongqing,630038.Sep-Pak C8 column was used as pre-column inamino acid analysisIt was found that this pretreatmentwas effective in removing pigments from amino acidhydrolysates and its adsorption power to zinc was strong.The pretreatment ha
9、s no adverse effects on thedetermination of amino acid content in biologicalsamples.离子色谱法（紫外检测）测定肉制品中的硝酸根和亚硝酸根* 朱岩（浙江省测试技术研究所，杭州，310012）岳伟民朱利中（杭州大学化学系，310028）硝酸盐或亚硝酸盐作为食品发色剂，在腌制肉制品工业中得到广泛应用。由于亚硝酸盐能引起急性中毒，并能形成强烈的致癌作用物亚硝胺类，因此食品卫生要求控制硝酸盐和亚硝酸盐的含量。一般硝酸盐含量小于500mg/kg，亚硝酸盐不得超过50mg/kg。对NO2-、NO3-的分析，有多种分析方法：普
10、通的化学方法操作复杂，费时1；近来有人报道用离子色谱法测定NO2-、NO32,3。虽然该方法快速、简便，但由于腌制品中的Cl-含量很高，用一般的电导检测十分困难，NO2-、NO3-在紫外210nm有强烈吸收，而Cl-的紫外吸收很小，因此我们以紫外检测法对NO2-、NO3-进行测定。实验部分（一）仪器实验是用Dionex HPIC-AG4.HPIC-AS4保护柱和分离柱装在Varian液相色谱仪上，配以VISTA100紫外检测器，双笔记录仪对数据进行记录，岛津UV-3000紫外可见分光光度计对Cl-、NO2-、NO3-进行紫外扫描。（二）试剂Cl-、NO2-、NO3由分析纯的NaCl、NaNO2、NaNO3和二次去离子水配制，流动相由分析纯的NaHCO3Na2CO3和二次去离子水配制。（三）色谱条件参照文献2,3我们选用流动相为1mmolL-1NaHCO3/1mmolL-1Na2CO3，流速为2ml/min，紫外检测波长为210mm，检测量程为0005AU，进样体积10l。结果与讨论（一）紫外检测波长的选择在2ml/min的lmmolL-NaHCO3/mmolL-1Na2CO3淋洗的条件下，Cl-、NO2、NO3的保留时间分别为110、170260min，由于Cl-和NO2-的峰
